草鱼出血病的组织病理研究

草鱼出血病是由呼肠孤病毒引起的一种急性传染病。病鱼全身出血，鱼的红细胞、白细胞及血红蛋白都明显地低于健康鱼。病毒侵袭草鱼后，小血管的内皮广泛受损，引起弥漫性血管内凝血，从而大量消耗了血液中的凝血因子，引起广泛性出血。由于循环血量减少和小血管阻塞，导致大多数组织和器官缺氧而变性和坏死；尤其是造血组织的坏死，更加速病鱼死亡。此外，还在草鱼血液中首次发现嗜碱粒细胞，查明了草鱼出血病同草鱼肠炎病的肠道组织病变之间的差异。     

草鱼病毒性出血病研究进展

草鱼出血病是严重困扰着草鱼养殖业发展的一大疾病。根据近几十年来对于该病研究的进展,就草鱼出血病病原的生物学特性、不同发现株之间的比较、分子生物学研究以及疾病的防治等方面进行综合评述,总结了草鱼出血病的研究现状及研究中亟待解决的问题,并提出了该领域以后的重点研究方向。为进一步深入开展对该病的防治研究提供参考,以提高草鱼养殖的生产率。     

紫外线诱变建立草鱼抗出血病病原病毒的AHZC88细胞株

通过UV对草鱼出血病病原病毒敏感的草鱼ZC 7901细胞株反覆诱变,获得了对出血病病原病毒具有抗性的AHZC 88细胞株。经生物学特性测定,AHZC 88细胞的染色体2n=48,温度适应范围4°～38℃,最适生长温度27℃,分裂指数在36小时时达最高值。经病原病毒的人工侵染等试验表明,AHZC 88细胞不受草鱼出血病病毒感染。在电镜切片观察中,细胞内不见病毒颗粒。LDH同工酶分析,比敏感细胞少1条酶带。     

草鱼出血病的电镜观察

草鱼出血病是由呼肠孤病毒感染所致的急性传染病，由于病鱼小血管受损引起全身性出血，并造成内脏器官和体壁肌肉组织局灶性病变。电镜观察表明病变细胞内各种细胞器的数量较正常细胞显著减少，形态结构也遭损坏。质膜的三层结构模糊不清，及至解体消失。与机体代谢密切相关的粗面内质网、滑面内质网、线粒体和高尔基复合体的数量减少及结构受损，使蛋白质、糖类和脂质合成及分解等一系列细胞代谢活动不能正常进行，加速了病鱼死亡。     

草鱼出血病的病原研究

草鱼出血病的病原研究,始于50年代。1978—84年,分离到一种病原病毒,定名为草鱼呼肠孤病毒或鱼呼肠孤病毒。本文报道从出血病病鱼组织的电镜研究中发现两种病毒颗料,一种即是呼肠孤病毒,另一种是20-30nm大小的病毒。经病毒的核酸分析,前者是双股RNA病毒;后者为单股RNA病毒。用分离到的这两种病毒分别注入1足龄健康草鱼,可发生两类不同症状的出血病;呼肠孤病毒主要导致“肠出血型”症状;另一种病毒(经初步鉴别属于小RNA病毒科病毒)主要导致“肌肉出血型”出血病。由此,可以证实两种病毒都是草鱼出血病的病原病毒,同时也初步解释出现两种不同症状出血病的原因。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70％以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0(6)％,血清中和抗体效价为160.5±58.9(6);而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2(6)％、88.3±26.2(6);二者有显著的差异(0.05>P>0.01)。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10~(4.5)TCID_(50)/尾左右,FR—836—w在3—5×10~(7.5)TCID_(50)/尾左右,其免疫保护力可达80％左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10~(5.1)TCID_(50)/ml。     

草鱼出血病病原—鱼呼肠孤病毒(FRV)核酸特性的研究

<正> 本协作组曾报道从草鱼出血病病鱼组织中首次分离出一种直径约为60nm的球形病毒,并证实这一病毒为草鱼出血病的病原。随后,做了其精细结构的观察与分析。本文对该病毒的核酸基本特性进行了研究。根据我们以前和本文报道的     

草鱼出血病类型及防治方法

草鱼出血病（Hemorrhage disease of grass carp）是由草鱼呼肠孤病毒（the grass carp hemorrhage reovirus,简称GCHV,国际上也简称GCRV）引起的流行性广、死亡率高、危害性大的病毒性水生动物疾病,其结果往往造成大批量草鱼鱼种或成鱼死亡。每年6月下旬至9月中旬是草鱼出血病的主要流行季节,水温在25-28℃以上时最为流行,8—9月份为流行高峰,死亡率有时高达80％以上。     

草鱼出血病主要器官病理研究

草鱼出血病是一种流行广、发病季节长、死亡率高的病毒性疾病。对一龄草鱼的危害最为严重,70年代以来,国内学者在该病的病原及防治方面做了大量研究工作,但在组织病理学方面研究较少。1984年以来,上海水产大学及中国科学院水生生物研究所,先后在这方面作了不少研究,我们自1985年也开展了草鱼出血病的组织病理学研究。材料与方法供切片观察的草鱼共35尾,规格为全长     

草鱼出血病病毒的电子显微镜观察初报

<正> 据报道草鱼出血病是由病毒引起的,在病鱼的肾组织及头肾组织超薄切片中均发现有疱疹病毒颗粒。我们将草鱼出血病病鱼的组织匀浆,经分离、提纯后,用2%磷钨酸溶液,pH6.9负染色,在电子显微镜下观察到一种病毒颗粒(图1)。颗粒呈球形,直径为60-70毫微米,有些颗粒可见直径为30-40毫微米左右的核心及20-30毫微米的外膜。用上述提纯样品感染2-3寸健康二龄草鱼,饲养水温保持在28℃左右,可以使之发病。将病鱼的肝、脾、肾取出后,研磨、冻融、离心后,制备成1%的病毒悬液,用此悬液感染鱼肾单层细胞,细胞收缩、脱落,出现病变。病变细胞经超薄切片观察,我们初次在组织培养的鱼肾细胞质内见到上述的病毒颗粒(图2)。有时可见到这类病毒颗粒包裹在膜状结构,而成从出现(图3)。另外,尚可见到未包裹上外壳的核心颗粒及外膜尚不明显     

草鱼呼肠孤病毒三重PCR检测方法的建立及其应用

针对草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)各类型毒株的保守区域分别设计3对引物,优化反应条件和体系,建立了草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法,通过PCR扩增分别获得大小约为530 bp、297 bp和196 bp的DNA片段。进一步分析表明,该检测方法具有良好的敏感性、特异性和稳定性,可以检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型核酸最低量分别约为260、190与230拷贝的病毒量,且某一类型的引物只能检测到同一类型的GCRV。用建立的多重RT-PCR方法对2008—2011年采集自江西、广东、湖北、浙江、重庆、四川、福建等地的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)主养区的86份草鱼出血病样品进行检测和初步流行病学分析。结果表明,Ⅰ型阳性率为9.3%,Ⅱ型阳性率为45.3%,Ⅲ型阳性率为2.3%,Ⅰ型和Ⅱ型混合感染阳性率为5.8%,Ⅱ和Ⅲ型混合感染阳性率为2.3%,其他类型的混合感染未检测到。表明目前主要流行的草鱼呼肠孤病毒为Ⅱ型。本研究建立的GCRV三重PCR检测方法可以特异性的检测各种类型的草鱼呼肠孤病毒,且具有较高的敏感性;利用该方法进行草鱼出血病初步的流行病学分析表明,目前主要流行的草鱼呼肠孤病毒为Ⅱ型,不同毒株类型混合感染的现象也普遍存在。本方法的建立旨在对草鱼出血病的快速诊断和分子流行病学调查提供实用的可操作手段。     

草鱼呼肠孤病毒JX-0902株的分离和鉴定

收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织,进行超薄切片电镜观察,结果显示,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70 nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验,结果发现,人工感染试验鱼出现死亡,且具有典型出血症状;组织滤液感染草鱼肾细胞系(CIK)细胞后,盲传6代未观察到典型细胞病变效应,但感染细胞固定后经超薄切片电镜观察,细胞质内有大量病毒存在,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。SDS-PAGE结果进一步揭示,新分离病毒株(暂命名JX-0902)基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株存在差异,而与HZ08株接近。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物,以JX-0902株的cDNA作为模板,可扩增出特异性条带。基于S6序列的聚类分析结果显示,JX-0902与GCRV HZ08株、GD108株S6同源性高达98%、99%,该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。     

江苏启东文蛤大面积死亡原因调查

采集启东文蛤发病地区的养殖海水样品进行水质分析,并对感染文蛤做了细菌分离和电子显微镜超薄切片.结果表明,此次文蛤大面积死亡非化学污染和细菌感染所致;发病文蛤外套膜电镜超薄切片中发现了病毒包涵体和散在病毒颗粒,病毒颗粒呈球形,直径约60～80 nm,无囊膜.其他感染组织也有明显的病理变化,如核固缩、线粒体溶解、微绒毛脱落、细胞器空泡化.     

鱼呼肠孤病毒(FRV)抗血清的制备及其应用

在FRV的分离和纯化基础上，本文介绍了制备FRV抗血清的几种方法。并采用不连续对流免疫电泳法(DCIE)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FRV诊断学研究结果，同时对这两种方法检测FRV的灵敏度作了比较。     

海水鱼卵子石蜡切片的方法改进

利用戊二醛作固定液,通过对脱水、透明、透蜡、染色技术的改进,在海水鱼卵子石蜡切片过程中,省略了卵膜剥离程序,获得了良好的切片效果。     

草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立

根据草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物,以病毒全基因组RNA为模板,通过对反应条件进行优化,建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明,本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带,反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高,其最低检测限为33 pg,与常规RT-PCR方法相比较,灵敏度高10倍,且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、大鲵虹彩病毒(GSIV)等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,且不需昂贵仪器设备,为快速检测草鱼呼肠孤病毒与诊断草鱼出血病提供了简捷快速的技术手段。     

Piscine reovirus in wild and farmed salmonids in British Columbia,Canada: 1974–2013

Piscine reovirus (PRV) was common among wild and farmed salmonids in British Columbia, western Canada, from 1987 to 2013. Salmonid tissues tested for PRV by real‐time rRT‐PCR included sections from archived paraffin blocks from 1974 to 2008 (n = 363) and fresh‐frozen hearts from 2013 (n = 916). The earliest PRV‐positive sample was from a wild‐source steelhead trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), from 1977. By histopathology (n = 404), no fish had lesions diagnostic for heart and skeletal muscle inflammation (HSMI). In some groups, lymphohistiocytic endocarditis affected a greater proportion of fish with PRV than fish without PRV, but the range of Ct values among affected fish was within the range of Ct values among unaffected fish. Also, fish with the lowest PRV Ct values (18.4–21.7) lacked endocarditis or any other consistent lesion. From 1987 to 1994, the proportion of PRV positives was not significantly different between farmed Atlantic salmon, Salmo salar L. (44% of 48), and wild‐source salmonids (31% of 45). In 2013, the proportion of PRV positives was not significantly different between wild coho salmon, Oncorhynchus kisutch (Walbaum), sampled from British Columbia (5.0% of 60) or the reference region, Alaska, USA (10% of 58).