杂交鲟中草药免疫增强剂的体外快速筛选

采用杂交鲟的离体外周血和中草药的水提液进行共同孵育的方法,快速筛选杂交鲟中草药免疫增强剂。实验选用质量为365g,体长18cm的杂交鲟鱼1尾,抽取杂交鲟鱼的血样,提取其白细胞,用苦参、茵陈、杜仲、淫羊藿、茯苓、紫草、甘草、生地等八种中草药浓度为0.5g/mL的水提液与杂交鲟的外周血白细胞共同孵育后,分别采用抗超氧阴离子试剂盒、金黄色葡萄球菌法来测定杂交鲟的氧呼吸爆发活性以及中草药对杂交鲟白细胞的吞噬活性(吞噬活性以吞噬百分比(phagocytic percent-age,PP)和吞噬指数(phagocytic index,PI)表示)的影响。结果表明:各处理组外周血白细胞氧呼吸爆发活性均存在显著差异(P0.05),其中苦参、茵陈、杜仲、淫羊藿、茯苓、紫草和甘草组显著高于对照组(P0.05),生地显著低于对照组(P0.05)。苦参、茯苓、生地组外周血白细胞吞噬百分比显著高于对照组(P0.05)。苦参、生地组外周血白细胞吞噬指数显著高于对照组(P0.05),紫草和甘草组外周血白细胞吞噬指数显著低于对照组(P0.05)。结论:结合上述评价指标,苦参、茯苓更加适合作为杂交鲟候选免疫增强剂。     

5味中药醇提物对尼罗罗非鱼白细胞免疫活性的作用

将超微五倍子、白头翁、地榆、柯子、虎杖粉碎后过160目筛,按照料液比1∶10将药粉与60%的乙醇水溶液混合,再用超声波粉碎机超声1 h,用滤纸过滤收集滤液,置于多样品平行蒸发仪中浓缩后制得中药提取物。用吸取0.2 mL抗凝剂的无菌注射器自尼罗罗非鱼尾静脉采血0.5 mL,与L-15细胞培养基按体积比1∶9的比例混合成血浆,与中草药提取液单用、联用共孵育,利用氮蓝四唑还原法和流式细胞仪技术分别测定中草药提取液对尼罗罗非鱼外周血白细胞呼吸爆发活性和白细胞吞噬活性的影响。试验结果显示,五倍子、白头翁、地榆、柯子、虎杖单用均能显著提高白细胞氧呼吸爆发活性,呼吸爆发增加率分别为128.68%、123.96%、28.37%、44.44%和78.93%;试验组白细胞吞噬率分别较对照组增加44.04%、44.66%、95.00%、10.35%和64.93%。在两味中药双联用试验中,对白细胞氧呼吸爆发活性呈协同作用的组合为白头翁+地榆,呼吸爆发联用指数为1.28;对白细胞吞噬活性呈协同作用的组合为白头翁+虎杖、柯子+虎杖、五倍子+虎杖和白头翁+柯子,吞噬联用指数分别为11.45、6.20、3.03和1.06。     

谷氨酰胺对点带石斑鱼免疫细胞免疫力的影响

将从平均体质量400 g的点带石斑鱼中肾分离出的白细胞培养在添加0、0．5、1、2 mmol／L 谷氨酰胺的培养基中2、6、12、24 h后，测定白细胞的吞噬和呼吸爆发活力，结果发现，添加谷氨酰胺后白细胞的吞噬和呼吸爆发活力显著提高，随着培养时间的延长，吞噬和呼吸爆发活力进一步提高，最高值均在培养12 h后的1 mmol／L组。在培养12、24 h后测定了白细胞的增殖能力，发现培养12 h后，添加谷氨酰胺的各组增殖效果明显优于未添加谷氨酰胺组（对照组）（ P＜0．05），但添加谷氨酰胺的各组之间差异不显著（P＞0．05），最高值在1 mmol／L组；培养48 h后，除2 mmol／L组外，其他处理组的增殖效果均下降。白细胞对迟钝爱德华氏菌杀菌率变化趋势与吞噬活力相符，1、2 mmol／L 组杀菌率显著高于对照组（P＜0．05），而0．5 mmol／L组与对照组之间差异不显著（P＞0．05）。试验结果表明，谷氨酰胺是石斑鱼有效的免疫增强剂，在培养基中添加1 mmol／L 谷氨酰胺培养12 h效果最佳。     

枸杞多糖对黄颡鱼免疫细胞活性的影响

选取540尾黄颡鱼,连续投喂含不同水平枸杞多糖的配合饲料(300、600、900、1200、1500 mg/kg饲料)8周.采用Percoll密度梯度离心等技术,对黄颡鱼头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,使用NBT还原法、Griesse试剂显色法和MTT法测定头肾巨噬细胞的呼吸爆发活性和外周血白细胞的增殖能力,以探讨枸杞多糖对黄颡鱼免疫细胞活性的影响.试验结果表明:枸杞多糖各水平组均能显著地提高黄颡鱼头肾巨噬细胞的氧呼吸爆发活性(P＜0.05),且900～1200 mg/kg水平组的提高作用极显著(P＜0.01);虽然各水平组均能提高黄颡鱼头肾巨噬细胞的氮呼吸爆发活性,但只有1200～1500 mg/kg的水平组能极显著提高该活性(P＜0.01);枸杞多糖还能明显提高黄颡鱼外周血白细胞的增殖能力(P＜0.01).可见,枸杞多糖可以有效地提高黄颡鱼免疫细胞的活性.     

香菇多糖和黄芪多糖对鲤免疫细胞的活性和IL-1β体外诱生表达的影响

为了探讨香菇和黄芪多糖对鲤免疫细胞的免疫活性作用,采用Percoll密度离心等技术,对鲤的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养,从细胞和分子水平上研究了香菇和黄芪多糖的免疫调节作用.巨噬细胞和外周血白细胞分别体外暴露不同浓度的黄芪多糖和香菇多糖后,采用MTT法测定它们对鲤外周血白细胞增殖的影响;NBT还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响;实时定量PCR法测定头肾巨噬细胞细胞因子IL-1β诱导表达的影响.结果显示,黄芪和香菇多糖作用头肾巨噬细胞24 h后,香菇多糖浓度为1,10,100μg·mL-1时能显著诱导巨噬细胞的氧爆发活性,黄芪多糖则没有显著的诱导作用;黄芪和香菇多糖作用头肾巨噬细胞96 h后,香菇多糖低浓度时对细胞的氮呼吸爆发活性无显著影响,黄芪多糖浓度10μg·mL-1能显著诱导氮呼吸爆发活性,而在浓度为1000μg·mL-1两者均表现为高浓度抑制作用;两者作用外周血白细胞24 h后,香菇多糖浓度为100,1000 μg·mL-1和黄芪多糖浓度为10,100μg·mL-1时都能显著促进鲤外周血淋巴细胞的增殖;两种多糖作用头肾巨噬细胞24 h后能显著增强IL-1β的体外诱导表达.结果表明黄芪多糖和香菇多糖对离体培养鲤免疫细胞有明显活性作用,对鲤非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用.     

灰树花多糖对鲫鱼免疫功能的影响

以灰树花多糖（Polysaccharide of Grifola frondosa，PGF）药饵连续投喂鲫鱼35d，通过测定血清凝集抗体效价、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性、离体白细胞吞噬活性（phagocytic activity）、吞噬细胞杀菌活性（bactericidal activity），研究灰树花多糖对水产动物特别是鲫鱼免疫功能的影响。试验设计以不同剂量（分别为250mg／kg鱼体重、400mg／kg鱼体重、500mg／kg鱼体重、600mg／kg鱼体重、1000mg／kg鱼体重）的灰树花多糖药饵饲喂试验鲫鱼，分别于第0、7、14、2l、28、35d用血凝板法、MTT染色法进行免疫学指标测定。结果表明，各添加水平均可增强鲫鱼的免疫功能，其中剂量为400mg／kg、500mg／kg和600mg／kg的吞噬活性及杀菌活性与对照组相比存在极显著性差异（P〈0．01），而剂量为250mg／kg、1000mg／kg时，杀菌活性均与对照组相比存在显著性差异（P〈0．05）；400mg／kg组、500mg／kg和600mg／kg组的SOD活性与对照组相比存在极显著性差异（P〈0．01）；400mg／kg组、500mg／kg和600mg／kg组的血清凝集抗体效价最高为1：256，250mg／kg和1000mg／kg组的血清凝集抗体效价最高为1：32。各项指标的峰值出现在第2～3周。     

The use of immunostimulating herbs in fish. An overview of research

The use of immunostimulants as an alternative to the drugs, chemicals and antibiotics currently being used to control fish diseases in fish culture is attracting the attention of many researchers. In this context, many have focused on the use of medicinal plant products as potential therapeutic measures for modulating the immune response and, specifically, on the use of herbs to prevent and control fish diseases. Medicinal plants (plant remedies) are a deeply rooted component of the cultural heritage of many people from diverse cultures and countries and are, as such, closely linked to the maintenance of good health. The aim of this paper is to review research currently being carried out on the herbs and herbal extracts that have been shown to modulate the immune system of fish. Special attention is given to the use of Chinese and Indian herbs.     

中草药与复方对鲁氏耶尔森菌的体外抑菌作用

采用试管二倍稀释法测定了16种中草药单方及5种复方制剂对鲁氏耶尔森菌（Yersinia ruckeri）的最小抑菌浓度（MIC）。结果表明，黄芩（Radix Scutellariae）和诃子（Fructus Chebulae）对鲁氏耶尔森菌的抑菌作用最强，MIC均为0.028g·mL^-1，可作为防治水产养殖动物耶尔森菌病害的主要备选中草药；大黄（Radix et Rhizoma Rhei）的抑菌作用较强，其MIC值为0.227g·mL^-1，也可作为候选药物；青蒿（Herba Artemisiae）、金樱子（Fructus Rosae Laevigatae）、连翘（Fructus Forsythiae）、茵陈（Herba Artemisiae Scopariae）、五倍子（Galla Chinensis）及金银花（Flos Lonicerae）的抑菌作用较弱，其MIC值均为0.455g·mL^-1。5种复方制剂中，大黄、黄柏（Cortex Phel-lodendri）和黄芩3种中草药以5：3：2的比例配伍对鲁氏耶尔森菌具有最佳抑菌作用，其MIC值为0.057g·mL^-1，抑菌效果弱于黄芩，但远强于大黄单独使用，可为该细菌性疾病的防治提供复方配伍参考。     

复方中草药对青虾免疫功能的影响

将大黄、黄芩、党参、板蓝根等十余味中草药粉碎过筛后制成复方添加剂按1%、2%、3%的比例添加于基础饲料中制成颗粒药饵投喂青虾,测定青虾相关免疫指标的变化。结果表明,青虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清溶菌酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌攻毒后,各试验组的免疫保护率也明显提高。在各试验组中以2%的添加量的效果最好。试验证明,该添加剂可显著地提高青虾的免疫功能,能有效地预防嗜水气单胞菌的感染。     

47种中草药体外抑杀嗜水气单胞菌的药效研究

用琼脂扩散法(打孔法)测定了石榴皮等47种中草药对嗜水气单胞菌的抑制作用,并用二倍稀释法测定28种有抑菌作用的中草药对嗜水气单胞菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度。结果显示石榴皮的抑菌和杀菌效果最好,其抑菌圈直径超过20mm,最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度均为7.81mg/mL;赤芍次之。虎杖等26种中草药有一定的抑菌和杀菌效果;陈皮等19种中草药无抑菌作用。石榴皮对嗜水气单胞菌的体外抑制效果最好。     

复方中草药制剂对黄颡鱼长和非特异性免疫功能的影响

在基础饲料中添加0.5%、1.0%、2.0%的复方中草药制剂,连续投喂60d后,通过测定供试黄颡鱼的生长性能、血细胞的吞噬活性、血清溶菌酶活性,比较了复合中草药制剂对黄颡鱼促生长及非特异性免疫功能的影响。结果显示:饲料中添加0.5%的复方中草药制剂对黄颡鱼的生长影响显著(P0.05),添加1.0%和2.0%的中草药制剂对黄颡鱼的血细胞的吞噬活性、溶菌酶活力影响极显著(P0.01)。试验组可显著提高黄颡鱼生长、血细胞的吞噬活性、溶菌酶活力。     

皱纹盘鲍血细胞活性氧产生的研究↑（*）

在体外条件下用不同刺激物(海洋酵母细胞和酵母聚糖)对皱纹盘鲍血细胞进行刺激,测定血细胞吞噬活动中经历呼吸爆发产生活性氧的化学发光反应。结果表明,皱纹盘鲍血细胞经刺激诱导吞噬活动中有明显的呼吸爆发现象和很强的活性氧产生。不同的刺激物产生的化学发光强度不同;同一种刺激物的不同处理和不同浓度对血细胞产生活性氧的化学发完强度的影响不同。刺激物经皱纹盘鲍自体血清调理和未经调理对血细胞刺激所产生的化学发光强度不同。SOD和NaN3对血细胞吞噬过程中活性氧产生的化学发光有抑制作用。皱纹盘鲍血细胞在吞噬防御反应中能够通过产生活性氧对外源病原进行杀灭。     

左旋咪唑对中华绒螯蟹非特异性免疫功能及抗病力的影响

为测定在饲料中添加左旋咪唑(LMS)对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫调节作用,以0(对照)、100、200和300 mg·kg~(-1)干饲料的剂量将LMS添加于基础饲料中制成颗粒饲料,投喂中华绒螯蟹7 d,然后投喂不含LMS的对照组饲料。在投喂含LMS的饲料之前(0周)和投喂后2、4、6、8周,采样测定中华绒螯蟹的血细胞总量(THC)、不同血细胞数量(DHC)、吞噬活性、呼吸爆发(超氧阴离子的释放)、酚氧化酶(PO)活性和溶菌酶(LSZ)活性;并在投喂含LMS的饲料后的第4周,按1.2×10~7cfu·kg~(-1)体重的剂量,体腔注射接种中华绒螯蟹致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hyrophila)CL99920菌株,记录接种10d后中华绒螯蟹的累积死亡率。结果显示,各LMS处理组的血细胞总量(THC)、透明细胞(HC)数量、吞噬百分率、呼吸爆发、PO活性和LSZ活性均显著地高于对照组(P<0.05);颗粒细胞(GC)数量、血细胞吞噬指数与对照组无显著差异(P>0.05);LMS处理组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。研究表明,饲喂适量的LMS可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力;在本试验条件下,200 mg·kg~(-1)干饲料的剂量为最适添加剂量。     

五种中药提取物对拟穴青蟹肝微粒体CYP1A的抑制作用

利用肝微粒体体外孵育体系,通过酶促反应动力学研究黄芩、柴胡、连翘、吴茱萸和野菊花5种中药提取物对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肝微粒体CYPIA的抑制作用.方法:5种中草药提取物分别与拟穴青蟹肝微粒体共同孵育,荧光分光光度法测定探针药物7-乙氧基异吩唑酮代谢产物试卤灵的生成量,来反映中药提取物对CY...     

Immunopotentiating Effect of Small Peptides on Primary Culture Coelomocytes of Sea Cucumber,Apostichopus japonicus

The in vitro effect of small peptides on the nonspecific immune response of sea cucumber, Apostichopus japonicus, coelomocytes was studied. Coelomocytes were cultured in L‐15 medium containing different concentrations of small peptide (0, 5, 25, and 100 µg/mL). Coelomocytes were incubated with the above immunostimulant for 1, 3, 6, 12, and 24 h. Coelomocytes incubated in the medium without immunostimulants were taken as controls at each incubation time. After exposure to small peptides, the coelomocytes were sampled and immune parameters namely, phagocytosis activity, respiratory burst activity, as well as activities of acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP), and superoxide dismutase (SOD) were determined. All immune parameters were significantly (P < 0.05) enhanced by small peptides. Both phagocytic capacity and respiratory burst activity were up to maximum values at 6 h, and these values were 1.6 and 1.1 times as high as the control group, respectively. Among the humoral responses, the activities of ACP, AKP, and SOD were also up to maximum values at 6 h. The values were 1.4, 1.3, and 1.4 times as high as the control group, respectively. These results suggest that small peptides can enhance the nonspecific immune response of sea cucumber in vitro.