一株养殖沙塘鳢肠道溶血性苏云金芽孢杆菌的分离鉴定

为探究养殖沙塘鳢细菌病害,采集江苏省养殖沙塘鳢,分离内脏细菌,对从肠道分离到的一株细菌进行了鉴定。运用显微镜观察其形态,细菌纯培养进行生理生化指标鉴定,并通过16 S rDNA同源性分析等方法对该株细菌进行鉴定。结果表明,其形态特征及生理生化指标符合蜡状芽孢杆菌的特点,GeneBank中同源系列检索结果显示,该菌与苏云金芽孢杆菌的16 S rDNA序列同源性高达99%,系统发育树表明该菌为苏云金芽孢杆菌。     

枯草芽孢杆菌的分离鉴定及酶系分布的研究

从池底污泥中分离1株产芽孢杆菌,经菌落形态及主要生理生化特性鉴定为枯草芽孢杆菌。对此菌发酵过程中产酶情况作了研究,结果表明,菌株能够分泌淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶,具有用于研制微生态制剂的潜力。     

中华鳖源粘质沙雷氏菌分离、鉴定及药敏特性研究

对患病中华鳖(Trionyn sinensis)进行病原分离、鉴定及药敏实验。从患病中华鳖肝、肾、脾及腹水分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并利用K-B进行药敏特性分析。结果显示分离菌株HD01为本次引发中华鳖病害的病原菌,其对中华鳖的LD50为4.48×106CFU/g。HD01株理化特性与粘质沙雷氏菌一致,16S rRNA序列与粘质沙雷氏菌同源性为99%,综合判定分离菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。HD01株对氟苯尼考、多西环素、庆大霉素及苯唑西林等14种抗生素高度敏感;对青霉素、头孢拉定、新霉素等7种抗生素耐药。分离菌株HD01是中华鳖病原菌,养殖时可选用氟苯尼考、庆大霉素及多西环素等药物进行防控。     

中华鳖弗氏柠檬酸杆菌的分离、鉴定及药物敏感性试验

从患病中华鳖（Trionyx sinensis）内脏中分离到一株细菌（LCJY-002）。ATBExpression型微生物鉴定系统艋示：该菌为弗氏柠檬峻杆菌（Citrobcwter fundii）。16SrDNA分析得到1条长度为1456bp的核甘=酸序列（genBank登录号为KC691177）；Blast分析显示：该分离株与弗氏柠檬酸杆菌的同源性达99％，在系统发育树上与C．frgulldii聚为一支。鉴定结果确认：菌株LCJY-002为弗氏柠檬酸杆菌。人工回归感染试验证文：该菌具有敛病性，PCR检测表明：分离的弗氏柠檬酸杆菌具有c屈毒力因子。药敏试验结果显爪：该菌对16种抗菌药物中的庆大霉素等7种药物敏感。     

对虾养殖水体中一株降解氨氮芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵配方的优化

本实验在(28±1)℃下从对虾养殖池塘中分离筛选具有氨氮(包括游离氨NH_3、铵盐NH~+_4)降解效果的芽孢杆菌(Bacillus),并采用单因素实验对筛选出的芽孢杆菌进行发酵配方优化,以此挑选出低廉高产的发酵培养基配方。菌株分离筛选及氨氮降解实验结果显示:经初步分离,得到5株芽孢杆菌(DS1、DS2、DS3、DS4、DS5),再通过氨氮降解实验得到一株能够显著降解水体氨氮的芽孢杆菌DS5,5 d内菌株DS5对水体氨氮降解迅速,在第4天达到最大降解率(36.41±0.07)%,且最后3 d水体氨氮持续稳定在36%左右;通过菌株16S rDNA序列分析及生理生化鉴定,将菌株DS5(GenBank登录号:MK629979)初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株DS5发酵配方实验结果表明:在28℃下,当碳源为5‰葡萄糖、氮源为10‰豆粕、无机盐为5‰氯化钠时,菌株生长良好,培养基含菌数较高,综合考虑成本、菌含量等因素,选择5‰葡萄糖-10‰豆粕-5‰氯化钠作为该菌的最优发酵培养基配方。     

一株短小芽孢杆菌B1的筛选鉴定及其抗菌特性研究

为筛选抗水产弧菌的益生菌株,自西沙海域采集的珊瑚和海水样品共分离到125株细菌,从中筛选出1株无溶血性且对多株病原菌具有拮抗作用的海洋细菌B1。基于生理生化及16SrDNA序列鉴定海洋细菌B1为短小芽孢杆菌。以副溶血弧菌13150为病原指示菌,用琼脂扩散法测定发酵液抑菌活性,并通过卤虫浸泡方式和药敏试验方法检测短小芽孢杆菌B1的安全性,同时进行温度、酸碱度、盐度的发酵条件优化研究。试验结果显示,短小芽孢杆菌B1对副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌等有显著的拮抗作用;共培养试验显示,加入等量短小芽孢杆菌B1无菌上清液可显著抑制副溶血弧菌的生长;安全性试验发现,短小芽孢杆菌B1对卤虫的72h半致死密度为108cfu/mL,副溶血弧菌13150的72h半致死密度为105cfu/mL。此外,药敏试验表明,短小芽孢杆菌B1只对20种常规抗生素中的5种产生抗性;优化后的短小芽孢杆菌B1发酵条件为:温度30℃,pH 7.0,NaCl质量分数为2%。研究表明,短小芽孢杆菌B1具有防治水产养殖病原弧菌的应用潜力。     

鳖源柠檬酸杆菌属新种的分离鉴定与多位点序列

为确定2020年10月湖北一中华鳖发病的病原体及病原特征，实验从该养殖场患病中华鳖个体肝脏中分离获得1株优势菌A3，经理化性状及16S rRNA序列鉴定，表明菌株A3属于柠檬酸杆菌。进一步通过recN序列鉴定，发现A3与布氏柠檬酸杆菌recN碱基一致性为95.58%～96.01%，与柠檬酸杆菌属其他种的recN碱基一致性均低于93.72%，表明菌株A3为柠檬酸杆菌属潜在新种。人工回归感染实验证实菌株A3是引起本次中华鳖患病的病原菌。与嗜水气单胞菌相比，A3感染病程偏慢但致死率较高。药敏实验结果显示，菌株A3对美罗培南等10种抗生素敏感，对氟苯尼考等9种抗生素耐药。多位点序列分型(MLST)鉴定显示，菌株A3属于新序列型(ST)。对柠檬酸杆菌多位点序列分型的7个管家基因序列进行级联并构建系统发育树，结果显示，柠檬酸杆菌的进化与菌株的分离源及分离地点没有明显关系；菌株A3与分离自欧洲人源的ST120型菌株Citfre2580亲缘关系最近。本研究对中华鳖的病原进行了分离鉴定，并阐述了一种更可靠的柠檬酸杆菌鉴定方法，旨在引起人们对柠檬酸杆菌致病性的重视，为水产品健康养殖提供一定的参考依据。     

带鱼肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵液抗菌性质研究

从带鱼肠道中分离筛选到1株具有广谱抗菌活性的菌株JFL15,其发酵液对嗜水气单胞菌、美人鱼发光杆菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌、铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、查氏弧菌均有较强抑菌作用。通过形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析以及系统发育进化分析,菌株JFL15与暹罗芽孢杆菌的同源性最高,达98.05%,初步鉴定为暹罗芽孢杆菌。对暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液进行研究发现,暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液对酶、温度、酸碱度和紫外线均不敏感,且发酵产物储存较长时间后仍具有较强抑菌活性。     

病原维氏气单胞菌的分离鉴定研究

气单胞菌（Aeromonas）是一类人和水产经济动物的严重致病菌,本文从青岛某中华鳖养殖场不明原因死亡病例的病灶部位分离一株病原菌HBJY01,对该菌进行鉴定。采用传统鉴定方法结合HBJY01的16S rRNA和gyrB基因克隆的方法,鉴定该菌的属种（Aeromonas）。结果表明传统鉴定方法与分子生物学方法鉴定结果一致。人工感染实验结果表明HBJY01感染健康中华鳖,死亡率100%,症状与不明原因死亡的中华鳖大体相同。取其病变肝脏分离到相同病原菌。     

一株芽孢杆菌PC024的鉴定及其抗WSSV感染效果的研究

为了筛选WSSV的防病益生菌株,从健康中国明对虾消化道分离纯化一株芽孢杆菌PC024,经Biolog碳源利用反应、ATB微生物自动鉴定系统、脂肪酸气相色谱分析得出该菌株与坚强芽孢杆菌的生理生化特性最为相似,该菌株为革兰氏阳性菌,有一根端极鞭毛；细胞呈球杆状,有椭圆芽孢；单个菌落呈圆形,中间略微凸起；16S rRNA序列分析表明,该菌株与坚强芽孢杆菌进化地位最接近,同源性均达到100％,综合以上4种方法的鉴定结果,该菌株被鉴定为坚强芽孢杆菌.将已鉴定的PC024菌株粘附于对虾饲料表面投喂给凡纳滨对虾20 d后,进行WSSV肌肉注射感染,测定投喂和感染后对虾血淋巴上清和肝胰腺的免疫相关酶活性,并对对虾肠道总菌数和添加菌PC024进行计数及鉴定.结果表明:添加该菌的实验组对虾相对存活率高,相对保护率达33.7％；投喂含该菌饲料的实验组对虾血清和肝胰腺的相关免疫酶活性较对照组显著提高,对虾肠道总细菌数始终显著高于对照组,并在实验组能够分离得到坚强芽孢杆菌,坚强芽孢杆菌PC024可作为WSSV的防病益生菌株应用于对虾养殖生产.     

罗非鱼源蜡样芽孢杆菌分离、鉴定及药敏特性研究

从福建漳州某养殖场患出血病死亡的罗非鱼肝脏、肾脏及脾脏分离到一株致病性菌株FJLF。对该菌进行了形态特征观察、理化特性测定及16S rRNA序列分子鉴定。生理生化特征和16S rRNA基因序列分析结果显示,分离到的FJLF株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。人工感染该菌后发病鱼出现与自然发病类似症状,且从病灶中分离到与原感染菌一致菌株。腹腔注射后该菌株对罗非鱼的半致死剂量LD_(50)=2.30×10~6CFU/g。FJLF株对诺氟沙星、头孢噻肟、新霉素及卡那霉素等8种抗生素高度敏感;对环丙沙星、痢特灵、红霉素及链霉素中度敏感;对苯唑西林、青霉素、头孢拉定及阿莫西林等10种抗生素耐药。     

池塘芽孢杆菌的筛选、鉴定和生长特性研究

以高产南美白对虾池塘中分离的芽孢杆菌为研究对象,通过筛选和形态学、理化特性以及核酸特征测定,鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,编号为ZJ0519),并对其生长特性进行了初步研究.结果表明,菌株ZJ0519生长最适温度为30～45℃,最适初始pH值为6.0～7.0,并具有广盐性,在盐度为0～30的培养基中都可以生长.此外,菌株ZJ0519发酵液代谢产物有机酸组分分析显示,主要为乳酸和醋酸,其中乳酸产量可达(7.65±0.14)g/L;为B.coagulans作为益牛菌在水产养殖池塘微生态调节中的应用奠定了基础.     

斑点叉尾(鮰)"腹水症"病原的分离鉴定及体外芽孢杆菌拮抗试验

为了解斑点叉尾(鮰)(Ictalurus punctatus)"腹水症"的发病原因,提高防控技术,试验在佛山市某渔场患典型"腹水症"的病(鮰)上分离出优势菌落,通过形态学观察、生化及分子生物学鉴定确定该细菌为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).通过对健康斑点叉尾(鮰)的回归感染实验发现,与原感染鱼发病症状相似,且分离鉴定得到相同病原菌.体外药敏试验结果显示:该温和气单胞菌菌株对恩诺沙星、氟苯尼考等7种药物敏感,而对四环素、强力霉素耐药.本研究还探讨了4种芽孢杆菌对分离的温和气单胞菌的拮抗作用,结果表明地衣芽孢杆菌对该病原的拮抗作用最好.     

枯草芽孢杆菌B7的分离和净化水质的初步研究

对水产养殖水体及底泥中的芽孢杆菌进行分离,得到四株芽孢杆菌。筛选各项指标较好的B7,研究其对水质的净化作用。结果表明,添加枯草芽孢杆菌后,池水的氨氮和亚硝酸盐浓度比对照池显著降低,即枯草芽孢杆菌B7对水质具有明显的净化作用。     

Isolation of a novel strain of Bacillus pumilus from penaeid shrimp that is inhibitory against marine pathogens.

A bacterium was isolated from the mid-gut of healthy black tiger shrimp, Penaeus monodon , based on a large zone of inhibition in mixed culture on solid medium. The isolate was a Gram-positive, motile spore former, with an optimum pH range for growth in tryptone soya broth containing 2% NaCl of between pH 6 and 9. The bacterium was highly salt tolerant with concentrations between 0% and 8% having no detrimental effect on growth. The isolate was identified as Bacillus pumilus based on physiological capabilities using the API50CHB and Biolog systems. Amplification and sequencing of the 16S rRNA gene followed by phylogenetic analysis confirmed its identity. The Bacillus pumilus isolate was strongly inhibitory against the marine bacterial pathogens Vibrio alginolyticus , V. mimicus and V. harveyi , and weakly inhibitory against V. parahaemolyticus in cross-streaking assays on solid medium. The organism was marginally self-inhibitory, and inhibited B. licheniformis and B. subtilis . The suitability of the B. pumilus isolate for use as a probiotic in farmed shrimp was further supported by the absence of any of the known B. cereus enterotoxin genes. Based on these in vitro results, in vivo safety and efficacy trials are underway to determine suitability of the novel strain as a commercial probiotic.     

一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其对仿刺参免疫的影响

从大连湾地区健康的刺参养殖池塘沉积物中分离出一株优势菌株B4,通过菌落特征、生理生化特性和16SrDNA同源性分析,确定菌株B4为芽孢杆菌属。该菌株在温度20~35℃,pH 6~9,盐度3~7.5下生长良好。采用108cfu/mL密度的B4菌液投喂仿刺参,投喂后第0、7、14、21d和第28d测定仿刺参体腔液中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和酚氧化酶的活性。试验结果表明,第7d时,试验组仿刺参腔液中碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶和酚氧化酶的活性显著高于对照组(P0.05);第21d时,试验组仿刺参腔液中溶菌酶的活性显著高于对照组;第28d时,酸性磷酸酶的活性与对照组具有极显著差异(P0.01),说明B4可提高仿刺参体腔液中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和酚氧化酶5种免疫酶的活性,对仿刺参有一定的免疫刺激作用。     

鲟鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

20 0 0年 9月 11日 ,河南信阳和厚特种水产养殖场养殖的俄罗斯鲟、杂交鲟突然发病 ,4天内死亡 82 0尾 ,重达 5 5 0ｋｇ。病鱼腹部、嘴四周、眼睛、硬鳞基部出血 ,肛门红肿。剖检有淡红色腹水 ,肝脏肿大呈土黄色 ,有坏死灶。肠系膜、脂肪组织和生殖腺等有出血斑。后肠及螺旋瓣出血发炎 ,并充满泡沫状粘液物质。我们取濒死病鱼肝脏级织印片作革兰氏染色镜检 ,发现有许多革兰氏阴性短杆菌 ,经分离培养、生理生化试验及动物试验鉴定为嗜水气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ)。现将分离鉴定结果报告如下。1　材料与方法1 1　病鱼…     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及在生物絮团对虾养殖中的应用

从对虾养殖池中分离到1株细菌(编号2013042402,简称菌株02),分别用16S rDNA序列比对法和细菌全细胞脂肪酸气相色谱法对该菌进行鉴定.结果显示,菌株02为芽孢杆菌(Bacillus sp.).为探讨该芽孢杆菌在生物絮团对虾养殖中的使用效果,实验分别设置加菌加糖组(菌株02的量为2.0× 104 CFU/ml,蔗糖量为饵料的70％)、加菌组、加糖组(生物絮团组)及空白对照组,研究了菌株02对养殖水质(温度、盐度、溶氧、pH、氨氮及亚硝酸氮)、对虾存活率及水体中主要菌群组成等指标的影响.结果显示,加菌加糖组能显著降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮浓度,提高对虾存活率.生物絮团对虾养殖系统中添加菌株02,能够改善菌群结构,抑制弧菌生长.研究结果可为生物絮团对虾养殖中定向培养有益微生物提供技术支持.