三角帆蚌肝脏瘟病感染期抑制性消减cDNA文库的构建与分析

采用抑制性消减杂交技术构建了三角帆蚌肝脏瘟病感染期抑制性消减cDNA文库。经检验，差异表达基因均被富集了 2¹⁰倍左右，证明构建的 cDNA 消减文库具有很强的消减效率。PCR 鉴定发现，在随机挑取的阳性克隆中，95% 的克隆均含有 0.2～1.0 kb 的插入片段，这些片段可能是三角帆蚌瘟病病毒感染后差异表达基因的cDNA片段。测序共获得 214 个有效 cDNA 序列，分别属于8 大类，共 98 个基因。其中细胞分裂基因 2个、细胞结构与运动基因 9 个、代谢基因 10 个、信号传导基因 7 个、细胞防疫基因 10 个、基因与蛋白表达基因 20 个、未知功能蛋白基因 26 个，GenBank中找不到任何同源序列的基因 14 个。结果说明，构建的差异表达cDNA文库，可较好地反映三角帆蚌瘟病病毒对三角帆蚌影响的基因信息。     

三角帆蚌的瘟病防治

三角帆蚌的瘟病防治潘炳炎，文仲芳（中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，无锡２１４０８１）三角帆蚌瘟病是由嗜水气单胞菌、嵌砂样病毒所引起，常在夏秋两季蔓延。江、浙一带每年５～６月和９～１０月（水温２１～２６℃）为蚌瘟病流行季节，来势凶猛，死亡率甚高。一...     

三角帆蚌蚌瘟病的防治技术

三角帆蚌蚌瘟病的防治技术潘炳炎，文仲芬（淡水渔业研究中心无锡２１４０８１）三角帆蚌是我国淡水人工育珠中的优良品种，所产珍珠具有光泽好、珠粒圆的特点，但作为育珠用的三角帆蚌，在生产过程中因病害而大批死亡，给育珠生产造成重大损失，特别是三角帆蚌的蚌瘟病，...     

三角帆蚌瘟病的防治

我省珍珠业的发展始于六十年代末。育珠蚌有三角帆蚌、褶纹冠蚌、背角无齿蚌等，其中尤以三角帆蚌以育成的珍珠质量最佳，价值最高。但自七十年代中期，江南一带出现大面积三角帆蚌死亡现象。当初，我省有些地区从外省购进不少三角帆蚌，导致我省1983年发生三角帆蚌暴发性的死亡，一直延续至今，群众称之为三角帆蚌瘟病，     

三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对我国三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)11种组织中16种同工酶系统的酶谱表型、组织分布、活性含量和迁移特征进行了分析,并就不同酶谱特征与基因表达状况作了讨论。证实酯酶和α-磷酸甘油脱氢酶的表型和活性含量在病蚌体内有明显的紊乱现象,表明三角帆蚌瘟病的病理机制与消化系统脂类代谢异常有密切关系。消化系统两种酶谱的特异性变化,可作为瘟病早期诊断的生化辅助指标。     

三角帆蚌瘟病的生态学防治

采用石灰超细微颗粒悬浮法为主控制池塘生态环境，中草药针剂注射为辅的方法，成功的控制了由嵌砂样病毒（Ａｒｅｎａｖｉｒｕｓ）引起的暴发性三角帆蚌瘟病。７０００只育珠蚌两周年成活率９７３％，药物费用仅占产珠成本的二十分之一。结果表明，提高生态环境的ｐＨ并增加其钙浓度可以抑制蚌瘟病。后来应用此法控制鱼、贝类病毒病，推广面积达１２００公倾。     

春夏之季蚌瘟病的防治

春夏之季蚌瘟病的防治朱振东（湖北省鄂州市水产局４３６０００）通常所说的蚌瘟病包括嗜水气单胞菌病和嵌砂样病毒病二种，主要发病对象为１周年以上的三角帆蚌。发病特点表现为：发病迅速，传染力强，死亡率高。据调查，鄂州市近年来育珠蚌病害年发病面积在５３０公顷左...     

缺氧和有毒微囊藻胁迫下三角帆蚌鳃和主要消化器官以及晶杆体的扫描电镜观察

为了阐明缺氧和有毒铜绿做囊藻对三角帆蚌鳃和主要消化器官的毒理效应和组织病理,实验利用扫描电镜研究了暴露于缺氧和有毒铜绿做囊藻下三角帆蚌的鳃、胃、肠以及晶杆体等器官组织病理学变化。结果显示,从第7天开始缺氧和有毒藻类复合胁迫组三角帆蚌的鳃丝及柱状细胞出现大量坏死和脱落,胃肠腔面纤毛脱落、上史细胞破裂坏死,晶杆体在第5天已经完全消失;第7天单独缺氧组和单独有毒藻类组的鳃和消化道出现少量的病变,单独缺氧组晶杆体在第7天完全消失,单独有毒藻类组晶杆体则一直存在。胁迫消失后,3个实验暴露组的晶杆体都未恢复正常对照组水平,因此缺氧和有毒铜绿做囊藻对三角帆蚌鳃和消化系统产生不可恢复性损伤,双重胁迫组影响最为严重,缺氧胁迫组相对有毒铜绿做囊藻胁迫组影响更为显著。本研究为三角帆蚌在缺氧和有毒藻类胁迫下的生理适应机制提供了组织病理学上的参考,并为其作为富营养化水体治理工具种的可行性提供了理论依据。     

三角帆蚌细菌病病理组织的显微结构研究

用黄杆菌、温和气单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、产碱假单胞菌及其5种混合细菌人工感染健康的三角帆蚌，切取病蚌肝脏、肠道、鳃和斧足等主要器官的组织，采用美蓝染色法进行细菌涂片和制作石蜡组织切片。试验表明：感染温和气单胞菌、产碱假单胞菌和5种混合细菌的病蚌组织切片与对照组相比，有明显不同，尤其是肝脏、肠道和鳃组织发生了明显的病理变化。     

三种淡水育珠蚌的组织蛋白电泳分析

目前,生产上常用的淡水育珠蚌有三角帆蚌Hyriopsis cumingii(Lea)、褶纹冠蚌Cristaria plicata(Leach)、背角无齿蚌Anodonta woodiana(Lea)。为进一步了解这三种蚌在组织蛋白成分上的差异,我们采用7.5%聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳方法,对三种蚌的闭壳肌、肝脏、晶杆体、边缘膜组织蛋白以及不同地区、不同年龄、不同颜色、不同性别的三角帆蚌肝脏组织的蛋白分子进行了比较。现将结果报导如下:     

三角帆蚌鳃瓣活力的研究

本文测定了鳃瓣小片披行的速度，研究水温，ＰＨ值，对三角帆蚌鳃纤毛活动的影响。     

三角帆蚌对藻类滤食及消化的研究

研究了三角帆蚌(Hyriopsis cum ingiiLea)对藻类的滤食和消化能力。通过对三角帆蚌生活的池塘以及三角帆蚌的胃、中肠、直肠中所含藻类的鉴定和含量的对比发现,三角帆蚌能滤食环境中大部分的藻类;对于滤取到消化道中的藻类,除一些结构复杂的外,都能很好的消化。其中,蓝藻门的总消化率为78.8%,消化度为+4;硅藻门的总消化率为90.0%,消化度为+5;隐藻门的总消化率为41.1%,消化度为+3;裸藻门的总消化率为46.5%,消化度为+3;绿藻门的总消化率为49.1%,消化度为+3。研究结果为利用滤食性贝类治理富营养化水体中的水华污染提供了可行的路径。     

三角帆蚌蚌瘟病原的初步探讨

探讨了三个水产场三角帆蚌大批死亡的病因。取病料经匀浆、离心后取上清液,再经青霉素、链霉素处理或微孔滤膜过滤除菌,人工感染健康三角帆蚌均能引起发病死亡,并能连续传代。其症状和病理解剖变化与自然发病的蚌相似。病原病毒粒子有囊膜,核衣壳呈二十面体对称,大小80～120nm,暂称为蚌的类疱疹病毒。含毒病料置50％甘油磷酸盐缓冲液中,在0～4℃冰箱保存6个月,-20℃低温冰箱中保存一年半,仍有致病力。     

Effects of integrated combination and quicklime supplementation on growth and pearl yield of freshwater pearl mussel, Hyriopsis cumingii (Lea, 1852)

The effects of integrated combination and quicklime supplementation on growth and pearl yield of a freshwater mussel, Hyriopsis cumingii (Lea, 1852), were examined through a 137-day growout in land-based enclosures. The integrated combinations examined were either mussel, bighead carp and gibel carp or mussel and bighead carp. Each combination was treated either with or without quicklime supplementation. One half of the mussels in each enclosure were grafted with pieces of the mantle epithelium while the other half were not. During the experiment, gibel carp were fed formulated feed while the mussel and bighead carp were fed natural live food. Quicklime was regularly provided in the enclosures as calcium replenishment. The species composition in the integrated system significantly affected growth in shell size and wet weight of the mussels regardless of the graft and pearl yield, while no significant effects of quicklime supplementation were detected. Growth rates in shell size and wet weight of both grafted and non-grafted mussels and pearl yield were slightly higher in the enclosures with mussel, bighead carp and gibel carp than those with mussel and bighead carp, although these differences were not statistically significant. The non-grafted mussel exhibited faster growth in shell size and wet weight than the grafted mussel within the same treatment. Results of the present study indicate that species combination in an integrated system can affect growth and pearl yield of H. cumingii . The species combination of mussel, bighead carp and gibel carp is recommended for commercial H. cumingii farming.     

应用激光共聚焦显微技术研究Ca2+在三角帆蚌组织内的积累与分布

为了探讨淡水贝类Ca2+吸收和转运信号传递机理,采用激光共聚焦技术研究了三角帆蚌不同组织细胞在静息状态下细胞内游离Ca2+浓度,以及水体Ca2+浓度对外套膜组织细胞内钙沉积的影响。试验选取10只健康的三角帆蚌,分别获得外套膜外膜、内膜、斧足、腮及内脏团上表皮组织细胞,短期培养后用Fluo-3/AM荧光探针孵育细胞1 h,观察细胞内Ca2+荧光强度。研究结果表明,蚌不同组织细胞内Ca2+荧光强度存在显著差异,外套膜外膜细胞内Ca2+荧光强度最高,内脏团上表皮细胞的最低(P<0.05);育珠三角帆蚌在相同Ca2+浓度的孵育水平下,外套膜细胞内Ca2+荧光强度比非育珠蚌都有增加的趋势,其中在1.25 mmol/L添加组中,两组外套膜内膜细胞内Ca2+荧光强度差异达到显著水平(P<0.05);不同Ca2+孵育水平对细胞内Ca2+荧光强度有显著影响(P<0.05),随着Ca2+在孵育液中浓度的升高,外套膜细胞内Ca2+荧光强度显著增强(P<0.05),表明外套膜是从外界吸收Ca2+的主要组织,蚌体珍珠的培育增强了其对Ca2+的沉积,并且水体Ca2+浓度在1.25～3.00 mmol/L有助于蚌体内Ca2+的贮藏,这对进...     

三角帆蚌不同组织基因组DNA提取效果比较

利用平衡酚-氯仿法分别提取三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)斧足、鳃、闭壳肌、性腺、肝脏、心脏中的基因组DNA,采用紫外分光光度测定法、琼脂糖凝胶电泳法、PCR扩增法分析三角帆蚌不同组织基因组DNA的提取质量。结果表明,三角帆蚌6个组织均能成功地提取基因组DNA,但提取的DNA质量存在差异;斧足中提取的DNA纯度、浓度最高,PCR扩增的条带最亮,因而是三角帆蚌提取DNA的最佳组织;其次是肝脏和闭壳肌,心脏和性腺提取的DNA较差。     

RAPD分析野生和养殖三角帆蚌的遗传多样性

用150个随机引物对野生三角帆蚌和养殖三角帆蚌进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析，最终筛选出2．0个引物，分别能扩增出1-10条大小不等的片段，片段长度在500—2000bp之间。野生三角帆蚌和养殖三角粤蚌的种内相似系数分别为0．787和0．833，显示野生种群基因组发生的变异较养殖种群大。野生三角帆蚌和养殖三角帆蚌种群间遗传距离为0．054，表明三角帆蚌野生和养殖种群亲缘关系比较接近。     

中国五大湖三角帆蚌群体遗传多样性及亲缘关系的SSR分析

采用微卫星技术，将9对微卫星引物用于我国五大淡水湖三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）群体，即鄱阳湖（PY）、洞庭湖（DT）、太湖（TH）、巢湖（CH）、洪泽湖（HZ ）群体的遗传多样性及亲缘关系的研究。数据经TFPGA软件估算，分别完成不同群体位点的杂合度值、群体间遗传距离和相似指数计算及聚类分析，确立了5个群体间的亲缘关系。研究结果表明：（1）三角帆蚌5个群体的平均表观杂合度0.4964～0.5621，期望杂合度0.5540～0.6270，多态信息含量0.4061～0.4665，其中鄱阳湖群体遗传多样性最高，而洪泽湖群体最低。（2）五个群体遗传相似度在0.8947以上，遗传距离在0.0267～0.1113。聚类分析结果显示，鄱阳湖、巢湖与太湖聚在一起，亲缘关系较近，而洞庭湖群体与洪泽湖群体亲缘关系较近。（3）鄱阳湖三角帆蚌种质最好，并具有很好的育种潜力。     

三角帆蚌内脏团培育圆形有核珍珠的试验

报导了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)内脏团培育圆形有核珍珠的试验结果。结果显示:插植珠核的7362只手术蚌植核后一个月内成活率99.2%。经23个月养殖后,随机抽取50只。结果留核率达94%,成珠率为86%,其中中高档珠占37.2%。有核珍珠直径在9.4~11.6 mm之间,其中10 mm以上占88.4%。11.6%的珍珠表面有小于3 mm的凸起,未发现带扁而长尾巴的珍珠。试验表明:三角帆蚌内脏团内能培育出高品质的有核珍珠。此外还发现,脱核或核片分离的细胞小片仍可在内脏团内形成珍珠。     

三角帆蚌微卫星位点筛选及多态性分析

采用磁珠富集法,以生物素标记的(CA)10寡核苷酸为探针,构建了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)基因组微卫星富集文库。根据微卫星位点的侧翼序列设计引物,随机挑选扩增出与预期大小相符的32对引物,引物荧光标记后对24个三角帆蚌个体分别进行PCR扩增,共筛选出20对多态性较好的引物。结果表明,20个微卫星位点的等位基因数为5～20,有效等位基因数2.321 3～13.260 3。观察杂合度和期望杂合度分别为0.318 2～1.000 0和0.582 5～0.946 1;PIC值0.547 2～0.919 9;其中14个位点符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。本研究筛选的20个微卫星标记可作为三角帆蚌遗传多样性、种群遗传结构等研究的理想分子标记。