鲍消化道及其养殖水体异养菌的耐药性研究

采用纸片扩散法对分离自福建省皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)消化道及其养殖水体中的284株异养细菌(其中消化道菌131株,水体菌153株)进行药物敏感测试,以期了解其耐药性概况。结果显示,皱纹盘鲍消化道与养殖水体异养菌对多种抗菌药物的耐药率差异不明显,大部分菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素、利福平产生耐药性,耐药率最高达83.95%,而对诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素耐药率较低,受试的水体异养菌对诺氟沙星耐药率为0;不同来源菌株的多重耐药(multiple antibiotic resistance,MAR)现象普遍,消化道及其养殖水体异养菌的多重耐药率均值分别为59.15%和51.31%。该研究同时发现相同分离源的菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素和利福平的耐药率呈现一定的季节波动规律,消化道异养菌于9月耐药率最低,而水体异养菌耐药率在6月最低。结果表明,皱纹盘鲍消化道及水体异养菌的多重耐药率较高,耐药状况较严重。     

育肥饲料中虾青素含量对雄性中华绒螯蟹肠道和鳃部可培养优势细菌数量和组成的影响

在育肥饲料中添加虾青素会影响中华绒螫蟹肠道及鳃内的可培养优势菌群以及机体的免疫力,本实验旨在探讨饲料中虾青素含量及养殖水体对其肠道和鳃部菌群的影响。采用不同虾青素含量的饲料(0.00、26.60、41.62、81.37和75.35 mg/kg,分别对应饲料1#~5#)对雄性中华绒螫蟹进行育肥70 d后,利用基础培养基和选择性培养基对其肠道、鳃及养殖水体中的细菌进行传统分离和纯化,所得菌株进行16S rRNA测序,再进行同源性分析后做系统进化树。结果发现,在分离获得的106株细菌(登录号:KU570293~KU570368,KU570370,KU570372~KU570383,KU601302~KU6013 16,KU720553)中,92株为优势菌株,其中,肠道、鳃部和水体各29、32和31株。肠道中的可培养优势细菌属于柠檬酸杆菌属、假单胞菌属和气单胞菌属;而鳃中可培养优势细菌属于柠檬酸杆菌属、芽孢杆菌属、假单胞菌属和气单胞菌属;养殖水体中可培养优势细菌属于芽孢杆菌属、气单胞菌属、柠檬酸杆菌属、假单胞菌属和黄杆菌属。饲料2#组肠道中可培养细菌总数最高(1.06×10~8cfu/g);饲料5#肠道中的潜在致病菌数量最低,但其可培养细菌总数显著高于其他饲料组;饲料3#组肠道和鳃中潜在致病菌数量相对较高。研究表明,饲料中添加不同含量的虾青素能够显著影响雄性中华绒螫蟹肠道和鳃中的菌群构成,但对水体中可培养细菌数量无显著影响。本研究首次对投喂不同含量虾青素饲料的育肥期雄性中华绒螫蟹肠道、鳃及养殖水体可培养的优势细菌数量和组成进行分析,探究了饲料中虾青素含量以及养殖水体与蟹肠道内可培养细菌之间的联系,为中华绒螫蟹营养免疫和菌群调控提供了理论基础。     

水产养殖中使用的抗菌药物及细菌耐药性

目前，抗菌药物在水产养殖动物疾病防治中占有重要地位，然而，在水产养殖中使用抗菌药物也可产生一系列的副作用，例如细菌耐药性的产生和药物在鱼体和环境中的残留，本文就水产药物使用的历史，现状，适应症，副作用，耐药性的现状，来源，产生机制，耐药菌判定的标准，以及该领域的研究现状等问题进行综述与分析，以便为合理使用抗菌药物提供理论依据。     

蛭弧菌及其在水产养殖业的应用

蛭弧菌的生物学名称为噬菌蛭弧菌。蛭弧菌是一类专门捕食细菌的寄生性细菌,具有独特的裂解细菌的生物学特性,能够在较短的时间内裂解水体中的沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shiglla)、这形杆菌属(Proteus)、埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、欧文氏菌属(Erwina)、弧菌属(Vibri)等属的种类.可将致病菌限制在较低水平上,同时还可有效地控制养殖水体的COD、硫化物和氨氮存留量,因此.利用其这一特性作为水产养殖水体的生物化物和"活性抗生素"具有广泛的发展前景,对开拓水产养殖动物疾病防治新途径具有重要意义。     

养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性分析

为了解引起养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性情况,针对2002–2010年由不同地区病样分离的27株细菌性病原进行了16S r DNA鉴定,并采用K-B法测定了27株细菌对22种抗生素的耐药性,分析了病原菌的耐药谱及耐药率变化。结果显示,大菱鲆腹水病病原菌主要有大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、假交替单胞菌(Pseudoalteromonas espejiana)。山东青岛地区以大菱鲆弧菌为主,威海地区以迟钝爱德华氏菌为主,烟台地区菌株种类分布平均。5类细菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、复方新诺明耐药率高于50%。只有1株迟钝爱德华氏菌对氟苯尼考产生了耐药,其余菌株对其均没有耐药性,且在长期使用中不易产生耐药性,证实氟苯尼考为当前防治腹水病的一种良好抗菌药物。27株病原菌的耐药谱数量为27个,每个菌株具备自己独特的耐药谱,74.1%的菌株对10种以上的抗菌药物产生了耐药性,均有多重耐药性。     

水生动物药物残留的危害与控制

1 水产动物药物残留的危害1.1 耐药性反应 在水生动物饲料中长期添加促生长抗菌素或生产中滥用药物会导致水生动物体内的细菌产生耐药性。研究表明,随着抗菌药物的不断应用,细菌中耐药菌株的数量在不断地增加。这些细菌的耐药性可以通过耐药因子(R-质粒)在人群中细菌、动物群中细菌和生态系统中细菌间互相传递,导致致病菌产生耐药     

养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性分析

为了解引起养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性情况,针对2002-2010年由不同地区病样分离的27株细菌性病原进行了16S rDNA鉴定,并采用K-B法测定了27株细菌对22种抗生素的耐药性,分析了病原菌的耐药谱及耐药率变化.结果显示,大菱鲆腹水病病原菌主要有大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、假交替单胞菌(Pseudoalteromonas espejiana).山东青岛地区以大菱鲆弧菌为主,威海地区以迟钝爱德华氏菌为主,烟台地区菌株种类分布平均.5类细菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、复方新诺明耐药率高于50％.只有1株迟钝爱德华氏菌对氟苯尼考产生了耐药,其余菌株对其均没有耐药性,且在长期使用中不易产生耐药性,证实氟苯尼考为当前防治腹水病的一种良好抗菌药物.27株病原菌的耐药谱数量为27个,每个菌株具备自己独特的耐药谱,74.1％的菌株对10种以上的抗菌药物产生了耐药性,均有多重耐药性.     

水产动物源细菌耐药性与预防控制

细菌耐药性是指细菌对于抗菌药物作用的耐受性。细菌耐药性的形成,是细菌进化发展的结果,是细菌适应性的表现,但它却给养殖业的发展和人类的健康带来威胁。本文首先综述了水产动物源细菌耐药性研究现状,主要包括质粒介导的水产动物源细菌耐药性、细菌耐药基因、细菌耐药性遗传学机制等;其次,从病原菌耐药性会导致水产疾病流行爆发和水产细菌耐药性对人类公共卫生安全的影响两方面,分析了水产动物源细菌耐药性的危害;最后,从合理、规范用药,加快水产疫苗和新型抗菌药物替代品的研制与应用,加强水产动物致病菌耐药性监测等方面,提出了预防和控制水产动物源细菌耐药性的对策和措施。     

养殖牙鲆致病性弧菌的鉴定及药敏分析

2020年丹东东港市某养殖厂养殖1龄牙鲆(Paralichthys olivaceus)突发病害,表现为腹水病症状。取患病的5尾养殖牙鲆的鳃、肝、脾、肠道、腹水为材料进行细菌分离及纯培养,选择优势菌株通过全自动细菌分析仪及16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定,结果表明分离纯培养的14株菌(DS200401-DS200414)共鉴定出2种,其中1种为该病的致病菌:弧菌属灿烂弧菌(Vibrio splendidus)。随后进行人工感染试验和药敏试验。用12种抗菌药物对3种菌进行药敏试验,结果显示在不同菌株间无明显的敏感与耐药性差异。     

高效脱氮降磷菌株的筛选及在工厂化鳗鲡养殖中的应用

为提高对工厂化鳗鲡精养殖水体水质的原位改良能力和养殖尾水的氮磷减排，通过对鳗鲡养殖尾水处理池中采集的淤泥进行分离筛选，获得一株高效好氧反硝化聚磷菌。经16S rDNA序列鉴定分析，确定为坦氏不动杆菌(Acinetobacter tandoii),将其命名为坦氏不动杆菌PP-1。开展了菌株PP-1对鳗鲡养殖水质总磷和硝酸盐氮降解效果的试验，结果显示水力停留时间在12 h、24 h的总磷降解率分别达到56.31%和81.82%,硝酸盐氮降解率分别达到65.5%和90.37%。开展了菌株PP-1在美洲鳗鲡工厂化养殖中的应用研究，结果显示，水力停留时间在24 h的总磷和硝酸盐氮的降解率分别达到58.8%和56.1%。研究表明，坦氏不动杆菌PP-1有助于降低美洲鳗鲡养殖水体的总磷和硝酸盐氮质量浓度，促进美洲鳗鲡的生长，同时具备良好的应用安全性。该研究为解决鳗鲡养殖水体中的氮磷同步降解问题提供了新的参考，具有重要的应用价值。     

水体中泼洒复合乳杆菌对尼罗罗非鱼养殖池塘环境、肠道和鳃健康的影响

研究在尼罗罗非鱼养殖池塘中添加复合乳杆菌对养殖池塘环境、尼罗罗非鱼肠道和鳃健康的影响,为乳杆菌在尼罗罗非鱼健康养殖中的应用提供基础。在尼罗罗非鱼养殖池塘水体中泼洒复合乳杆菌(对照组:0;实验组:1.0×104 CFU/mL),实验周期为10周。复合乳杆菌的成分为干酪乳杆菌和酸鱼乳杆菌,比例为1:2.2。监测池塘水质指标、罗非鱼肠道和鳃的免疫及抗氧化指标,并运用高通量测序技术(Illumina MiSeq),比较对照组和实验组水体、底泥、尼罗罗非鱼肠道和鳃黏膜共生菌群落结构差异。结果显示,从第7周开始,实验组水体中的硝酸盐含量始终低于对照组,实验组比对照组降低了72.68%、72.00%、26.27%和21.46%;实验组水体中的总氮含量在从第6周开始低于对照组,分别降低了43.39%、44.64%、15.64%、37.57%和34.49%;实验组水样中的总磷含量从第4周开始低于对照组,分别降低了40.91%、33.33%、50.00%、33.33%、17.39%、39.29%和25.71%。与对照组相比,实验组尼罗罗非鱼肠道的碱性磷酸酶(AKP)活性提高了45.04%,实验组尼罗罗非鱼鳃的总超氧化物歧化酶(SOD)和AKP分别提高了58.26%和60.99%。复合乳杆菌的添加对尼罗罗非鱼养殖池塘水体菌群结构影响较大,并未影响池塘底泥的菌群结构,影响了尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构,其中条件致病菌不动杆菌属、泛菌属细菌的相对丰度降低,而有益细菌鲸杆菌属的相对丰度增加。因此,在养殖水体中泼洒适当浓度的复合乳杆菌可以改善池塘水质,提高尼罗罗非鱼肠道和鳃的免疫力、抗氧化能力,同时调节养殖水体、尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构。     

凡纳滨对虾和罗氏沼虾肠道微生物及抗生素抗性基因多样性分析

探究凡纳滨对虾和罗氏沼虾肠道微生物及抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes, ARGs)种类的差异。通过高通量测序和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)技术分析2种虾肠道微生物群落结构差异和微生物多样性,并运用PCR方法检测了2种虾肠道细菌常见38种ARGs的携带情况。结果显示,获得凡纳滨对虾和罗氏沼虾肠道细菌有效序列分别为42 795和40 713条,物种注释单元(operational taxonomic unit, OTU)数目分别为124和82,分类地位明确的细菌种类分别隶属5个门、17个属和5个门、16个属。凡纳滨对虾肠道细菌的优势类群为变形菌门,所占比例为75.45%,优势菌属为副球菌属(25.83%)和不动杆菌属(25.24%);罗氏沼虾肠道细菌的优势类群是厚壁菌门(49.74%),优势菌属为乳球菌属(49.01%)和弧菌属(29.98%)。凡纳滨对虾肠道细菌(2.19)Shannon指数高于罗氏沼虾肠道细菌(1.78),表明前者肠道细菌多样性大于后者。DGGE图谱的分析结果与高通量测序一致,2种虾肠道细菌种类差异很大。PCR结果显示,凡纳滨对虾肠道细菌携带15种ARGs,罗氏沼虾肠道细菌携带14种ARGs。本实验表明凡纳滨对虾肠道细菌的群落种类多样性、OTU丰富度、物种总数和ARGs种类均高于罗氏沼虾肠道细菌,为后续肠道微生物资源的挖掘提供了理论依据。     

拟态弧菌的绿色荧光蛋白标记及其在感染草鱼体内的动态分布

为了示踪研究拟态弧菌感染草鱼的动态过程,将增强型绿色荧光蛋白编码基因EGFP克隆至质粒pBAD24,并转化到拟态弧菌04-14菌株构建荧光标记重组菌.重组菌经阿拉伯糖诱导后,能高效表达EGFP蛋白;荧光显微镜观察和流式细胞仪检测均发现重组菌能够发出明显的绿色荧光信号,且传至30代后质粒稳定率仍为100％;生物学特性检测结果显示,与野生株相比,重组菌的形态、生长特性和细胞黏附性均未发生明显改变.用标记重组菌浸泡感染草鱼,定点采集鳃、肠道、肌肉、头肾、脾脏和肝脏,借助荧光信号检测4d内细菌在不同组织脏器中的动态分布.结果发现感染4h后即可在肠道和鳃中检测到绿色荧光信号,标记菌检出量分别为3.60×108和2.36×106 CFU/g,直至10 h,其含量无明显变化,12 h后含菌量逐渐下降,但持续存在直至鱼死亡.标记菌在肌肉、头肾、脾脏和肝脏中呈现相似的动力学,感染24 h后才检测到荧光信号,24～ 85 h时间段含菌量呈现先增加后下降的变化,48 h达到峰值,检出量分别为9.58×104(肌肉)、8.75×104(头肾)、1.50×104(脾脏)和4.50×104 CFU/g(肝脏),但均低于肠道中的检出量,结果表明肠道是拟态弧菌黏附定植与繁殖的主要靶器官.     

Chronic effect after acute exposure to commercial petroleum fuels on physiological status of Nile tilapia, Oreochromis niloticus (L.)

Quantitative and qualitative analyses of bacterial flora associated with pond water, gills, and intestine of polycultured healthy common carp (Cyprinus carpio) and African catfish (Clarias gariepinus) were carried out and identified to species level where possible. Total viable bacterial counts in the pond water ranged from 9.2?±?5.5?×?10³ to 6.6?±?5.1?×?10⁴ colony-forming units (cfu)/mL; in the gill filaments of carp and catfish, 3.3?±?3.8?×?10⁶ to 7.9?±?5.6?×?10⁶ and 1.1?±?4.6?×?10⁵ to 2.3?±?5.2?×?10⁶ cfu/g, respectively; and in the intestine of carp and catfish, 1.4?±?2.9?×?10¹⁰ to 1.7?±?6.0?×?10¹¹ and 2.7?±?3.4?×?10¹⁰ to 1.0?±?4.5?×?10¹¹ cfu/g, respectively. Gram-negative rod-shaped bacteria dominated the populations: 90% in carp, 89% in catfish, 80% in water, and 86% in the total populations. Altogether, 14 bacterial species of 10 genera were identified in total populations. Pond water bacteria had a reflection on the bacterial composition of the gills and intestine of carp and catfish. Aeromonas hydrophila, Shewanella putrefaciens, Vibrio cholerae, Staphylococcus sp., and Vibrio vulnificus appeared as the common bacteria in the populations, where the first three were highly significantly abundant (P?<?0.0001). Moreover, A. hydrophila was the most significantly dominant bacteria (32%; P?<?0.005) among the total populations. Pantoea sp. and Pasteurella pneumotropica were present only in carp and catfish, respectively, but Corynebacterium urealyticum and Micrococcus sp. were present only in pond water.     

生态基对草鱼生长性能、肠道及水体微生物的影响

将无纺布生态基应用于草鱼养殖生产中,研究生态基对草鱼生长、免疫和养殖水质的影响,并利用PCR-DGGE技术分析了草鱼肠道和养殖水体微生物群落结构的动态变化。结果显示,实验组草鱼的末重、增重率均显著高于对照组(P0.05),饲料系数显著低于对照组(P0.05);草鱼血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)活性水平均显著高于对照组(P0.05),诱导型一氧化氮合酶(iNos)和总一氧化氮合酶(tNos)均显著低于对照组(P0.05);除了在第30天时实验组TSS水平显著低于对照组(P0.05),整个过程挂设无纺布生态基对养殖水质参数影响不明显(P0.05)。PCR-DGGE检测结果显示:Cetobacterium somerae是对照组养殖水体和对照组草鱼肠道特异细菌;维氏气单胞菌是养殖水体和对照组草鱼肠道特异细菌,对照组养殖水体的分布明显比实验组丰富,在生态基中不存在;生态基的细菌群落构成和挂设生态基的实验组养殖水体相似性较高,最高时达到63%;绿弯菌占生态基细菌总量的10%左右,而在养殖水体中仅为5%。研究表明,生态基的应用有效促进了草鱼的生长,降低了饲料系数,提高了草鱼的非特异性免疫功能,降低养殖水体TSS浓度。生态基的应用改变了水体细菌群落组成,减少了养殖水体和草鱼肠道中一些条件致病菌的存在。     

两种疾病发生对养殖半滑舌鳎肠道菌群结构的影响分析

为研究疾病发生情况下鱼类肠道菌群的结构变化,运用高通量测序方法分别对感染腹水病和皮肤溃疡病的工厂化养殖半滑舌鳎病鱼及同一养殖系统中健康鱼的肠道菌群结构进行了对比分析。结果发现,养殖半滑舌鳎肠道中的细菌种类要明显少于环境中的细菌种类,仅为养殖池进水和颗粒饲料中细菌种类总数的14.3%~44.7%。在疾病发生后,病鱼肠道中的细菌种类数量仅是同一养殖系统中健康鱼肠道细菌种类数量的45.8%和64.5%,病鱼肠道中细菌多样性下降非常明显。进一步分析肠道菌群结构的组成发现,虽然发病鱼和健康鱼肠道中超过60%的细菌种类不相同,但优势菌群的结构组成差异不明显,丰度最高的前10种细菌种类基本相同,其比例超过肠道相对总菌量的80%。不同疾病的发生对半滑舌鳎肠道菌群结构的影响也不同,腹水病会造成肠道中优势菌株的种类和相对丰度都发生比较明显的改变,而皮肤溃疡病发生前后肠道菌群结构组成几乎没有变化。研究表明,养殖半滑舌鳎的肠道菌群结构相对比较保守,而且并不是所有的疾病种类都会引起肠道菌群结构发生改变。     

Quantitative and qualitative studies on bacterial flora of hybrid tilapia (Oreochromis niloticus × O. aureus) cultured in earthen ponds in Saudi Arabia

The bacterial flora of the rearing pond water and sediment as well as the gills and intestine of healthy hybrid tilapia cultured in Saudi Arabia was estimated quantitatively and qualitatively, the isolates being identified at genus or species level. Total viable counts of bacteria (measured as colony‐forming units, cfu) were in the range 5.6 ± 0.8 × 10³ to 2.4 ± 1.2 × 10⁴ cfu mL^?1 in pond water; 9.3 ± 1.1 × 10⁶ to 1.9 ± 1.5 × 10⁸ cfu g^?1 in sediment; 7.1 ± 0.7 × 10⁵ to 8.7 ± 1.1 × 10⁶ cfu g^?1 in the gills of tilapia; and 3.4 ± 1.8 × 10⁶ to 5.8 ± 0.4 × 10⁷ cfu g^?1 in the intestine of tilapia. In total, 15 bacterial genera and 18 species were identified. Pond water and sediment bacteria reflected the bacterial composition in the gills and intestine of tilapia. In contrast to gill bacteria, more diversification was observed in intestinal bacteria. Corynebacterium urealyticum, Shewanella putrefaciens and Aeromonas hydrophila predominated in all samples. In pond water, C. urealyticurn, S. putrefaciens, A. hydrophila, Flavobacterium sp. and Pseudomonas sp. were the most predominant bacterial species (prevalence > 10%), whereas A. hydrophila, C. urealyticum, S. putrefaciens and Escherichia coli were predominant in pond sediment, and C. urealyticum, S. putrefaciens and A. hydrophila were predominant in both the gills and intestine of tilapia.     

Aerobic Bacterial Flora of Common Carp (Cyprinus carpio L.) Cultured in Earthen Ponds in Saudi Arabia

ABSTRACT

Quantitative and qualitative estimation of bacterial flora present in pond water, sediments, gills, and intestine of healthy common carp Cyprinus carpio cultured in Saudi Arabia were performed and identified to species level where possible. Mean total viable bacterial counts in pond water ranged from 1.2?±?2.9?×?10⁴ to 2.5?±?3.5?×?10⁵ cfu/mL; in sediments, 9.3?±?2.1?×?10⁷ to 2.7?±?3.5?×?10⁹ cfu/g; in gills filaments, 4.3?±?2.9?×?10⁶ to 1.6?±?3.9?×?10⁷ cfu/g; and in intestine, 8.7?±?4.1?×?10⁹ to 5.4?±?3.2?×?10¹⁰ cfu/g. Gram-negative rod-shaped bacteria dominated (76%) the populations. In total, 12 bacterial genera and 15 species were identified. Pond water and sediment bacteria had the reflection on bacterial composition of gills and intestine of carp. Intestinal bacteria showed more diversification in contrast to gill bacteria. Aeromonas hydrophila, Shewanella putrefaciens, Vibrio cholerae, Corynebacterium urealyticum, Vibrio vulnificus, Vibrio sp., and Staphylococcus sp. were the common bacteria in all the populations. In pond water and carp intestine, A. hydrophila, S. putrefaciens, V. cholerae, and C. urealyticum were the most dominant bacteria (prevalence ≥ 10%) where pond sediments and the carp gills experienced with more one dominant bacterium V. vulnificus. Only the A. hydrophila covered one fourth (25%) of the total bacterial populations.