异源四倍体鲫鲤肝组织线粒体DNA的研究

用密度梯度离心和DNaseI、RNase消化法从异源四倍体鲫鲤(R8)和鲫鲤F2肝组织中提取和纯化线粒体DNA(mtDNA).用9种限制性内切酶对异源四倍体鲫鲤和鲫鲤F2的mtDNA进行了分析,结果表明XbaI和BglⅡ两种限制性内切酶在异源四倍体鲫鲤mtDNA上存在酶切位点多态性.通过凝胶电泳测得异源四倍体鲫鲤mtDNA相对分子量平均约10.29×106道尔顿,分子大小为16.20kb;鲫鲤F2mtDNA相对分子量为10.18×106道尔顿,分子大小为16.02kb.根据单酶解和双酶解的片段数目和分子大小,构建了异源四倍体鲫鲤mtDNA的7种限制性内切酶(KpnI、PstI、SalI、XhoI、BglⅡ、BamHI和XbaI)酶切图谱.     

尼罗非鲫和奥利亚非鲫线粒体DNA遗传差异的研究

以酶切MitochondrialDNA（mtDNA）技术检测了尼罗非鲫和奥利亚非鲫的mtDNA。测得两种鱼线粒体基因组的大小都约为16．83kb。在使用的6种酶中，只有PvuⅡ在所检测的15尾尼罗非鲫mtDNA上产生了多态片段，3尾鱼的mtDNA产生了4个片段，12尾鱼的mtDNA产生3个片段。而6种酶在所有15尾奥利亚非鲫中均未检到多态片段。比较两种鱼的mtDNA酶切片段，仅PvuⅡ的酶切结果有所不同，尼罗非鲫mtDNA上有3个或4个PvuⅡ位点，但奥利亚非鲫mtDNA上有5个位点，因此，PvuⅡ的酶切位点可作为鉴别它们的分子遗传标记。     

异源四倍体鲫鲤及其原始亲本遗传变异的RAPD分析

在优化RAPD检测条件的基础上，从100个随机引物中筛选出60个扩增较好的引物对异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和湘江野鲤相互间扩增DNA片段的异同性进行比较研究。结果显示，60个引物共产生1554条带，单一引物扩增的DNA片段数在6～20条之间，片段大小在200～3500bp之间。遗传相似率分析表明，异源四倍体鲫鲤与其原始母本红鲫的相似率为69．41％，与其原始父本野鲤的相似率为64．47％，说明异源四倍体鲫鲤接受原始母本红鲫的遗传物质要多一些；而红鲫和野鲤之间的相似率为42．18％，说明两者的基因组成有较大的相似性，从分子水平证实了红鲫和野鲤的远缘杂交具有较大的亲和性。在分析中，还发现异源四倍体鲫鲤有4条非亲本带，非亲本带谱率达0．72％，这些非亲本带可以作为异源四倍体鲫鲤特异性的分子标记。     

方正银鲫、白鲫与鲫线粒体DNA限制性内切酶酶切比较

用 Bam HI、Eco RI、Dra I、Hinf I、Hind III、Hpa II、Msp I、Pst I、Sau 3AI、Sma I、Xba I、Xho I和 Sal I等十三种限制性内切酶对方正银鲫(Carassius aur-atus gibelio)、白鲫(Carassius auratus cuvieri)和鲫(Carassius auratus auratus)的线粒体 DNA(mt DNA)进行单酶酶切以及其中八种识别六碱基对序列的限制性内切酶的双酶酶切,经琼脂糖凝胶电泳后,分析且计算出各酶切片断大小,得出三种鲫鱼的 mt DNA分子大小:方正银鲫为 15990±90碱基对(bp);白鲫为 16600±130碱基对(bP);鲫为 15540±140碱基对(bp),并且分别建立了方正银鲫、白鲫和鲫 mt DNA由 Bam HI、Pst I、Eco RI 及 Xba I等四种限制性内切酶构建的酶切图谱。     

转基因三倍体湘云鲫养殖试验

由湖南师范大学生命科学学院与中国科学院水生生物研究所协议合作，将草鱼生长激素基因转移到三倍体鲫鱼进行研究。为检测经转移生长激素基因后的三倍体新鱼的养殖特性和生长情况，我们于2000年在长沙市水产科技推广站进行了转基因三倍体湘云鲫与普通三倍体湘云鲫专池对照养殖试验。1试验材料与试验养殖条件1.1试验材料先将草鱼激素全鱼基因移入异源四倍体鲫(鲤)，再将已整合了草鱼生长激素的四倍体雄鱼与日本白鲫雌鱼通过人工杂交而获得转基因三倍体湘云鲫夏花鱼种；对照鱼系同源未转基因的三倍体湘云鲫夏花鱼种。试验和对照夏花规格均为3…     

鲤、鲫杂交子代的同工酶分析

利用水平式淀粉凝胶电泳法对乌克兰鳞鲤(♀)×乌龙鲫四倍体(♂)、红鲫(♀)×乌龙鲫四倍体(♂)、红鲫(♀)×乌龙鲫二倍体(♂)、白鲫(♀)×墨龙鲤(♂)4组鲤鱼、鲫鱼杂交子代背侧肌肉组织的天冬氨酸转氨酶、α-甘油醛磷酸脱氢酶、葡萄糖磷酸异构酶、异柠檬酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、磷酸葡萄糖变位酶及肌浆蛋白进行电泳分析,并测量了红细胞长径。红细胞测量结果表明,乌克兰鳞鲤(♀)×乌龙鲫四倍体(♂)、红鲫(♀)×乌龙鲫四倍体(♂)、红鲫(♀)×乌龙鲫二倍体(♂)杂交子代为三倍体,白鲫(♀)×墨龙鲤(♂)杂交子代为二倍体。4组杂交子代葡萄糖磷酸异构酶同工酶的基因组成结果显示,父本乌龙鲫四倍体和父本乌龙鲫二倍体均产生二倍体配子,且二倍体配子中1套为鲤鱼染色体组,1套为鲫鱼染色体组。     

建鲤线粒体DNA的遗传多态性初步分析

用16种限制性内切酶对建鲤mtDNA进行酶解分析，结果表明：建鲤的mtDNA分子大小约为16.6kb；除Bgl Ⅱ无切点，ClaⅠ、PstⅠ、SalⅠ和XhoⅠ有一个切点外，其余11种酶都有2个或2个以上酶切位点，其中DraⅠ、PvuⅡ检出mtDNA多态，将建鲤mtDNA分为两种不同的单倍型；计算建鲤种内（群体内）mtDNA多态值π＝0.00164。建鲤在分子水平显示出的遗传多样性，可能是建鲤能够适应全国各地的环境条件和养殖方式，并得以大规模推广的重要原因之一。     

2008-2010年渔业科技入户主导品种和主推技术（五）

湘云鲫 【品种来源】湘云鲫是应用细胞工程技术和有性杂交相结合的技术培育成功的一种三倍体鲫鱼，它的父本是鲫鲤杂交四倍体鱼，母体为日本白鲫。     

湘云鲫

【品种来源】湘云鲫是应用细胞工程技术和有性杂交相结合的技术培育成功的一种三倍体鲫鱼，它的父本是鲫鲤杂交四倍体鱼，母体为日本白鲫。     

异源三倍体鲫的引进养殖试验

异源三倍体鲫是由浙江宁波大学采用细胞和有性杂交高新技术获得异源二倍体受精卯，然后对其进行处理得到异源四倍体鲫个体，经多代自然繁育，遗传性状稳定，具有正常生殖能力，把它们与普通的二倍体鲫进行正常人工授精培育出三倍体鲫。2004年我们在兖州市新充镇薛庙渔场开展了异源三倍体鲫的引进繁育和养殖试验，获得成功，现将试验情况总结如下：     

水晶彩鲫、红鲫、锦鲤、荷包红鲤杂交子代的生长和体色研究

利用人工授精的方法，进行水晶彩鲫、红鲫、锦鲤和荷包红鲤的相互杂交试验，测定各个杂交组合子代的成活率、生长速度和体色分离比例。结果表明：4种鱼能够相互杂交受精，孵出鱼苗。孵化率锦鲤自交最低为46．4％，其它组合为70％～80％；杂交鱼苗经28d的人工饲养，水晶彩鲫与荷包红鲤、锦鲤的正、反杂交，同其它杂交组合比较有明显的差别，其生长速度慢，个体之间差异大，成活率低；杂交子代的体型分为3类：鲫鱼型、鲤鱼型和鲤鲫型。鳞片反光组织(虹彩细胞或鸟粪素细胞)为2类：完全型、缺失型。体色分离复杂多样，水晶彩鲫与红鲫杂交是水晶彩鲫，红鲫与锦鲤、荷包红鲤杂交是青灰色鲤鲫杂种，水晶彩鲫与锦鲤、荷包红鲤杂交都会出现水晶彩色和青灰色鲤鲫杂种。     

彩鲫与红鲫杂交种体色遗传的初步研究

通过彩鲫与红鲫杂交、回交以及不同体色彩鲫（杂交种）自交、杂交，对其子代的体色性状进行了统计学分析。彩鲫与红鲫的体色遗传说明彩色受显性基因控制，红色受隐性基因控制；不同体色彩鲫自交、杂交，其后代的体色分离特性为肉色显性，红色隐性，亲本体色在后代中可以积累增加；肉色、红色彩鲫与眼睛颜色、闪光鳞数具遗传相关性。     

雄核发育异育银鲫及其初步应用

用鲫（２ｎ＝１００）卵与异育银鲫（３ｎ＝１５６）正常精子进行人工授精，产生了部分的雄核发育异育银鲫（３ｎ＝１５６）。池塘中饲养的雄核发育能银鲫性腺不仅能成熟，而且也能生殖。它与父本异育银鲫回交可以产生回交子一代（Ｂ１）。雄核发育异育银鲫、回交子一代异育银鲫与父本异育银鲫非常相似。它们均具有相同的染色体数目（３ｎ＝１５６），红细胞核的体积是鲫红细胞核体积的１．６倍。另一方面，用随机拉增多态ＤＮＡ（Ｒ     

几种鲤、鲫鱼腹膜色素细胞的初步观察

通过普通鲫、普通鲤、红鲫、荷包红鲤、水晶彩鲫和锦鲤的腹膜脏层和腹膜壁层色素细胞观察，腹膜脏层分布有黑色素细胞，其中普通鲫致密完整，普通鲤和红鲫密集均匀，水晶彩鲫和锦鲤缺失，荷包红鲤完全缺失；腹膜壁层分布有鸟粪素细胞，除水晶彩鲫缺失，其它品种致密完整。     

赣昌鲫(日本白鲫♀×兴国红鲤♂)及其双亲同工酶的研究

采用不连续聚丙酰胺凝胶电泳法,研究了赣昌鲫(Carassius cuvieri♀×Cyprinus carpio var. singuonensis ♂)及其双亲的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、脑、晶状体6种组织在超氧化物歧化酶(SOD)、苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)、酯酶(EST)四种同工酶酶谱表达上的遗传差异。结果显示:赣昌鲫的SOD酶谱表达在6种组织中与母本一致;心脏、肝脏、肾脏的MDH表达酶带数与母本相同,且具偏母遗传特性,肌肉的MDH表达谱带数与父本肌肉相同,具偏父遗传特性;LDH、EST在各组织中的酶带表达形式则多数特征偏向于父本,部分与母本相似;LDH同工酶的表达显示出新杂种酶带特异性,EST同工酶在肾脏中也表达了自身特有的杂种酶带。结果表明,属间杂交的后代遗传物质上也存在着变异,存在可选育的性状。     

银鲫与普通鲫群体遗传结构的比较分析

利用15个微卫星多态性分子标记,对黑龙江省方正县双龙水库和双凤水库两个水体的雌核发育银鲫(Car-assius auratus gibelio)和二倍体普通鲫(Carassius auratus(L))的群体遗传多样性进行比较分析。结果显示:平均每个多态性位点获得银鲫10.39个有效等位基因,普通鲫11.82个有效等位基因;双龙水库三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度分别为0.6035和0.6300,双凤水库中的三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度为0.5311和0.5885;相似性与遗传距离分析结果显示:相似性最大的是双凤水体内的银鲫和普通鲫(0.8127),远大于两个水体间的银鲫群体间的相似性。结果表明,银鲫与普通鲫存在着明显的遗传物质交流,较高的遗传相似性不仅与传统的银鲫起源于普通鲫的观点一致,也暗示银鲫与普通鲫存在经常性地遗传物质交流。     

异源四倍体鲫鲤及亲本ApoE的克隆及组织表达分析

载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)作为胆固醇代谢过程中的关键因子,参与脂蛋白转运和性腺发育。为进一步了解该基因的作用,本实验克隆并测序了异源四倍体鲫鲤及其父母本ApoE基因的全长序列。异源四倍体鲫鲤、红鲫和鲤的ApoE全长分别为1393 bp、1384 bp和1396 bp,均编码281个氨基酸。序列对比表明,异源四倍体鲫鲤ApoE与父本鲤更为相似。另外有2个氨基酸位点发生了与父母本均不同的变异,证明异源四倍体鲫鲤除了有杂交特征外也产生了变异。通过Mega软件构建的哺乳动物ApoE进化树与系统分类相一致:鲤科鱼类的ApoE聚类在一起而分离于其它物种。Real time PCR分析表明,ApoE基因在3种鱼中的组织表达模式基本一致,所有组织均有表达,而在脾脏中表达最高。     

Anoxia survival in common carp and crucian carp is related to high zinc concentration in tissues

ABSTRACT:   Ten lots of common carp and six lots of crucian carp (each lot of 100 fish) were treated under anoxia for five days at water temperatures of 25–31°C. The average per group mortality of common carp was 17%, but none of the 600 crucian carp died. The digestive tract tissues of the common carp that died had significantly lower zinc concentrations than those that survived (59 ± 41 vs 142 ± 60 μg/[g fresh tissue], P  < 0.001). The digestive tract tissues of the crucian carp had mean zinc concentrations of 652 ± 458 μg/(g fresh tissue). One lot of common carp that had low tolerance for anoxia was fed a high zinc diet (2000 mg zinc/kg diet) for 1, 2 or 6 months and then subjected to 5 days anoxia. The survival rates of those fed the high zinc diet 1 and 2 months increased from 0 to 50%, respectively; all of fish that had fed a high zinc diet for 6 months survived. Thus, anoxia survival in common carp and crucian carp is closely related to the high concentrations of zinc in their tissues.