中华绒螯蟹促雄腺的结构与功能

应用组织切片、组织化学、电镜及体外培养技术研究了中华绒螯蟹促雄腺的结构与功能。结果表明，中华绒螯蟹促雄腺１对，呈不规则索状，位于近阴茎基部射精管的表面，由许多实心腺泡组成；腺体结构与个体精巢发育周期密切相关，可明显划分为增殖期，合成和分泌期３个发育时期；腺细胞以全浆方式分泌激素，茚三酮－Ｓｃｈｉｆｆ反应、磷钼酸法反应呈阳性，推断分泌激素中主要含蛋白质和脂类２种化学成分；体外共培养实验证明，促雄腺具     

四指马鲅精巢发育及精子发生的组织学和超微结构

为了解四指马鲅（）精巢的组织结构和精巢发育及精子发生的组织学和超微结构变化，运用组织切片HE染色和透射电镜技术对养殖四指马鲅的精巢发育过程进行观察。结果显示，四指马鲅精巢位于腹腔背侧，紧贴中肾和鳔的腹面，为一对延长的扁平带状器官，呈灰白色，两条精巢于后端融合，呈“Y”字形，组织学上属典型小叶型精巢；根据精巢发育及精子发生的组织学特点可将其分为6个时期：3月龄精巢发育至第I期（精原细胞增殖期），4月龄发育至第II期（精母细胞增长期），5~7月龄发育至第III期（精母细胞成熟期），7~9月龄发育至第IV期（精子开始出现期），最早在10月龄发育至第V期（精子完全成熟期）达到初次性成熟；参与生殖排精后的精巢为第VI期（精子退化吸收期）；精子发生过程经历初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子6个时相，其细胞及细胞核直径逐级减小，核质比发生规律性变化；电镜下显示精子发生过程中，细胞核内染色体逐渐浓缩，电子密度增加，线粒体数量减少，体积增大，內嵴结构逐渐丰富；精子由头部、中部和尾部组成，鞭毛轴丝为典型“9+2”结构。本研究阐述了四指马鲅雄鱼精巢的组织结构及初次性成熟精巢发育及精子发生过程的组织学和超微结构变化，丰富了四指马鲅的繁殖生物学内容，为掌握四指马鲅的繁殖规律和提高人工繁育技术提供理论参考。     

早熟和正常中华绒螯蟹精子形态、顶体酶活力和抗氧化能力的比较研究

Eriocheir sinensis）进行了比较，结果表明，早熟雄性蟹生精小管的细胞构成明显不同。早熟雄性蟹精巢生精小管主要管型为精母细胞型，而正常雄蟹管型以精原细胞加精母细胞型为主；早熟雄蟹性腺发育速度明显快于正常雄蟹；正常雄蟹的生精小管和精荚横截面积分别为（0     

[05]早熟和正常中华绒螯蟹精子形态、顶体酶活力和抗氧化能力的比较研究

与正常雄性中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)进行了比较,结果表明,早熟雄性蟹生精小管的细胞构成明显不同.早熟雄性蟹精巢生精小管主要管型为精母细胞型,而正常雄蟹管型以精原细胞加精母细胞型为主;早熟雄蟹性腺发育速度明显快于正常雄蟹;正常雄蟹的牛精小管和精荚横截面积分别为(0.041±0.007)mm2和(0.080±0.010)mm2,而早熟雄蟹则分别下降为(0.026±0.005)mm2和(0.044±0.005)mm2,两组间存在极显著差异(P<0.01);其次,早熟雄蟹与正常雄蟹各期精细胞大小差异较大,表现为正常蟹精原细胞、精母细胞和精子均大于早熟蟹;早熟蟹的精子成活率仅为(73.6±3.5)%,而正常蟹则为(84.7±2.1)%;两组蟹精子顶体酶活力差异显著(P<0.05),早熟蟹精于顶体酶活力仅为(62.8±5.50)μIU/106,约是正常蟹的70%,正常蟹高达(79.6±9.80)μIU/106;早熟蟹精巢内超氧化物歧化酶、总抗氧化能力数值均显著低于正常蟹(P<0.05),而两组蟹精巢内丙二醛(MDA)含量无显著差异(P>0.05).虽然早熟蟹性腺发育速度快于正常蟹,但其各期精子形态、精子密度与成活率、顶体酶活力和抗氧化能力等指标均远不及正常蟹.     

青虾幼虾发育时期性腺发育组织学研究

采用组织切片及类固醇激素含量测定等方法,研究青虾Macrobrachium nipponense幼虾发育第1~31d的精巢、卵巢及促雄腺发育的起始时间、发育过程及成熟时间。结果表明:青虾幼虾发育到第10d(PL10)时促雄腺呈索状结构开始发育,随后经历增殖期(PL10)、合成期(PL13)和分泌期(PL19)3个发育阶段发育成熟,形成完整的促雄腺。青虾精巢和卵巢均在幼虾发育第13d(PL13)开始发育,精巢形成不规则排列的精原细胞,而卵巢生殖上皮开始分化为椭圆或多边形的卵原细胞。精巢经精原细胞期(PL13)、精母细胞期(PL16)、精细胞期(PL19)和精子期(PL22)4个发育阶段成熟,此时成熟的精巢生精小管内充满成熟的精子。卵巢经卵原细胞期(PL13)、初级卵母细胞期(PL16)、次级卵母细胞期(PL16)和卵子期(PL19)4个时期发育成熟,此时卵巢充满成熟卵子。从PL1到PL22,睾酮分泌量逐渐增加,维持在稳定水平至PL25后逐渐下降;从PL1到PL19,17β-雌二醇的分泌量逐渐增加,维持在稳定水平至PL25后逐渐下降。本研究显示:促雄腺与精巢发育过程均持续10d,但促雄腺早于精巢3d开始发育和成熟,这可为性别和生殖相关基因的筛选及性别调控机制的研究提供参考。     

注射中华绒螯蟹及锯缘青蟹促雄性腺提取物对中华绒螯蟹雌蟹雄性化的影响

该论文首次报道了经由促雄性腺提取物的注射而在蟹类中引起的性逆转现象。此前关于蟹类促雄性腺活性研究的报道极少，而且蟹类的雄性化均是由促雄性腺的移植所产生。本实验中将锯缘青蟹和中华绒螯蟹的促雄性腺提取物分别注射到刚刚完成性别分化的中华绒螯蟹雌性幼蟹体内，此时幼蟹处于4至5期，壳宽为5～8 mm。注射之后，幼蟹经过大约1～2次蜕皮，此时在注射锯缘青蟹以及中华绒螯蟹的促雄性腺提取物的两组实验幼蟹中均能观察到雄性化现象，而注射生理盐水的对照组实验幼蟹中未能观察到相同现象。由此本实验可以证明促雄性腺确实是蟹类的一种雄性激素，注射促雄性腺提取物能引起雌性幼蟹发生性逆转；同时根据锯缘青蟹和中华绒螯蟹的促雄性腺提取物均能引起中华绒螯蟹雌性幼蟹发生性逆转的现象推测，锯缘青蟹和中华绒螯蟹两种间可能存在促雄性腺的交叉活性；不仅如此，性逆转还能在极低的注射剂量下获得，相当于中华绒螯蟹0.14促雄性腺当量和锯缘青蟹0.06促雄性腺当量。     

单环刺螠精巢年周期发育及精子发生

采用组织学方法观察了单环刺螠(Urechis unicinctus)精巢的形态结构及其年周期发育,并利用超微技术观察了精子的发生过程。结果表明,单环刺螠的精巢呈条带状,位于虫体尾部,两端通过肌束分别与呼吸肠管壁外侧和体壁内侧相连。精巢由生精细胞团与结缔组织组成,结缔组织位于精巢中央,精原细胞团分布于结缔组织外周,精母细胞团散布于结缔组织内,各级精母细胞脱离精巢落入体腔液中,历经精母细胞、精细胞,最后形成精子脱离细胞团进入肾管。根据精巢的组织学特征,将单环刺螠的精巢年周期发育划分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个时期。光镜和电镜下观察了精巢和体腔液中精子发生各时期的结构变化,包括细胞核形态的变化、顶体发生以及尾部的形成。本研究揭示了单环刺螠的精巢发育特点、精子发生历经的场所和分化特征。     

锯缘青蟹促雄腺发育的组织学研究

采用组织切片技术，以OlympusBH-2型显微镜对锯缘青蟹(Scylla serrata)促雄腺的发育进行观察。结果显示，促雄腺附着于射精管近末端，发育过程可分为4期：Ⅰ期促雄腺短小，腺细胞数量少；Ⅱ期促雄腺呈明显的索状；Ⅲ期促雄腺体积达到最大，一些部位膨大增生；Ⅳ期促雄腺不再生长，腺体急剧退化。腺细胞具有2种类型：A型细胞，核圆、异染色质少、胞质染色浅；B型细胞，核扁平、异染色质多，细胞染色深、界限不清晰，有时细胞质消失。促雄腺发育过程中，A、B型细胞数量、比例发生变化。B型细胞为A型细胞完成分泌后的存在形式，B型细胞比例反映了促雄腺分泌活动的状况。锯缘青蟹促雄腺发育和精巢成熟具有一定的相关性。     

外源性促性腺激素诱导日本鳗鲡精子发生和成熟的作用机制

用兔抗血清对抗促黄体素生成素受体（LHR）或称绒毛膜促性腺激素受体（CGR）和雄激素受体（AR）进行LHR和AR免疫组织化学定位,以揭示外源性促性腺激素（鲤脑垂体激素和hCG）诱发日本鳗鲡精子发生及其内分泌机制。结果表明，经过注射激素处理后的实验组与注射前的对照组相比较，其精巢发育和精子发生出现十分显著的变化。组织学切片观察显示,激素处理前鳗鲡精巢处于精原细胞增殖期，而两种激素混合注射后第10天，实验组可见精小叶中精原细胞的有丝分裂和初级与次级精母细胞的数量显著的增加。注射后第35天，靠近生殖上皮除有少量精原细胞外，精小叶中有大量初级精母细胞和次级精母细胞和少数精子细胞以及管腔中存在少量精子。在注射后第83天，日本鳗鲡完成了精子发生和精巢发育成熟以及释精。免疫组织化学染色结果进一步揭示，激素处理前，LH受体免疫活性分布在生殖上皮，显示强的免疫阳性反应；激素处理后，LH受体定位在Sertoli细胞和间质细胞以及精原细胞和初级与次级精母细胞的胞膜上，均显示强的免疫阳性反应。激素处理前，雄激素受体定位在生殖上皮和早期生精细胞的胞膜上；激素处理后，AR则定位在这些生精细胞的核或胞质，而精子细胞和精子显示免疫阴性反应。这些结果首次证明了这两种激素诱导鳗鲡精子发生和成熟的作用机制是通过LH受体和雄激素受体的介导。     

日本沼虾促雄腺的研究

初步研究了日本沼虾促雄腺的位置、形态、组织结构、变化过程以及其分泌激素的化学性质。结果表明，日本沼虾具有促雄腺1对，位于输精管末端至端壶腹的表面，呈短索状贴于其上，长约2mm，由许多实心腺泡和血窦组成。腺体结构与个体精巢发育周期密切相关，可分为增殖期、合成期和分泌期3个阶段。组织化学研究表明，促雄腺分泌的激素中含有蛋白质，而不含多糖类物质。     

三疣梭子蟹促雄腺显微和亚显微结构的研究

采用解剖镜观察及组织切片和电镜技术,研究了三疣梭子蟹促雄腺的位置、形态、显微及亚显微结构。结果发现,三疣梭子蟹促雄腺1对,附着在左右射精管的表面,呈不规则索状。随着个体繁殖周期的变化,促雄腺结构各异,可划分为增殖期、合成期和分泌期3个发育时期。腺体进行全浆分泌,有A、B2种细胞类型,A型细胞具常染色质,粗面内质网和线粒体丰富,B型细胞具异染色质,细胞核固缩。处于增殖期的促雄腺量少,体积小,细胞界限清晰;合成期促雄腺体积大,呈索状,内质网和线粒体发达,A型细胞居多;分泌期分为分泌前期和分泌后期,分泌前期促雄腺体积较大,以B型细胞居多,分泌后期促雄腺体积小,部分有脱落现象,细胞器解体,细胞内存在大量空泡,有的细胞已经解体。     

锯缘青蟹促雄腺和胸腹神经团的直接联系

采用组织学、扫描电镜方法对锯缘青蟹(Scylla serrata)促雄腺和胸腹神经团之间的关系进行观察。结果表明，射精管末端存在促雄腺，促雄腺和胸神经团来源的支配第五步足(即游泳足)的神经紧密相连。该神经在游泳足基部的肌肉内部紧贴射精管并行，其分支支配着射精管周围肌肉，可能也是控制精荚排放的神经。本研究可为促雄腺对性别控制的机制及蟹类精荚电促排的深入研究提供理论依据。     

二倍体和三倍体皱纹盘鲍精子发生过程的超微结构

比较了二倍体和三倍体皱纹盘鲍精子发生过程中细胞和细胞器的超微结构变化。结果表明，二倍体皱纹盘鲍的精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子5个阶段。其形态结构发生了一系列变化，主要包括：核染色质浓缩、线粒体的发达与融合、顶体形成和胞质的减少。三倍体皱纹盘鲍各种生精细胞的直径和核径均大于二倍体，精原细胞结构与二倍体相似；初级、次级精母细胞的胞质中，除溶酶体外，线粒体、内质网等细胞器少于二倍体，线粒体大小与二倍体没有差别，但形态不典型，层状嵴不发达；三倍体皱纹盘鲍的精子发生停滞在精子细胞阶段，表现出各种畸形状态，很多趋于解体，没有发现成熟精子。     

Food-deprivation-induced suppression of pituitary–testicular-axis in the tilapia Oreochromis mossambicus

In the present study, the tilapia Oreochromis mossambicus were exposed to food deprivation for a period of 6 or 12 days and changes in the luteinizing hormone (LH) immunoreactivity in the proximal pars distalis (PPD) of the pituitary gland and the testicular activity were examined. Intensely immunoreactive LH content was noticed in the PPD of the pituitary gland in the initial controls, controls on days 6 and 12, and fasting fish on day 6, whereas the LH immunoreactivity was moderate or weak in fasting fish on day 12. In addition, although the mean gonadosomatic and hepatosomatic indices among different experimental groups did not show any statistically significant difference, the mean numbers of spermatogonia, spermatocytes, and spermatids were significantly lower in food-deprived fish on days 6 or 12 compared to those of controls. The inhibition of the spermatogenesis was accompanied by the presence of abundant spermatozoa in the lumen of seminiferous tubules of the testis in food-deprived fish, whereas the occurrence of spermatozoa was relatively infrequent in initial controls and controls. Furthermore, refeeding to food-deprived fish on day 6 onwards resulted in occurrence of few intensely stained LH secreting cells and significantly higher numbers of spermatocytes and spermatids concomitant with sparse spermatozoa in majority of tubules compared to those of food-deprived fish. These results suggest that prolonged exposure to food-deprivation causes suppression of the LH secretory activity in the pituitary gland and disruption in the spermatogenesis in O. mossambicus.

     

Possible application of mibolerone for induced sex inversion of grouper Epinephelus coioides

SUMMARY: Thirty immature juvenile grouper Epinephelus coioides (19–168 g bodyweight, BW) were randomly stocked in four units 6 t tanks to determine if mibolerone can be used to induce sex inversion in groupers. After acclimatization and weaning to artificial feed, the feed given daily (4% BW/day) was supplemented with 0, 50, 100, and 200 μg mibolerone/kg feed for about 18 weeks. Thereafter, the hormone treatment was withdrawn and the experiment was terminated at Week 24. Ten fish were killed for gonad histology at stocking to serve as an initial control while about three to five fish were killed every 8 weeks. In general, ovaries of initial controls showed the presence of moderate stromal cells and gonia and few primary oocytes. At Weeks 8 and 16, ovaries of the control fish (0 μg/kg) were similar to that of the initial control except that primary oocytes increased at Week 24. Gonads of fish fed diets containing 100 and 200 μg/kg had none to moderate spermatocytes and few spermatids at Week 8 and 16, although spermatozoa were not observed, indicating that the fish were undergoing spermatogenesis. Spermatogenesis at 50 μg/kg was not as advanced since only few spermatocytes occurred at Weeks 8 followed by moderate gonia and no spermatocytes and spermatids at Week 16. However, the presence of few primary oocytes was observed when mibolerone was withdrawn suggesting that sex-inversed fish reverted back to a female condition. These results show that sex inversion in juvenile grouper can be induced by oral administration of mibolerone and may have possible application on mature females to produce functional males.     

芳香化酶抑制剂对暗纹东方鲀CYP19A、DMRT1基因表达及性腺分化的影响

采用组织学和分子生物学方法,研究了投喂芳香化酶抑制剂来曲唑(LE)后暗纹东方鲀(Takifugu obscures)初孵仔鱼CYP19A、DMRT1基因表达以及性腺的组织学变化,以期进一步了解P450芳香化酶(P450arom)在鱼类早期性别分化过程中的作用。RT-PCR结果显示,对照组样品CYP19A和DMRT1表达显示性二态,雌性表达CYP19A基因,雄性表达DMRT1基因。LE处理组在性别分化期间,雄性样品单一表达DMRT1,雌性样品则同时表达CYP19A和DMRT1。qRT-PCR结果显示:LE处理组雌性仔鱼CYP19A基因表达被显著抑;虽然在仔鱼出膜后22d(dph)的表达水平高于9 dph,但仅为同日对照组的2.11%。LE处理组雌性样品22 dph时DMRT1基因表达量上调,至150 dph时达对照组雄性水平。55 dph的性腺组织学结果表明,LE处理可导致暗纹东方鲀稚鱼原始卵巢退化,并向功能性精巢发育。150 dph的LE处理组性腺均为精巢,并与对照组精巢发育同步。结论认为,暗纹东方鲀性腺分化期间P450arom是卵巢形成和维持发育所必须的,抑制P450arom活性可导致雌性暗纹东方鲀发生雄性化逆转。     

芳香化酶抑制剂对暗纹东方鲀CYP19A、DMRT1基因表达及性腺分化的影响

摘要: 采用组织学和分子生物学方法, 研究了投喂芳香化酶抑制剂来曲唑(LE)后暗纹东方鲀(Takifugu obscures)初孵仔鱼CYP19A、DMRT1基因表达以及性腺的组织学变化, 以期进一步了解P450芳香化酶(P450arom)在鱼类早期性别分化过程中的作用。RT-PCR结果显示, 对照组样品CYP19A和DMRT1表达显示性二态, 雌性表达CYP19A基因, 雄性表达DMRT1基因。LE处理组在性别分化期间, 雄性样品单一表达DMRT1, 雌性样品则同时表达CYP19A和DMRT1。qRT-PCR结果显示: LE处理组雌性仔鱼CYP19A基因表达被显著抑; 虽然在仔鱼出膜后22 d(dph)的表达水平高于9 dph, 但仅为同日对照组的2.11%。LE处理组雌性样品22 dph时DMRT1基因表达量上调, 至150 dph时达对照组雄性水平。55 dph的性腺组织学结果表明, LE处理可导致暗纹东方鲀稚鱼原始卵巢退化, 并向功能性精巢发育。150 dph的LE处理组性腺均为精巢, 并与对照组精巢发育同步。结论认为, 暗纹东方鲀性腺分化期间P450arom是卵巢形成和维持发育所必须的, 抑制P450arom活性可导致雌性暗纹东方鲀发生雄性化逆转。