5种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立

本研究建立一种同时特异性地检测5种常见食源性致病菌的多重PCR方法。根据目前食品中常见病原菌副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、单核细胞增生性李斯特菌Listeria monocytogenes、肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis、福氏志贺氏菌Shigella flexneri的相关毒力基因,选择具有特异性的副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因、单核细胞增生性李斯特菌编码溶血素O基因、沙门氏菌侵袭蛋白A基因及志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因,设计5对特异性引物进行多重PCR检测,对反应条件进行优化并评价了其特异性和灵敏度。通过对48份实际样品检测,验证了此多重PCR体系具有很好的可靠性和实用性。     

麻虾巧加工超值效益高

国家或地区微生物项目欧盟各种致病微生物均不得检出（沙门氏菌金黄色葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌等）美国各种致病微生物均不得检出（沙门氏菌金黄色葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌等）日本各种致病微生物均不得检出（沙门氏菌金黄色葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌等）韩国各种致病微生物均不得检出（沙门氏菌金黄色葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌等）药物项目及限量其他要求、氯霉素（０．１×１０－９…     

植物源杀菌剂对水产养殖常见病原菌的抑菌作用研究

植物源杀菌剂因其成分复杂、无污染、属性天然等特点，为水产养殖防治病原菌提供了新思路。本文以虎杖、千里光、黄柏、黄岑、苦参等为原材料，研制开发植物源杀菌剂，研究结果表明其对12种水产养殖常见病原菌均有较好的抑菌效果，对大肠杆菌、荧光假单胞菌的的最低抑菌浓度（MIC）为33μL／L，对金黄色葡萄球菌、痢疾志贺氏菌、温和气单胞菌的MIC为25μL／L，对肠炎沙门氏菌、单增李斯特氏菌的MIC为50μL／L，对拟态弧菌的MIC为100μL／L，对溶藻弧菌的MIC为250μL／L，对弗尼斯弧菌、副溶血弧菌的MIC为500μL／L，对创伤弧菌的MIC为1000μL／L。     

5种淡水细菌的多重PCR检测方法的建立及其应用

细菌对水产养殖品种危害大,造成的经济损失高。传统的显微镜镜检方法检测细菌误差大,而利用PCR方法鉴定细菌种类特异性强,准确性高。利用多重PCR探索出一种能准确鉴定水产常见细菌。研究表明,利用PCR分别扩增了嗜水气单胞菌Hly A基因,肺炎克雷伯菌Khe基因,无乳链球菌Sip基因,爱德华氏菌Ser C基因和Eip基因以及迟钝爱德华氏菌Muk F基因和Gad B基因,扩增特异性强。并成功地建立了一种同时用于无乳链球菌和爱德华氏菌等两种细菌以及爱德华氏菌、肺炎克雷伯菌、迟钝爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等4种细菌的多重PCR检测方法。为了验证多重PCR方法的准确性,采集患病黄鳝病灶部位,分离培养细菌并提取该细菌基因组DNA,用上述两种多重PCR方法检测出患病黄鳝体内感染的细菌主要是肺炎克雷伯菌和嗜水气单胞菌。建立的多重PCR检测方法对水产常见致病菌的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义,为鱼类的疾病诊断提供了依据。     

有关国家对进口水产品安全卫生项目要求

自我国加入WTO以来,水产品出口受到药物残留的影响,损失数以亿元计。为了减少不必要损失,发展出口创汇渔业,就必须先了解掌握进口国对水产品安全卫生项目要求,有计划有目的地实施健康养殖和水产品加工,使我国水产品出口顺利通过检测,提高效益和工作效率。现根据有关文件资料就有关国家对进口水产品安全卫生项目要求介绍如下。1微生物项目对微生物项目,欧盟、美国、日本、韩国都是一样要求,即各种致病微生物均不得检出,包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单胞增生李氏特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌等。重点关注单胞增生李氏特菌。2…     

养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是浙江省养殖大黄鱼(Pseudnosciaena crocea)弧菌病的主要致病菌.本研究选择针对溶藻弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因,哈维氏弧菌的部分ToxR基因的特异性,优化设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,建立了一种检测致病性弧菌的多重PCR检测方法.经过琼脂糖凝胶电泳后的条带分析判断,可以在一个PCR管中同时成功地检测这3种病原细菌,含溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌3种致病弧菌核酸的阳性对照样品分别扩增出大小为737 hp、382 bp和271 bp的预期产物,其灵敏度是102～102 CFU/mL.将该方法应用于检测人工感染后的养殖大黄鱼病鱼肝脏和肾脏,结果在6份组织样本中,5份检出原始感染菌株,与API 20E鉴定结果相符;对弧菌病流行季节采集的未发病的16份养殖大黄鱼组织样本和16份水体样本进行抽检,结果在1份大黄鱼组织样本中检出哈维氏弧菌,7份水体样本中检出这3种弧菌中的1种或2种,鉴定结果与API 20E鉴定结果符合率为93.75%.说明该方法不仅可以检测发病鱼,还可以检测无病症带菌大黄鱼以及带菌水样,且说明海洋水体中存在着大黄鱼弧菌病的致病菌.结果说明,多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,可以缩短检测时间,降低检测成本,该方法的建立对养殖大黄鱼弧菌病的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义.     

应用电子鼻技术检测南美白对虾副溶血性弧菌试验

为了将电子鼻技术应用于水产品中副溶血性弧茵等食源性致病菌的快速无损检测,试验利用电子鼻对从南美白对虾(Litopenaeus vannamei)中分离的一株副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行检测.试验采用具有18个金属氧化物传感器的电子鼻对副溶血性弧茵经纯培养所得的挥发性代谢产物进行检测,同时用空白3.5%氯化钠TSB培养液作为对照.电子鼻所得的数据用主成分分析(PCA)、判别因子分析(DFA)、单类成分判别分析(SMICA)等多元统计方法进行分析.结果显示,副溶血性弧菌经纯培养后产生了明显不同于空白培养液气味的挥发性代谢产物.电子鼻可以应用于纯培养微生物的检测.     

广东省罗非鱼及其养殖环境中食源性致病菌菌相分析

对广东省3个不同产区罗非鱼及其养殖环境中食源性致病微生物的构成进行了分析。采用选择性培养基、生物梅里埃微生物鉴定系统与Biolog微生物自动化鉴定系统相结合的方法对罗非鱼和养殖环境中的主要食源性致病菌种类进行分离鉴定。结果表明：罗非鱼鱼体及其养殖环境中存在的主要食源性致病菌种类，随季节的不同而有变化，其中以夏季致病菌种类最多，鱼体及其养殖环境分别为11和12种致病菌；而春季鱼体中致病菌较少，为6种。罗非鱼鱼体及其养殖环境中以致病性嗜水气单胞菌、致泻大肠埃希氏菌、沙门氏菌最为常见，四季均有，其中致病性嗜水气单胞菌以春夏季节检出率较高，环境中检出率达83％～89％，鱼体中达44％～67％；致泻大肠埃希氏菌环境中春夏秋季检出率达83％～100％，鱼体夏秋季中达48％～67％；沙门氏菌环境中春秋季检出率达33％～39％，鱼体中达44％～52％。其次在罗非鱼鱼体还分离到霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、阴沟肠杆菌、阪崎肠杆菌、铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌等致病菌。     

蛭弧菌及其在水产养殖业的应用

蛭弧菌的生物学名称为噬菌蛭弧菌。蛭弧菌是一类专门捕食细菌的寄生性细菌,具有独特的裂解细菌的生物学特性,能够在较短的时间内裂解水体中的沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shiglla)、这形杆菌属(Proteus)、埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、欧文氏菌属(Erwina)、弧菌属(Vibri)等属的种类.可将致病菌限制在较低水平上,同时还可有效地控制养殖水体的COD、硫化物和氨氮存留量,因此.利用其这一特性作为水产养殖水体的生物化物和"活性抗生素"具有广泛的发展前景,对开拓水产养殖动物疾病防治新途径具有重要意义。     

蟹糊贮藏中的品质变化及变质菌分析

对蟹糊贮藏中的品质和细菌相变化进行分析。结果显示,水分活度0.901产品的货架期为水分活度0.861产品的81%,产品10℃贮藏的货架期为5℃贮藏的42%,表明栅栏因子强度对产品的质量和贮藏性十分重要。蟹糊产品初始菌相较单一,主要是棒状杆菌、玫瑰色库克菌、葡萄球菌和马红球菌。贮藏中菌相组成更趋单一,至感官拒绝时,葡萄球菌比例均超过50%;特别是水分活度高的产品,无论是5℃还是10℃贮藏,至感官拒绝时,葡萄球菌比例均超过三分之二,因此可以认定葡萄球菌是蟹糊产品的优势变质菌。虽然没有检出沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长,但金黄色葡萄球菌是蟹糊中的潜在病原菌。     

浙江海洋贝类微生物调查及其评估

20 0 3年 8月在浙江沿岸地区抽取了 4 0份贝类样品进行微生物检测。检测结果表明 :在总共 4 0份样品中 ,有 2 7份不同程度地受到微生物污染 ,占总数的 6 7.5 % ,合格率仅为 32 .5 %。其中污染最为严重的是大肠菌群 ,占超标总数的 6 7.5 % ,其次为副溶血性弧菌 ,占总数的 2 2 .5 % ,沙门氏菌和李斯特菌 ,在此次抽检的样品中未见 ,检出率为 0 % ;也有少部分贝类产品是因细菌总数超标 ,占总数的 5 %。可见 ,微生物性污染对浙江海洋贝类在一定程度上构成了威胁。     

蛭弧茵裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌,广泛分布干土壤及备种水域之中,对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病原菌具有吞噬裂解活性.本文选取七株细菌为宿主菌,对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究.结果表明:除金黄色葡萄球菌外.蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性,其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强.     

蛭弧菌裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌．广泛分布干土壤及各种水域之中．对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病厚菌具有吞噬裂解活性。本文选取七株细菌为宿主菌．对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究。结果表明：除金黄色葡萄球菌外，蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性．其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强。     

常温贮藏软烤扇贝品质及潜在病原菌分析

对软烤扇贝制品在常温贮藏期间的感官、化学和微生物品质进行分析。结果表明,样品感官品质良好,水分含量40.65±2.38%,Aw0.92±0.02,符合产品标准要求;但细菌菌落总数和耐热菌落总数分别为4.16±1.54 log10cfu/g和3.98±1.02 log10cfu/g,pH6.77±0.14,不符合产品标准要求。对潜在病原菌金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌进行测试鉴定。结果表明,样品中检出5组菌,2组为葡萄球菌属,但不是金黄色葡萄球菌;3组为芽孢杆菌属。探究其是否具有致病性,需要增加样本并与产品加工过程关联,作进一步研究分析。     

南极磷虾酶解多肽的抑菌活性

选用复合酶酶解南极磷虾,对酶解多肽进行多肽含量及相对分子质量分布测定。采用滤纸片法筛选南极磷虾酶解多肽及各分级级分对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、四联微球菌、大肠杆菌、啤酒酵母和副溶血弧菌6种菌的抑菌活性。结果表明,该法所得的南极磷虾酶解多肽的含量达81.44%,相对分子质量范围为254~10 000;酶解多肽对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性,且分级级分Ⅲ(1.0×103相似文献   

耳鲍血淋巴抗菌活性的研究

用溶藻弧菌诱导后,收集耳鲍血淋巴,利用微量测定法进行抗菌活性分析.结果发现,耳鲍血淋巴具有抗革兰氏阴性菌-溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌的活性,对革兰氏阳性菌的抑制活性较低.利用胰蛋白酶对耳鲍血淋巴水解后,其抗菌活性消失,表明其中抗菌成分为蛋白质.将耳鲍血淋巴在不同温度(37～95 ℃)和不同pH(2.5～5.0)下保温,发现其抗菌活性成分对热及酸耐受性较强.耳鲍血淋巴在低浓度无溶血活性.该抗菌组分在耳鲍的免疫防御中具有一定的作用.     

鼠尾藻多酚分级组分的抑菌活性研究

采用平板生长抑制法对鼠尾藻Sargassum thunbergiikuntze多酚化合物各分级组分进行抑菌活性研究。结果表明,在一定浓度范围内各分级组分对副溶血弧菌、哈维氏弧菌、沙蚕弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和四联微球菌等受试菌株均有抑菌活性。其中,分级组分I(Mr5.0×103)的抑菌效果优于其他组分,对副溶血弧菌、哈维氏弧菌和沙蚕弧菌的最低抑菌浓度(MIC)值为900μg/ml,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鳗弧菌和溶藻弧菌的MIC值为1 800μg/ml,对四联微球菌的MIC值为3 600μg/ml。另外,组分I(Mr5.0×103)显示出较好的热稳定性,在pH 3~4时对受试菌的抑菌活性最强。