镉胁迫对泥鳅金属硫蛋白基因表达的影响

采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析了不同浓度Cd2+(0、0.25、2.5 mg/L)胁迫24、48、72 h对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)肝脏和鳃中金属硫蛋白(MT)基因相对表达水平的影响。结果表明,泥鳅肝脏和鳃MT基因的表达对外源Cd2+胁迫所表现出的反应存在差异,肝脏比鳃更为敏感;Cd2+浓度越高,胁迫时间越长,则肝脏和鳃中MT基因的相对表达水平越高。在受到Cd2+胁迫时,肝脏和鳃中大量表达MT,可降低Cd2+对机体造成的损伤。泥鳅MT基因可以作为监测水环境中镉污染的生物标志物之一。     

企鹅珍珠贝镉金属硫蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备

镉—金属硫蛋白(Cd-MT)是水生环境中重金属镉污染的重要生物标志物,对该蛋白的研究不仅有利于Cd-MT免疫学检测方法的建立,也为水生环境重金属污染监测技术的开发提供理论依据。采用不同浓度CdCl₂(0～0.8 mg/L)胁迫诱导企鹅珍珠贝合成Cd-MT,通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Sephadex G-50凝胶柱层析等方法从企鹅珍珠贝全脏器中纯化得到Cd-MT。紫外吸收显示,在CdCl₂浓度为0.8 mg/L时,MT粗提液中的Cd-MT特征吸收最大,表明贝体内的Cd-MT含量随着CdCl₂胁迫浓度的增大而增加。SDS-PAGE显示纯化后的Cd-MT及其二聚体分子量约为9 ku和18 ku。采用戊二醛法将获得的Cd-MT与牛血清白蛋白(BSA)偶联后免疫家兔,制备了兔抗企鹅珍珠贝Cd-MT多克隆抗血清。通过间接ELISA法检测其抗血清效价为1∶12 800。经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A50亲和层析纯化得到分子量约为35 ku的高纯度免疫球蛋白G(IgG)。ELISA免疫鉴定显示,该IgG不仅能识别企鹅珍珠贝的Cd-MT,还与马氏珠母贝的Cd-MT有明显的免疫交叉反应。     

中国林蛙蝌蚪饵料研究

本试验对中国林蛙蝌蚪期的3种不同饲料配方进行了试验研究。结果表明,T1组饲料喂养的蝌蚪变态后的幼蛙体重最大、身体最长（分别为0．347g、1．64cm）;T3组饲料所喂养的蝌蚪生长速度快,完成变态的时间最短（34．8d）;T2组饲料喂养的蝌蚪生长最慢,完成变态所需的时间最长（39．2d）,变态后的幼蛙体重最小（0．276g）;各组中蝌蚪的成活率和变态率差异不显著（P〉0．05）。     

中国林蛙蝌蚪对盐度的适应性

在水温16～18℃的野外条件下，采用单因子静态急性毒性实验法，研究中国林蛙蝌蚪对盐度的适应能力。结果表明，在pH为7．3～8．1的池塘水质条件下，盐度对中国林蛙蝌蚪的24、48、72和96h半致死值(LC50)分别为8．09‰、7．32‰、5．37‰和3．349‰；零致死值(LC0)分别为6．22‰、6．13‰、3．09‰和2．17‰；全致死值(LC100)分别为9．72‰、8．49‰、7．82‰和5．37‰；10％致死值(LC10)分别为6．82‰、6．39‰、3．69‰和3．22‰；90％致死值(LC90)分别为9．33‰、8．7l‰、7．37‰和4．72‰；安全值(SC)为1．70‰。建议野外蝌蚪饲养池的水体盐度控制在2．0‰以下。     

中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪对不同渗透压的耐受性

研究了中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪和大蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪对不同渗透压溶液的耐受性和对体液渗透压的调节能力.结果显示,不同的渗透压溶液中两种蝌蚪的存活率都随时间的延长而降低,中国林蛙蝌蚪的存活率显著大于蟾蜍蝌蚪(P<0.001).两种蝌蚪体积随时间的延长而减少,在渗透压为4...     

碱度、pH对中国林蛙蝌蚪成活的影响

在水温16～18℃的野外条件下,采用单因子静态急性毒性实验法,研究水环境中碱度、pH对中国林蛙(Ranachensinensis)蝌蚪的毒性效应。结果表明,在pH为7 0～8 5、盐度为0 18g/L时,碱度对中国林蛙蝌蚪的24,48,72,96h的半致死值(LC50)分别为14 36,11 8,10 35,7 68mmol/L,安全值(SC)为2 41mmol/L。在相同盐度下,碱度为1 41mmol/L时,pH对中国林蛙蝌蚪的24、48、72和96hLC50值分别为10 33(3 92),10 18(4 07),10 08(4 11),10 02(4 16)。蝌蚪长期生长与生存的pH为6 0～9 0,碱度上限为3 0mmol/L。     

碳酸盐碱度和pH对中国林蛙蝌蚪的毒性作用

为了解中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪对水环境中碳酸盐碱度和pH的适应能力，采用单因子静态急性毒性实验法进行研究。结果表明，在pH7．0～8．5、盐度0．18g／L时，碳酸盐碱度对中国林蛙蝌蚪的24h、48h、72h和96hL(‰值分别为14．36、11．83、10．35和7．68mol／L，安全值(SC)为2．41mol／L。在相同盐度下，碳酸盐碱度为1．41mol／L时，中国林蛙蝌蚪的pH为24、48、72和96h LC50值，碱性范围分别为10．33、10．18、10．08和10．02，酸性范围分别为3．92、4．07、4．11和4．16。建议野外蝌蚪养殖水体的pH应控制在6．0～8．0，碳酸盐碱度保持在1．5～3．5mol／L。     

镉诱导鲫肝细胞内Ca2+-ATP酶与金属硫蛋白的表达

研究了镉诱发鲫肝细胞相关的胞内游离钙离子变化,以及Ca²⁺-ATP酶及金属硫蛋白表达量的变化。试验分为对照组、5、10、15、20 μmol/L CdCl₂ 5个组。Ca²⁺用Fura-2/AM方法检测,试验后24 h用荧光倒置显微镜观察细胞内游离钙离子变化;分光光度法检测Ca²⁺-ATP酶;石墨炉—原子分光光度法检测了细胞内镉离子浓度;免疫酶联法(ELISA)检测了金属硫蛋白(MT)含量。结果显示,镉可导致细胞存活率下降,具有一定的毒性。镉离子引起胞内Ca²⁺荧光强度和Ca²⁺-ATP酶活性增加(P＜0.01)。随镉浓度升高,处理组Ca²⁺-ATP酶浓度活性分别是对照组的4.52、6.73、6.68、7.19、6.18倍;暴露24 h后各组细胞内镉离子均有上升,其中5 μmol/L组最高,达(2.045±0.322) μmol/L;各处理组金属硫蛋白(MT)含量增高(P＜0.01),且5 μmol/L低浓度组MT增幅最大,达17.15%。结果提示,镉诱导下细胞内Ca²⁺升高,MT表达量上升,且MT可螯合进入细胞内的镉离子,这种螯合可能是降低镉毒理作用的机制之一。     

印染污水对银鲫卵黄蛋白原和金属硫蛋白水平的影响

分析了不同浓度印染污水对银鲫(Carassius auratus)的生殖相关指标和金属硫蛋白(MT)的影响.设计1个对照组和2个试验组,对照组采用天然的水库水,试验组分别用浓度为0.1％和0.2％的印染污水养殖银鲫,每组3个平行,每个平行随机放入50尾银鲫,试验期为4周.结果表明,养殖4周后,0.1％印染污水组银鲫的肝体指数和血清卵黄蛋白原(VTG)水平显著上升(P＜0.05),0.2％印染污水组银鲫的血清VTG水平显著低于对照组(P＜0.05),印染污水对银鲫性腺指数没有影响.0.1％印染污水组银鲫在第2、3、4周,肝脏MT水平均显著高于对照组(P＜0.05),0.2％印染污水组银鲫肝脏MT水平在第3周时显著升高(P＜0.05),印染污水对银鲫肾脏MT水平没有影响(P＞0.05);表明印染污水能够影响银鲫繁殖功能和组织MT的水平.     

印染污水对银鲫卵黄蛋白原和金属硫蛋白水平的影响

分析了不同浓度印染污水对银鲫（Carassiu sauratus）的生殖相关指标和金属硫蛋白（MT）的影响。设计1个对照组和2个试验组,对照组采用天然的水库水,试验组分别用浓度为0.1%和0.2%的印染污水养殖银鲫,每组3个平行,每个平行随机放入50尾银鲫,试验期为4周。结果表明,养殖4周后,0.1%印染污水组银鲫的肝体指数和血清卵黄蛋白原（VTG）水平显著上升（P〈0.05）,0.2%印染污水组银鲫的血清VTG水平显著低于对照组（P〈0.05）,印染污水对银鲫性腺指数没有影响。0.1%印染污水组银鲫在第2、3、4周,肝脏MT水平均显著高于对照组（P〈0.05）,0.2%印染污水组银鲫肝脏MT水平在第3周时显著升高（P〈0.05）,印染污水对银鲫肾脏MT水平没有影响（P〉0.05）;表明印染污水能够影响银鲫繁殖功能和组织MT的水平。     

中国林蛙的生物学及其养殖潜力

中国林蛙俗称哈什蚂、黄蛤蟆、油蛤蟆、田鸡,是国家二级保护动物,也是一种经济价值极高,享誉国内外,集药用、食补、美容于一体的珍稀两栖类动物。一、中国林蛙的生物学和生态学中国林蛙(RanachensinensisDavid)隶属两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属。1.形态构造中国林蛙成体体长范围为40mm~70mm,平均54mm。头略高,头宽约等于或小于头长;皮肤较平滑,背部及体侧有分散的圆疣或长疣,有时在肩上的疣粒排列呈“八”字形;生活时多数背面浅灰褐色或土黄色,一般在疣上散有深色斑点。雄蛙腹面大多数是乳白色,雌蛙腹面一般为红棕色;雄蛙前臂略粗壮,第一指…     

中国林蛙体重与怀卵量关系的研究

中国林蛙的油重和卵重随体重增加而增加。卵粒数随体重的增加而增加，当体重达到35g左右，即干重为8.32g左右时，卵粒数随体重增加速度加快。当体重在35g左右时，卵均重为1.46mg，达量大值，以后随体重增加有所下降，但是不低于1.40mg。     

鱼类金属硫蛋白基因的表达与调控

金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类能选择性地结合重金属离子的低分子量蛋白质。自Marafante及其同事于1970年证明MT在真骨鱼类中的存在以来,人们就对MT在动物体内和体外的作用和功能进行了广泛的研究。Dunn等(1987)对鱼类MT的研究表明,这类蛋白质长度极为均一,由60~61个氨     

中国林蛙全人工养殖技术及发展对策分析

中国林蛙是一种食药两用的特种经济动物,其全人工养殖技术日趋完善,但仍存在一些严重制约该产业发展的问题。据生产实践对中国林蛙的全人工养殖技术进行了综述,并对其存在问题及发展对策进行了分析。     

褶牡蛎金属硫蛋白基因的克隆及组织表达分析

金属硫蛋白是一类广泛存在于生物体中的低分子质量、富含半胱氨酸、高度诱导性的内源金属结合蛋白。采用RACE技术,首次获得了褶牡蛎金属硫蛋白基因的全长cDNA序列。该序列全长500bp,由长54bp的5′非翻译区,122bp的3′非翻译区和324bp的开放阅读框组成,共编码107个氨基酸。该蛋白序列中半胱氨酸含量丰富(28%),不含芳香族氨基酸,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构,存在软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白特征序列,是金属硫蛋白家族成员。荧光定量PCR法,测定褶牡蛎体内3种组织(内脏团、鳃、外套膜)中金属硫蛋白mRNA组织特异性表达以及重金属(Cd~(2+)、Zn~(2+))慢毒胁迫效应。结果表明,金属硫蛋白mRNA在褶牡蛎内脏团中相对表达量最高;褶牡蛎内脏团金属硫蛋白mRNA表达量与重金属胁迫时间呈现出一定时间效应关系,从胁迫开始至7d表现为正调,而7~10d开始为负调,Cd~(2+)胁迫和Zn~(2+)联合Cd~(2+)胁迫下金属硫蛋白mRNA表达量显著增加,最大表达量为对照组的42.5倍(Cd),Zn~(2+)联合Cd~(2+)胁迫表现为拮抗作用。本试验结果为生产实践上在多种重金属污染下应用金属硫蛋白作为生物标志物监测水域污染状况,保护水生生态环境提供了依据。