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采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对造纸废水造成的斑马鱼基因纽DNA损伤进行检测.首先进行急性毒性试验,确定造纸废水96h-LC50浓度为11.328%.从50条RAPD引物中筛选出20条对正常斑马鱼能稳定扩增且重复性好的引物用来检测.利用造纸废水(原浓度的3.8%)对斑马鱼染毒96h,随机提取染毒后6尾斑马鱼基因组DNA,用筛选的20条引物对其进行PcR扩增.用同样的引物对未染毒对照组的另外10尾斑马鱼基因组DNA进行分析,比较两组鱼的RAPD图谱,从而分析造纸废水对斑马鱼的致突变作用.20个引物中引物S112可以检测出造纸废水染毒前后斑马鱼基因组DNA的差异.用引物S112,选取的对照组每个斑马鱼DNA的RAPD谱带均为8条亮带,随机抽取的染毒组20尾鱼中,每尾斑马鱼基因组DNA的RAPD谱带为5~7条,其中有20尾出现了71 3bp稳定条带的缺失,14尾出现了480bp稳定条带的缺失,7尾出现了1 332bp稳定条带的缺失.这20尾鱼的RAPD图谱中的条带总数为120条,低于20尾对照组的条带总数(160条).本文得出的结果显示了造纸废水对斑马鱼的基因组DNA损伤作用,同时验证了RAPD技术在检测造纸废水对水生动物基因组申的致突变作用的可行性. 相似文献
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利用20个高GC含量的8bp的随机引物开展野生鲮鱼(Cirrhina molitorella)DNA扩增指纹的研究,以建立鲮鱼13NA扩增指纹(DAF)技术,包括引物设计,PCR反应条件的设置。结果显示,13AF引物浓度相对较高,最佳引物浓度为3.5μmol/L。DAF引物pn-16(GCGACCTG)扩增表明,DAF有好的重复性,引物pn-16扩增特征性谱带可用于鉴定鲮鱼。DAF扩增产物可揭示鲮DNA的多态性。同时建立了DNA尿素-聚丙烯酰胺凝胶银染快速检测技术和最佳银染参数,银染检测大约需要1h,建立包括固定、漂洗、染色、显色、停显色的银染程序和尿素-聚丙烯酰胺凝胶湿法与干法的保存方法。 相似文献
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合浦珠母贝DNA的抽提和RAPD反应体系的优化 总被引:9,自引:5,他引:9
分别从保存于-70℃和95%乙醇的合浦珠母贝组织提取总DNA。结果表明,乙醇保存标本用双蒸馏水预处理后所提的DNA与-70℃保存的标本所提的DNA质量均较好。用抽提的DNA为模板优化RAPD条件,得到适合于合浦珠母贝的RAPDPCR反应条件为:20μL反应体系中包括20ngDNA模板,1×PCRBuffer,0.1mmol·L-1dNTPs,2.5mmol·L-1MgCl2,0.2μmol·L-1引物,1UTaqDNA聚合酶。最佳退火温度40℃。PCR产物用非变性PAGE银染和琼脂糖EB染色检测所得到的主要带型相同,但PAGE能检测到更多的多态带。 相似文献
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在优化RAPD检测条件的基础上,从100个随机引物中筛选出60个扩增较好的引物对异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和湘江野鲤相互间扩增DNA片段的异同性进行比较研究。结果显示,60个引物共产生1554条带,单一引物扩增的DNA片段数在6~20条之间,片段大小在200~3500bp之间。遗传相似率分析表明,异源四倍体鲫鲤与其原始母本红鲫的相似率为69.41%,与其原始父本野鲤的相似率为64.47%,说明异源四倍体鲫鲤接受原始母本红鲫的遗传物质要多一些;而红鲫和野鲤之间的相似率为42.18%,说明两者的基因组成有较大的相似性,从分子水平证实了红鲫和野鲤的远缘杂交具有较大的亲和性。在分析中,还发现异源四倍体鲫鲤有4条非亲本带,非亲本带谱率达0.72%,这些非亲本带可以作为异源四倍体鲫鲤特异性的分子标记。 相似文献
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ISSR-PCR技术在对虾中的应用初步研究 总被引:30,自引:1,他引:30
采用ISSR(Inter Simple Sequence Repeats)技术对中国对虾(Penaeus chinensis)进行了PCR扩增。优化了PCR反应体系和反应参数。对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测,从100条ISSR引物中筛选了40条有清晰产物的引物,每条引物检测到的位点数从1到19不等,平均每条引物可检测到位点数为7.7个。实验发现:中国对虾简单重复序列区主要由两碱基循环组成。通过分析ISSR-PCR技术本身的原理,探讨了该技术相对于同工酶检测和RAPD技术在遗传多样性分析中的优势所在,以及该技术用于遗传标识的确认和遗传图谱构建方面的前景。 相似文献
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青岛文昌鱼遗传多样性的RAPD分析 总被引:11,自引:0,他引:11
采用RAPD技术对青岛文昌鱼雌、雄各11条个体共22个样本进行遗传多样性检测。从40个寡聚核苷酸随机引物中筛选出17个扩增重复性好、条带清晰、特异性强的引物,对每个个体基因组DNA进行了扩增。得到RAPD产物的分子量在200~2200bp之间,产物总计127个位点,其中,多态位点60个(占47.24%)。计算个体间遗传相似系数平均为0.8656,个体间遗传距离平均为0.1344。用Shannon多样性指数量化的遗传多态度(Ho),雄性群体(0.1912)高于雌性群体(0.1125),平均遗传多态度(Hpop)为0.1519。文昌鱼遗传多态度所占的比例在群体内为0.2553,而雌、雄群体间为0.7447。在文昌鱼雌、雄个体RAPD产物中,两个电泳图谱上能读出明显的雄性特征带,估计可能与雄性文昌鱼具有异型性染色体有关,这与XY型性别决定机制相吻合。引物OPC12扩增产物250bp为雄性文昌鱼所特有,可能为区别性别的分子标记。用NJ法进行聚类分析,结果表明,22个个体明显按性剐聚成两类,文昌鱼雌、雄个体基因组间的差异较大。 相似文献
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应用RAPD标记对东方鲀属进行种类鉴别及其聚类分析 总被引:7,自引:0,他引:7
利用RAPD技术对红鳍东方鲀、假晴东方鲀、暗纹东方鲀和从日本引进的红鳍东方鲀4个种进行了遗传标记鉴别研究。在事先优化的条件下,20个随机引物共扩增出134条谱带清晰、重复性高的DNA片段,其中多态性片段77条。结果证实每一种均有其特异性扩增图谱,可作为种鉴定的依据;用UPGMA和NJ等方法进行聚类,构建的系统树与借助形态学和生化特征进行的传统分类结果一致。研究表明,RAPD作为一种新的分子标记,在海洋动物遗传鉴定方面具有巨大的潜力。 相似文献
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北方水都开封市在省“旅游立省”等发展战略指导下,开封市计划在“水”字上有大手笔,特邀上海市委组织部组团协助规划。经实地调查研究,并结合上海市的治水经验,提出了20个有关“水环境”、“水文化”、“鱼文化”的项目。 相似文献
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