虹鳟、山女鳟及其杂交子代（虹鳟♀×山女鳟♂）的微卫星分析

摘 要：利用虹鳟（♀）和山女鳟（♂）进行种间杂交，获得了90.00%的受精率，80.52%的发眼率，90.68%的孵化率和30.68%的鱼苗成活率。运用13个微卫星分子标记对杂交亲本与杂交子代进行了分子遗传机制的研究，结果表明：(1) 在13个微卫星位点中，3个位点只在虹鳟中得到扩增产物，6个位点扩增出虹鳟和山女鳟清晰的差异条带，另外4个位点在双亲中没有扩增出显著差异条带；(2) 双亲遗传分化显著，虹鳟和山女鳟存在杂交现象，虹鳟和山女鳟杂交子代的遗传符合孟德尔遗传规律，属两性融合生殖，是真正意义上的杂交种。 (3) 杂交后代与虹鳟和山女鳟的遗传相似性系数分别为0.4617和0.5965，遗传距离分别为0.7729和0.5168, 表明杂交F1与两亲本的遗传差异不是对等的, 而是偏向父本一方，UPGMA系统树也同样证明了这一点。本研究结果将为虹鳟、山女鳟两种鱼的杂交育种工作的进一步开展提供依据。     

哲罗鲑(♂)与细鳞鲑(♀)属间杂交不相容现象的SSR分析

利用哲罗鲑(Hucho taimen,♂)与细鳞鲑(Brachymystaxc lenok,♀)进行属间杂交,出现了仔鱼上浮率低和畸形率高等杂交不相容现象,为探究哲罗鲑与细鳞鲑属间杂交不相容现象产生的原因,本研究采用30对微卫星引物对杂交亲本及F1进行遗传分析.结果表明:(1)30对微卫星引物中,2对在细鳞鲑中未出现扩增带,3对在哲罗鲑中未出现扩增带,其余25对在双亲中均扩增出差异条带;(2)在双亲中具有差异的25个微卫星位点中,除Omi84TUF位点在1个F1出现非亲条带外,其余位点所有条带均来自于双亲,其中21个位点完全符合孟德尔遗传规律,表明哲罗鲑与细鳞鲑属间杂交属两性融合生殖,大部分遗传物质来源于父母本双方;(3)4个位点Omi105TUF、Omi156TUF、Omi165TUF及Omy16DIAS在部分子代中出现2条母本条带或父本条带缺失现象,可能是部分亲本染色体在配对或分离过程中产生了异常,出现染色体丢失或异源加倍现象,非整倍体的较早出现可能是导致杂交不相容的直接原因;4)F1与哲罗鲑和细鳞鲑的遗传相似系数分别为0.673 5和0.729 8,遗传距离分别为0.395 3和0.315 0,表明F1与细鳞鲑亲缘关系更近,UPGMA聚类分析也支持这一观点.     

日本金鳟(Oncorhyncus mykiss)和道氏虹鳟及其杂交后代生产性能的比较研究

本文对引进种日本金鳟和道氏虹鳟及其杂交后代的生存力及稚鱼的生长速度等进行了比较研究。结果表明,五项生存力指标由低到高的顺序均是:日本金鳟、杂交金鳟(F1 )、杂交金鳟自交后代(F2 )、野生型虹鳟(P <0 . 0 1 ) ,杂交日本金鳟对纯系日本金鳟体现出杂种优势,但是对于道氏虹鳟来说未体现优势,是由于道氏虹鳟是经过长期选育的良种,杂交后代遗传了它的部分优良性状。     

虹鳟、山女鳟的营养与饲料

野生虹鳟鱼主要摄食水生昆虫、落水昆虫和小型鱼虾。被驯化成家养鱼类的初期,人工饲料主要是生鲜鱼制成的鱼酱或软颗粒饲料。直到本世纪初期,美国的科学家率先开始研究以虹鳟鱼为主的鲑鳟鱼类的营养学和饲料问题。20世纪60年代全价硬颗粒饲料问世以来,虹鳟鱼的养殖效率大幅度提高。山女鳟是60年代日本由土著野生山女鳟经人工驯养成的池养鱼类,与虹鳟鱼同属鲑科鲑属,摄食习性与虹鳟相似。山女鳟家化驯养期间,虹鳟鱼全价硬颗粒饲料已经研制成功。研究者借鉴虹鳟鱼饲料配制技术开发了山女鳟全价饲料。此后数十年的养殖实践证明山女鳟的营养需求与虹鳟鱼大体相似。但是虹鳟、山鱼鳟的营养与饲料问题的研究并未终止,至今仍是世界养鳟业的重要课题。     

３种虹鳟养殖群体的遗传结构及遗传多样性分析

从40个随机引物中筛选出20个,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术,对甘肃金鳟、道氏虹鳟和美国金鳟3个群体进行了遗传结构和遗传多样性分析.结果表明,甘肃金鳟、道氏虹鳟、美国金鳟群体多态位点百分比分别为82.79%、73.33 %、77.87%;平均等位基因数分别为1.8239、1.7429、1.7887,有效等位基因数分别为1 4823、1 4281、1.4527;基因多样度分别为0.2820、0.2528 、0.2675,Shannon遗传多样性指数分别为0.4219、0 3801、0 4022;以上参数表明,3个群体的遗传多样性均处于偏高的水平,且以甘肃金鳟的遗传多样性最为丰富.甘肃金鳟与美国金鳟之间的遗传距离最大,道氏虹鳟与美国金鳟之间的遗传距离最小.遗传分化指数表明,种内群体间的遗传分化程度很低,而群体内个体间的分化程度很高,变异主要来源于群体内个体间.综合分析认为,甘肃金鳟遗传多样性偏高,有进一步选育的遗传潜力;同时,群体内遗传分化程度较大,说明品种的纯度可能较低,经济性状不够稳定,需进一步选育.     

大西洋鲑、三倍体虹鳟和金鳟的肌肉营养成分与品质特性

为了解大西洋鲑(Salmo salar)、三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、金鳟(Oncorhynchus mykiss)3种鱼肌肉营养成分和品质特性,利用生化分析、物性分析方法分析3种鱼肌肉的营养成分、氨基酸和脂肪酸组成、肉色、系水力和质构特性。结果表明,大西洋鲑、三倍体虹鳟、金鳟肌肉的水分质量分数分别为62.91%、67.15%、73.02%,粗蛋白质量分数分别为22.39%、21.03%、22.11%,粗脂肪质量分数分别为14.64%、17.16%、5.11%。3种鱼肌肉的滴水损失、黄色值(b~*)、羟脯氨酸含量、内聚性均显著不差异(P0.05)。3种鱼肌肉的硬度和咀嚼性由低到高依次为大西洋鲑、三倍体虹鳟、金鳟,而pH值的结果则与之相反(P0.05)。大西洋鲑和三倍体虹鳟肌肉的灰分、解冻损失、蒸煮损失、回复性、弹性和红色值(a~*)差异不显著(P0.05),但灰分、蒸煮损失、回复性均小于金鳟肌肉的对应指标(P0.05),弹性和红色值(a~*)则均大于金鳟肌肉的对应指标(P0.05)。大西洋鲑、三倍体虹鳟、金鳟肌肉中必需氨基酸含量占氨基酸总量分别为42.28%、41.84%、41.63%(质量分数),必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)比值分别为73.25%、71.94%、71.32%,均符合联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)对优质蛋白质的评价标准;3种鱼肌肉中均检测到22种脂肪酸,组成丰富,其中不饱和脂肪酸含量较高。综上所述,3种鱼的肌肉都是符合人体营养需求的优质水产品,其中大西洋鲑和三倍体虹鳟肉质接近,且都优于金鳟的肉质。     

3种虹鳟养殖群体的遗传结构及遗传多样性分析

从40个随机引物中筛选出20个,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术,对甘肃金鳟、道氏虹鳟和美国金鳟3个群体进行了遗传结构和遗传多样性分析。结果表明,甘肃金鳟、道氏虹鳟、美国金鳟群体多态位点百分比分别为82.79%、73.33%、77.87%;平均等位基因数分别为1.8239、1.7429、1.7887,有效等位基因数分别为1.4823、1.4281、1.4527;基因多样度分别为0.2820、0.2528、0.2675,Shannon遗传多样性指数分别为0.4219、0.3801、0.4022;以上参数表明,3个群体的遗传多样性均处于偏高的水平,且以甘肃金鳟的遗传多样性最为丰富。甘肃金鳟与美国金鳟之间的遗传距离最大,道氏虹鳟与美国金鳟之间的遗传距离最小。遗传分化指数表明,种内群体间的遗传分化程度很低,而群体内个体间的分化程度很高,变异主要来源于群体内个体间。综合分析认为,甘肃金鳟遗传多样性偏高,有进一步选育的遗传潜力;同时,群体内遗传分化程度较大,说明品种的纯度可能较低,经济性状不够稳定,需进一步选育。     

虹鳟pmela基因的克隆及其在不同发育阶段和组织中的表达分析

前黑素小体蛋白a (premelanosome protein, pmela)基因是黑色素合成通路中的关键基因之一，对动物的体色有着重要影响。为探讨pmela基因在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)体色变异中的作用，本研究利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术对pmela基因cDNA全长进行克隆并运用生物信息学方法分析该基因的序列特征，同时采用qRT-PCR比较pmela在野生型虹鳟(虹鳟)、黄色突变型虹鳟(金鳟)和杂交F1代受精期至孵化后3个月不同发育时期及成鱼不同组织中的相对表达量。研究获得pmela基因cDNA全长序列3 476 bp，包含2 532 bp开放阅读框，编码843个氨基酸。序列分析发现，Pmela为疏水性蛋白且存在PKD功能结构域。同源性比对发现，虹鳟Pemla氨基酸序列与红鲑(Oncorhynchus nerka)的同源性高达97.75%；进化分析结果显示，虹鳟与红鲑的亲缘关系最近，与人类(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的亲缘关系最远。qRT-PCR结果显示，pmela基因在虹鳟与金鳟胚胎及出膜后各时期均有表达，在受精期至16细胞期中的表达为虹鳟高于金鳟，出膜后该基因在金鳟背部皮肤中的表达均高于虹鳟，且在4细胞期、16细胞期、原肠期、神经期、体节期、心跳期、1 day post-hatching (1 dph)、3 dph、5 dph、7 dph、10 dph、1 month post-hatching (1 M)和2 M时期中，虹鳟与金鳟的表达存在显著差异。在各组织中，pmela基因在虹鳟与金鳟背部皮肤和眼睛中的表达显著高于其他组织。在杂交F1代中，pmela基因在不同发育时期和组织中的表达模式与双亲类似，且在大部分相同时期和组织中的表达与双亲存在显著差异。上述结果表明，pmela基因的表达量高低与虹鳟体色具有一定的相关性，且可能参与其体色的形成过程。本研究结果为进一步研究pmela基因在虹鳟体色变异中的作用提供基础资料。     

大黄鱼(♀)与(鱼免)( ♂)杂交的遗传分析

用大黄鱼(♀)和(鱼免)( ♂)进行属间杂交,获得了56.25%的受精率,45.24%的孵化率和0.65%的鱼苗成活率.对杂交亲本与子代进行了微卫星和AFLP标记的比较分析,结果表明:4个微卫星位点(LYC0003,LYC0006,LYC0007,LYC0008)都可扩增出清晰的亲本差异条带,26个F1个体中均未出现雄鱼特有条带;4 对选择性扩增引物(E-ACC/M-CAG,E-AAC/M-CAT,E-AAC/M-CTA,E- AGC/M-CTC)共检出326个AFLP条带,143条母本特异性条带中有132 条出现在子代中,94 条父本特异性条带中只有18 条出现在子代中,子代中另出现了33 条非亲条带.F1个体之间的遗传相似系数为0.891,与母本、父本间的遗传相似系数分别为0.853、0.271;F1个体之间的遗传距离为0.116,与母本、父本间的遗传距离分别为0.159、1.307,表明杂交子代与母本大黄鱼之间具有极高的遗传同质性,属异精雌核发育个体.     

雌核发育草鱼的遗传结构分析和微卫星鉴别方法的建立

采用微卫星标记检测草鱼群体的遗传多样性,并根据纯合度的变化建立了雌核发育草鱼的鉴别技术。结果显示,8个位点共扩增出33个等位基因;在普通草鱼中,平均纯合度和PIC分别为0.203 1和0.552 8;在雌核发育群体中,则为0.716 1和0.357 2;2个群体间遗传相似度为0.873 3。其中,5个位点在雌核发育草鱼中纯合度明显提高,雌核发育草鱼在这5个位点的扩增总条带数为5~7个,普通草鱼则为8~10个,由此可100%区分2个草鱼群体。通过概率计算,理论鉴别概率达到99.92%。研究表明,雌核发育技术对草鱼的群体遗传结构改变较大,是快速建立纯系、固定优良性状的有效手段;根据群体遗传纯合度的改变、扩增条带数目差异,应用多态性微卫星分子标记可以简单、有效地区分雌核发育群体(或与之相似的高度近交群体)与普通群体。     

人工养殖山女鳟幼鱼的生长特性

于2004年5月30日-2005年2月30日对人工养殖条件下山女鳟(Oncorhynchus masou masou)的生长特性进行观察,观察阶段为山女鳟初孵鱼苗至11月龄。实验期间水温为自然常温(4.7~16.8℃)。结果表明:在这一生长阶段,山女鳟体质量瞬时增长率与水温变化有关,体质量增长量和增长率随水温的升高而加快,高峰出现在5月龄(2004年8月),水温为16.83℃,但山女鳟的最适生长温度还有待进一步研究确定;体质量增长量、相对增长率与体质量瞬时增长率的变化相一致;山女鳟的生长指标和生长常数在人工养殖条件下变化一致,并显现出规律性;从体长和体质量之间的关系可认为山女鳟幼鱼阶段体长和体质量的生长基本同步,生长式型为匀速生长;山女鳟幼鱼阶段的肥满度与水温变化不一致,随着月龄的变化而波动;饲料的营养配比满足不了各个生长期的营养需求,因此,对山女鳟营养需求及配合饲料的研制还有待进一步的研究。[中国水产科学,2007,14(1):160-164]     

美国金鳟的同工酶分析

本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对养殖型美国金鳟眼(E)、心(H)、肾(K)、肝(L)、肌肉(M)五种组织的乙醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6- PDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和过氧化物酶(POD)等7种同工酶进行电泳研究。结果显示：美国金鳟中ADH、EST、G-6-PDH、GDH、LDH、MDH、POD、SOD 7种同工酶都有不同程度的组织特异性；美国金鳟群体同工酶分析共记录18个基因座位,其中有8个基因座位为多态,等位基因总数为26个,从而得出多态座位百分数P为44．44％,位点有效等位基因数Ne=1．4444,表明美国金鳟群体遗传多样性偏高。     

金鳟苗种长途托运试验

金鳟于 1996年从日本引进我国 ,现已大面积推广 ,成为我国养鳟业继虹鳟鱼后第二个可以实施全人工养殖的优良品种。随着推广区域的迅速扩展 ,苗种运输成了一个重要的生产环节。本文初步探讨了金鳟大规格苗种长途托运技术。1　材料与方法1 1　试验用金鳟苗种为北京顺通虹鳟鱼养殖中心人工采卵繁殖的 11月龄鱼 ,规格整齐无病无伤无畸形 ,符合出场产品质量标准。起运前 5天选出5 0 4尾放入 3ｍ2 流水池暂养 ,停止投饵。起运前一天 16时打样 ,平均每尾 83 3克 ,然后将苗种移入鱼篓。篓内水面积 1 38ｍ2 ,水深 0 3ｍ ,水体积0 4 1ｍ3,水温 10 0…     

热休克诱导马苏大麻哈鱼三倍体的初步研究

为探索马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)三倍体育种技术方法,更好地解决其个体小、生长慢和性成熟后死亡率高等问题,采用热休克法进行三倍体诱导实验,设4个诱导温度(24、26、28、30℃),2个起始诱导时间(15 min、20 min)和2个持续诱导时间(15 min、20 min)共分13个实验组和1个对照组。结果显示,13个实验组均能诱导出三倍体个体,而不同温度组的诱导率差异显著,分别为13.3%、31.65%、52.28%和78.81%(P<0.0.5)。随着温度的上升,孵化率呈显著降低的趋势。结果表明,温度是影响诱导成功的关键因素,利用热休克诱导受精卵制备陆封型马苏大麻哈鱼三倍体苗种的方法是可行的,三倍体诱导的最佳条件是:水温28℃,卵子受精后15 min持续处理20 min,发眼率(72.57±0.26)%,孵化率(60.92±0.31)%,三倍体率53.1%,综合诱导效果最佳。     

二倍体与三倍体山女鳟的血液学比较分析

对二倍体和三倍体山女鳟(Oncorhynchus masou)的全血、血浆各种特征及结构进行血液学分析,结果表明,三倍体山女鳟的红细胞(RBC)体积与二倍体的比值为1.48±0.19.三倍体的红细胞数和红细胞压积(Hct)均显著低于二倍体,但其血红蛋白(Hb)浓度与二倍体的无显著性差异(P>0.05).这些血液生理学数据表明,二倍体与三倍体山女鳟可能具有相似的氧运输和有氧代谢能力.血液生化结果显示,二倍体和三倍体山女鳟的生化指标检测值不存在显著性差异(P>0.05);回归分析结果显示,与二倍体和三倍体山女鳟血浆参透压(Osm)相关性最大的生化指标均为Na+浓度、血糖浓度和尿素氮浓度.虽然三倍体与二倍体山女鳟血红蛋白含量之间不存在显著性差异,但由于三倍体的红细胞数远低于二倍体,加之三倍体的全血黏度较二倍体的高,在应激或低溶解氧的情况下,三倍体将无法动员更多的红细胞进行组织有氧代谢,因此,与二倍体相比,三倍体山女鳟的组织缺氧或窒息的风险更大,对溶解氧的要求更高.     

光照强度对人工养殖的山女鳟幼鱼生长性能的影响

在水温12.1～13.9°C下和直径80 cm、高60 cm,水深40 cm的圆形选育缸中研究了不同光照强度(1200lx、600 lx和300 lx)对平均体质量为10.10±0.8g的山女鳟(Oncorhynchus masou masou)幼鱼生长和存活的影响。结果表明,光照强度显著影响山女鳟幼鱼特定生长率(SGR)、肥满度(CF)和变异系数(CV)(P<0.01),高光照强度组SGR和CF值显著高于两个低光照强度组,而CV值则是高光照强度组显著低于两个低光照强度组;高光照强度组摄食率(FI)明显高于两个低光照强度组。实验表明,适度增强光照强度有利于山女鳟幼鱼的生长,这对于优化山女鳟幼鱼培育条件具有指导意义。     

不同群体山女鳟及其杂交F1的生产性能比较

本文系统研究了我国引进的两个山女鳟（Oncorhynchusmasoumazou）群体及其杂交F1代的生产性能。结果表明，（1）两个杂交组合的早期生产性能，如授精率、发眼率和孵化率等不存在显著优势，自交组合BH08♀×BH08♂的最终成活率为63．37％，远低于其他三组的成活率（P〈0．01）；（2）378d的生长对比试验表明，杂交组合与自交组合的体质量、绝对增重率、特定生长率和肥满度等存在一定差异，养殖时间对这些指标的影响达到极显著水平（P〈0．01），但组间差异仅为显著水平（P〈0．05）或没有差异（P〉0．05）；（3）378d的生长对比试验结束时，两个杂交组合均表现出一定的杂种优势。方差分析表明，不同生长阶段对杂交组合杂种优势率的影响极显著（P〈0．01），不同组合间的杂种优势率也存在极显著差异（P〈0．01）。     

饲料蛋白质水平对马苏大麻哈鱼幼鱼生长指标和饲料系数的影响

为了解在水温7.4~11.3℃的流水池养殖条件下马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou masou)幼鱼饲料中不同蛋白质水平对其生长指标和饲料利用效率的影响,设计了5组蛋白质水平为40.40%、44.84%、50.16%、54.82%和59.03%的养殖试验,养殖期为150d。试验过程中进行了水质化学指标的监测,结果表明随着饲料蛋白质水平增高,总氮、氨氮、亚硝酸盐氮有升高的趋势,40.40%组与44.84%、50.16%、54.82%及59.03%组总氮具统计学意义差异;59.03%组与其余4组氨氮、亚硝酸盐氮具统计学意义差异;40.40%、44.84%、50.16%、54.82%4组间总磷、硫化物和COD无统计学意义差异,59.03%组与上述4组间总磷、硫化物和COD均具统计学意义差异。生长试验结果表明:随蛋白质水平升高,40.40%、44.84%、50.16%组间终末体质量、增重率有显著升高的趋势(P<0.05),54.82%、59.03%组间终末体质量显著降低;50.16%试验组与其余4组特定生长率具统计学意义差异。各试验组随蛋白质水平升高,饲料系数有下降的趋势,40.40%、44.84%组的饲料系数是2.02、1.98,显著高于50.16%、54.82%、59.03%试验组,饲料蛋白质含量从40.40%增加到59.03%,饲料系数有逐渐降低趋势。通过生长指标和折线模型计算马苏大麻哈鱼幼鱼饲料适宜蛋白质含量为50.78%。     

图们江陆封型马苏大麻哈鱼的个体繁殖力

为研究马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)资源保护策略和人工繁殖技术,对人工养殖的图们江陆封型马苏大麻哈鱼繁殖力进行了研究。选取122尾不同养殖区域卵巢发育Ⅳ-Ⅴ期的马苏大麻哈鱼样本(其中延吉42尾、山东35尾、北京45尾)进行统计分析。试验马苏大麻哈鱼体重209~845 g,平均为(512±206)g;体长17.0~39.5 cm,平均为(26.81±6.53)cm。结果表明,大麻哈鱼的绝对繁殖力410~3 075粒,平均为(1 485±797)粒;体重相对繁殖力1.93~3.64粒/g,平均为(2.72±0.47)粒/g;体长相对繁殖力23.60~77.85粒/cm,平均为(51.35±17.60)粒/cm;Ⅴ期卵巢性腺指数14.85%~27.93%,平均为(20.97±3.57)%;繁殖力随着体重、体长、性腺指数增加而提高(P0.01)。通过人工驯养和移植培育,改变了马苏大麻哈鱼在自然环境下雌鱼卵巢发育不成熟的现象,而且繁殖力明显提高。移植到北京和山东后,其繁殖力极显著高于原产地(P0.01)。国产陆封型马苏大麻哈鱼具有规模化人工繁育的优势,能够为野生种群资源增殖提供苗种补充。     

Color vision, spectral sensitivity, accommodation, and visual acuity in juvenile masu salmon Oncorhynchus masou masou

ABSTRACT:   Color vision, spectral sensitivity, accommodation, and visual acuity were examined in juvenile masu salmon Oncorhynchus masou masou to obtain fundamental information about the visual system. Two types of S-potentials were recorded from 415 horizontal cells in isolated retinas from 34 cultured freshwater masu salmon (114–219 mm standard length, SL). Although horizontal cells recording S-potentials were not identified, the horizontal cells were confirmed because their responses were maintained while the stimulus remained. The variety of chromaticity (C)-type S-potentials indicated well-developed color vision. The analysis of the luminosity (L)-type S-potentials indicated that the peak spectral sensitivity was at 522 nm. S-potentials were also recorded in response to ultraviolet light. The direction and extent of lens movement induced by electrical stimulation was measured in 12 cultured masu salmon (99.0–142.5 mm SL). The results indicated that the visual axis was upward and forward, and that the range of accommodation was from 0.79 × SL in front of the eye to infinity. In histological analysis of the retinas of five wild smolts (100–118 mm SL), the maximum cone densities (276–345 cones/0.01 mm²) were detected in the ventral to temporal regions. The visual acuities assessed by histological methods were 0.069–0.075.