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相似文献
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1.
鳜鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆↑(*)   总被引:3,自引:0,他引:3  
从感染鳜鱼病毒( Siniperca chuatsi Virus,简称SCV) 的鳜鱼体中分离病毒,提纯核酸作模板。通过RAPD 法,用带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增,获得扩增带谱。从带EcoRⅠ酶切位点的引物扩增产物中,用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为0 .4 和0 .5 Kbp 的片段,经EcoRⅠ酶切处理制备成带粘性末端的片段,分别插入质粒pUC19 的EcoRⅠ位点。EcoRⅠ酶对重组子进行了酶切鉴定,获得2 种带插入SCV 核酸PCR扩增产物的重组子。  相似文献   

2.
镢鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆   总被引:1,自引:0,他引:1  
从感染鳜鱼病毒(Siniperca chuatsi Virus,简称SCV)的鳜鱼体中分离病毒,提纯核作模板。通过RAPD法,和带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增,获得扩增带谱。从带EcoPI酶切位点的引物扩增产物中,用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为0.4和0.5Kbp的片段,经EcoRI酶切处理制备成带粘性未端的片段,分别插入质粒pUC19的EcoPI位点。EcoRI酶对重组子进行了酶切鉴定,  相似文献   

3.
鳜鱼病毒核酸的初步分析   总被引:7,自引:1,他引:6  
李新辉 《水产学报》2000,24(2):171-174
提取鳜鱼病毒核酸,分别用DNase、RNase和绿豆芽核酸酸处理表明,该病毒为双链DNA病毒,用带EcoRⅠ酶切位点的随机引物扩增病毒核酸,获得扩增核酸带谱。经低熔点琼脂糖回收PCR产物,与质粒pUC19连接,获得三个重组子,已经对两个小插入片断进行了序列分析,插入序列分别为369bp和450bp。GenBank检测显示,尚未有类似的序列报导。  相似文献   

4.
对虾病原菌2—5B菌株16SrRNA基因片段的克隆和序列测定   总被引:2,自引:0,他引:2  
用引物PL1-PL2PCR扩增对虾病原菌-坎普氏弧菌2-5B菌株16SrRNA基因-1223bp的片段,采用pUC19质粒构建dT载体法完成该片段的克隆。部分序列测定及分析结果表明,该菌株与GenBank中坎普氏弧菌标准株序列之间同源性为96.94%。  相似文献   

5.
对虾一种杆状病毒多角体蛋白基因的PCR扩增   总被引:6,自引:0,他引:6  
根据已发表的几种杆状病毒的多角体基因的序列比较与分析,设计并合成两对PCR简并引物P—60/P740和P164/P640,从纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒提取DNA并进行PCR扩增,P—60/P740的扩增片段较为复杂,基中1条的长度为800bp的主带与设计的DNA片段长度相近。P164/P640经优化PCR的反应条件后,成功地扩增出与设计相同的约480bpDNA片段。进一步的实验表明,P—60/P740扩增的分子量为800bp的片段可被P164/P640引物对扩增,分子量与预期的相同,初步研究结果显示,P—60/P740可用于杆状病毒多角体蛋白全基因的克隆,P164/P640对于对虾杆状病毒的调查和研究有实际应用价值。  相似文献   

6.
使用采样液SEMP-Tris保存人工感染HHNBV(WSSV的一个分离株)的中国对虾组织,然后分别用酚抽提法、玻璃乳(Glass Milk)回收法、硝酸纤维素膜结合法和煮沸-乙醇沉淀法提取DNA。应用HHNBV引物对提取的DNA进行PCR扩增,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定和检测。通过比较表明,煮沸-乙醇沉淀法是一种最快速、简便的从采样液SEMP-Tris保存的病虾组织中制备PCR模板的方法  相似文献   

7.
中国对虾杆状病毒PCR扩增产物的DNA序列测定及分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒的一对特异引物,对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增,获得了预期的1447bp的扩增产物,将PCR产物用QIAEXII纯化,直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明,中国对虾的杆状病毒的部分DNA序列与台湾WSBV的相关序列的同源性为98.7%,经计算机分析该段基因序列有6个ORF。该PCR引物可以用中国对虾杆状病毒及其中相关病毒的检测与比较研究。  相似文献   

8.
褐藻多糖类化合物对卵磷脂氧化的抑制作用   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
褐藻多糖类化合物在乳化体系中对卵磷脂(PC)氧化具抑制作用,通过测定卵磷脂氢过氧化物(PC-OOH)含量,确定各化合物的抗氧化能力。结果表明:在自由基引发剂(AAPH)作用下,褐藻多糖类化合物(褐藻胶ALG、磺化褐藻胶SALG、甘糖酯PGMS、藻酸双酯钠PSS,50μmol/L)对PC氧化的抑制作用均比VC(60μmol/L)好,但不如VE(30μmol/L)的效果好;抑制顺序是:VE>SALG>PGMS>PSS>ALG>VC。  相似文献   

9.
中华绒螯蟹线粒体DNA 12S rRNA基因片段的序列研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
首次进行了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)线粒体DNA12SrRNA的序列分析。参考果蝇、蚤状序列对中华绒螯蟹线粒体DNA12SrRNA基因片段做了引物设计、PCR扩增及序列测定,结果得到457bp的碱基序列,其A、T、G、C含量分别为159bp(34.79%)、177bp(38.73%)、51bp(11.16%)、70bp(15.32%)、与果蝇、蚤状的相同基因片段的序列含量基  相似文献   

10.
首次进行了中华绒螯蟹( Eriocheir sinensis)线粒体 DNA 12SrRNA的序列分析。参考果蝇、蚤状溞序列对中华绒螯蟹线粒体DNA 12SrRNA基因片段做了引物设计、PCR扩增及序列测定,结果得到 457 bp的碱基序列,其A、T、G、C含量分别为 159bp(34.79%)、177bp(38.73%)、51bp(11.16%)、70bp( 15. 32%),与果蝇、蚤状溞的相同基因片段的序列含量基本相似。  相似文献   

11.
为了研究鳜IRAK4生物学特性及其在抗病毒免疫应答中的作用,根据鳜转录组数据中筛选出的IRAK4 unigene序列设计引物,利用SMART-RACE技术克隆得到CDS全长为1389 bp的c DNA(命名为Sc IRAK),编码462个氨基酸,含有1个N端死亡结构域和1个保守的中央蛋白激酶结构域。采用荧光定量RT-PCR方法分析了Sc IRAK4在健康鳜各组织中的表达差异及病毒感染后在脾脏中的表达变化,结果显示,健康鳜中Sc IRAK4在肝脏中表达量最大,与其他组织差异显著,而在血液、脑和胃中表达量最低;传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)感染鳜后Sc IRAK4的表达量呈现下调趋势,24 h脾脏中的表达量达到最低,为对照组的45%;而鳜弹状病毒(siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)感染鳜后Sc IRAK4的表达量呈现上调趋势,12 h脾脏中Sc IRAK4的表达量达到最高,为对照组的8.17倍,表明Sc IRAK4在抗ISKNV和SCRV的免疫应答中可能发挥不同的作用。本研究为进一步揭示Sc IRAK4的抗病毒免疫反应机制提供了依据。  相似文献   

12.
翘嘴鳜微卫星标记及其与主要经济性状的相关分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用筛选出的7对具有较高多态性的微卫星标记,检测106尾翘嘴鳜Siniperca chuatsi选育个体的基因组DNA,分析这些微卫星标记与翘嘴鳜体长、体质量和体高的相关性。结果获得67个等位基因,各位点的等位基因数为3~19,片段大小在147~530bp之间;期望杂合度0.5092~0.9207,均值为0.7574;各位点的多态信息含量在0.4639~0.9101之间,均值为0.7197,表明所选择的SSR标记识别力较高,适用于翘嘴鳜选育群体遗传分析和标记辅助育种研究。相关性分析结果表明,G4位点中含有的片段为219bp等位基因的基因型(229/219或219/219)个体的体质量、体长和体高的表型效应显著高于其他的基因型,G10位点中246/246基因型的体质量和体高表型效应显著高于其他基因型,可作为未来翘嘴鳜分子标记辅助育种的重要参考位点。  相似文献   

13.
为探明鱼类消化液分泌的相关调控因子,采用RACE技术分别克隆了鳜(Siniperca chuatsi)两种肠道激素——胃泌素(gastrin,GAS)与胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)基因的cDNA序列。鳜GAS基因cDNA全长581 bp,5′非翻译区长100 bp,3′非翻译区长145 bp,开放阅读框长336 bp,编码111个氨基酸;鳜CCK具有2种类型:CCK1与CCK2,CCK1 cDNA全长为843 bp,5′非翻译区长60 bp,3′非翻译区长369 bp,开放阅读框414 bp,编码137个氨基酸;CCK2 cDNA全长846 bp,5′非翻译区长112 bp,3′非翻译区长332 bp,开放阅读框403 bp,编码134个氨基酸。鳜GAS与CCK成熟肽C末端具有相似的八肽结构(DYQGWVDF/DYLGWMDF),仅在C末端第3位和第6位氨基酸发生替换。荧光定量PCR分析表明,鳜GAS mRNA主要表达于肠和幽门垂,CCK1与CCK2 mRNA在脑中表达量最高,在肠和幽门垂也有较高表达,表明GAS与CCK同为消化调控因子,而CCK还是神经分泌因子。鳜GAS与CCK mRNA表达贯穿于整个幼体早期发育阶段(孵化后0~22 d),前期表达水平较高,后期表达水平较低,并趋于平稳,GAS与CCK mRNA发育表达水平变化可能与这一时期消化道生长发育旺盛有关。  相似文献   

14.
Human ribosomal protein (RP) gene sequences with respect to intron/exon structures and corresponding cDNA or genomic data of fish species were obtained from the GenBank database. Based on conserved exon sequences, 128 primer pairs for 41 genes were designed for exon-primed intron-crossing (EPIC) polymerase chain reaction (PCR). In reference to the draft genome sequences of the Pacific bluefin tuna (Thunnus orientalis), 12 primer pairs expected to amplify introns of the bluefin tuna with lengths of 500–1000 bp were selected and applied to six distantly related fish species belonging to the Orders Clupeiformes, Tetraodontiformes, Pleuronectiformes, Perciformes, Scorpaeniformes, and Anguilliformes. PCR amplification was observed for at least four species in each primer pair, and all fragments were larger than those expected for intronless amplification. Single fragment amplification was observed for at least seven primer pairs per species. Fragment sizes of the bluefin tuna for nine primer pairs corresponded to those expected from the genomic data. Thus, our primer pairs are potentially applicable to a wide variety of fish species and serve as an initial step for isolating single-copy nuclear DNA sequences.  相似文献   

15.
鱼类环境DNA研究中通用引物的筛选验证   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了筛选一个通用性和适用性良好的能够运用于环境DNA(eDNA)研究的鱼类引物,从相关文献中选取了鱼类线粒体基因组部分片段的5对引物,分别对线粒体D-loop区、16S rRNA基因、COI基因以及Cytb基因部分片段进行扩增。对千岛湖48种鱼类基因组DNA进行扩增后比较发现,引物16s和COI均可以取得良好的扩增效果,通用性优于其他几对引物。引物16s的扩增产物经凝胶电泳检测均出现明亮的目的条带,引物COI则有3种鱼的条带经凝胶电泳检测亮度较暗。利用上述引物对环境样品eDNA扩增时发现,只有16s和COI的引物具有良好的扩增效果,能够得到明显单一的亮带。对该两种引物的PCR产物克隆后测序比对发现,16s的PCR产物均为千岛湖常见鱼类物种的基因片段,COI的PCR产物则为细菌COI基因的部分片段。综上,我们认为引物16s在通用性和适用性上都更为适合作为鱼类群落结构eDNA研究的通用引物。  相似文献   

16.
曾慷 《水产学报》2001,25(5):464-468
采用MTT颜色反应法研究传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、伴刀豆球蛋白A(concanavallin A,ConA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在离体状态下对健康和ISKNV感染后存活30d或60d的鳜的头肾淋巴细胞转化的影响。结果表明,ConA和LPS能促进健康鳜头肾淋巴细胞的转化,而对感染后存活30d或60d的鳜头肾淋巴细胞没有作用;纯化的ISKNV对健康鳜头肾淋巴细胞没有促进淋巴细胞转化的作用,但对ConA的作用有抑制,对感染后存活的30d或60d的鳜头肾淋巴细胞,纯化的ISKNV有一定的促进转化的作用,感染存活的鳜头肾中有对ISKNV的免疫记忆性T细胞。另外,用建立的ISKNV PCR检测方法对健康和ISKNV感染后存活的鲜组织进行了检测,结果显示,健康鳜为阴性,而ISKNV感染后存活的鱼,头肾、后肾、脾脏和部分鱼的心脏为阳性。ISKNV在鳜体内形成潜伏感染。  相似文献   

17.
鳜鱼病毒传播途径的初步研究   总被引:7,自引:1,他引:6  
吴淑勤 《水产学报》2001,25(5):460-463
采用PCR方法,追踪养殖鳜的亲鱼、子代、饵料鱼及与鳜养殖环境相关的水体生物和非生物因子中鳜鱼病毒的存在状况,并探讨鳜鱼病毒的传播途径。本研究中,鳜鱼塘水体中采集的除鳜以外的其他生物、底泥及水样的核酸抽提样本PCR扩增病毒结果呈阴性;感染病毒的亲鱼,其性腺中可检测出病毒,其子代组织病毒检测亦呈阳性。研究获得病毒可以在鳜体内呈潜伏状态存在和病毒可以垂直传播的一些证据。  相似文献   

18.
鳜免疫球蛋白 D 重链基因的克隆与表达分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
用RACE-PCR和RT-PCR方法获得鳜(Siniperca chuatsi)膜结合型免疫球蛋白D(Membrane-bounded IgD,mIgD)重链基因的全长cDNA序列。鳜mIgD的cDNA全长为3358bp,其5l非编码区包含30bp,3l非编码区包含337bp;开放阅读框包含2991bp,编码996个氨基酸,基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。鱼类IgD恒定区氨基酸序列比对结果显示,鳜mIgD存在半胱氨酸和色氨酸保守位点,与其他鱼类IgD的相似性在37%~72%之间。用邻接法(Neighbor Joining)构建的鱼类免疫球蛋白基因的系统发育树表明,鱼类IgD形成独立的一支,鳜mIgD与牙鲆和庸鲽IgD聚为一支。荧光定量PCR结果显示,鳜mIgD的mRNA主要分布于外周血白细胞、胸腺、头肾、中肾和脾脏中。  相似文献   

19.
鳜鱼生长性状遗传参数的估计   总被引:1,自引:0,他引:1  
为深入了解选育过程中鳜鱼(Siniperca chuatsi)生长性状的遗传变化规律,本研究以来自湖南、江苏、广东的翘嘴鳜为基础群体,构建了21个同胞半同胞家系,利用动物模型对不同家系进行了遗传分析:鳜鱼210日龄体重、体长的遗传力为0.40、0.45,属于高遗传力;体高的遗传力为0.29,属于中遗传力。相关分析表明,鳜鱼体重?体长间的遗传相关为0.96;体长?体高间的遗传相关为0.92,体重?体高间的遗传相关为0.94,因此进一步选育采用个体选育或者个体选育与家系选择法相结合的方法都能获得较好的结果;对某一生长性状进行选育时,其他两个相关性状也会得到间接选育。经过选育鳜鱼F2群体平均体重遗传进展为7.5 g,较第一代增加7.5%,F3群体平均体重的遗传进展为9.75 g,较第二代增加9.0%。F3群体平均体长与F1比较无显著提高。F3群体平均体高的遗传进展为0.22 cm,较第一代增加9.9%。本研究旨在为提高鳜鱼育种效率提供重要参数,加速育种进程。  相似文献   

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