pH和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响及抗菌活性检测

为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽,实验采用不同pH值(离子交换流动相pH3.0、4.0、5.0；反相液相层析流动相pH 2.0、4.5、7.0)缓冲液,不同色谱柱(离子交换和凝胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱)联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比较,并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点.结果显示:pH 4.0缓冲液为最佳离子交换流动相,蛋白提取率为16.43％,得到2个洗脱峰；反相液相层析3种pH缓冲液分离效果均不理想,凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果,洗脱峰数量较多,峰形单一且尖锐狭窄,基线平而低.琼脂板扩散法检测抗菌活性操作简单,实验结果直观,但所需蛋白量较多,可用于蛋白粗提物抗菌活性的检测；微孔液体培养法检测抗菌活性灵敏,所需蛋白较少,可用于后期色谱分离纯化蛋白抗菌活性的检测.     

星斑川鲽免疫相关组织抗菌活性的研究

鱼类黏液中含有许多非特异性抗菌活性成分,在自然条件下可抵抗微量病原菌的侵害,是鱼类先天性免疫系统的重要组成部分。本研究对新兴养殖鱼类星斑川鲽免疫相关组织脾脏、肾脏、后肠及皮肤黏液中抗菌物质的抗菌活性进行了研究。结果表明,星斑川鲽各免疫相关组织的提取物具有抗鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和爱德华氏菌的活性。各组织的抗菌物质对温度不敏感,分别在37、50、70和95℃不同温度中处理10 min,95℃处理的样品抗菌活性显著下降,而其他温度处理后抗菌活性则变化不明显。体表黏液抗菌物质的抗菌活性在酸性条件下强于碱性条件。溶菌酶与黏液及各组织的抗菌物质作用后,其抗菌活性略有下降,胰蛋白酶和蛋白酶K处理后则没有明显的变化,并且黏液及各组织的抗菌物质具有较高的溶血活性。经凝胶过滤层析的初步鉴定结果表明,各组织的抗菌活性物质可能是分子量较小的物质。     

嗜水气单胞菌胁迫对黄鳝肝脏等四种组织器官抗菌活性的影响

为研究黄鳝机体对细菌的免疫应答规律及其抗病机理,用不同浓度的嗜水气单胞菌感染健康黄鳝,采用抑菌圈法,检测不同处理时间黄鳝肝脏、肾脏、肠和皮肤等4种组织器官中抗菌肽粗提物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抗菌活性。结果显示:胁迫后,黄鳝4种组织器官的乙酸提取物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等3种菌均具不同程度的抗菌活性,但对枯草芽孢杆菌均无明显抑制作用。各组织器官的抗菌活性规律大体表现为:对金黄色葡萄球菌的抑制作用对大肠杆菌的抑制作用对嗜水气单胞菌的抑制作用。对嗜水气单胞菌的抑制作用表现为:随着感染时间的延长,肾脏提取物的抗菌活性有所增强,皮肤提取物的抗菌活性有所减弱。对大肠杆菌的抑制作用表现为:皮肤提取物最强,肠提取物最弱,随着感染时间的延长,皮肤的抗菌活性变弱。对金黄色葡萄球菌的抑制作用表现为:肾脏和肝脏提取物较强,肠和皮肤提取物较弱。     

海蛾提取物的抗氧化活性及其化学成分

研究了作为渔业副产品且药食同源的海蛾(Pegasus laternarius Cuvier)的抗氧化功效和活性物质。以自由基清除活性为导向,筛选了海蛾的最佳提取方法,对并最佳提取物的不同极性萃取部位进行抗氧化筛选,随后用色谱、波谱技术对活性部位进行化学成分的分离和鉴定。研究确定75%乙醇为最佳提取溶剂,提取总膏萃取后的乙酸乙酯和正丁醇部位为抗氧化活性部位;在活性部位分离纯化5个化合物,分别鉴定为胆甾醇、(2S,3S,4R,8E)-8,9-二脱氢植物鞘氨醇(2’R)-2’-羟基脂肪酰胺、胆甾醇硫酸酯、对羟基苯甲醛和牛磺酸。研究结果表明,海蛾提取物抗氧化作用明确,活性部位为乙酸乙酯和正丁醇萃取部位,活性部位的化学成分研究为其进一步药效研究奠定了物质基础。     

固相萃取在元素形态分析中的应用

元素形态分析是定量测定样品中元素的一个或多个化学形态的过程,元素形态分析首先是对元素的形态进行有效分离,然后进行检测。固相萃取是有效的分离富集技术,在微量元素形态分析中获得了广泛的应用。文章介绍了固相萃取的基本原理和一般操作方法,综述了微量元素形态分析中的固相萃取分离技术,总结了固相萃取中常用的吸附剂,如键合硅胶、有机聚合物、纳米颗粒物质和生物材料,在样品前处理中的应用。对固相萃取技术的优缺点进行了评述,对其在微量元素形态分析中的发展趋势进行了展望。     

斑点叉尾嗜麦芽寡养单胞菌溶血素的分离、纯化与特性研究

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A50离子交换层析和Sephadex G100凝胶层析对嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的溶血素进行了分离、纯化并对其生物学活性进行了研究。结果显示:嗜麦芽寡养单胞菌产生一种分子量为20.76 KD的单一多肽溶血素。该溶血素对斑点叉尾、云斑、鲫、人、小白鼠和兔等多种动物红细胞具有溶血活性;家兔肠袢试验显示其能致兔回肠积液,具有肠毒性;致Vero细胞形态改变,具有细胞毒性,对Vero细胞的TCID50为0.126μg。     

黄鳝皮肤黏液抗菌肽的分离纯化及其部分特性研究

以黄鳝皮肤黏液为材料,通过Sephadex G-50凝胶层析和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析,分离纯化了具有抗菌和镇痛活性的多肽MAS-Ⅳ-4,用Tricine-SDS-PAGE测得其分子量为10.4 kD,用显微熔点仪测得其熔点为208～211℃.用抑菌圈法测定其抑菌活性,结果表明,MAS-Ⅳ-4对嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强的抑菌效果.此外,每只注射0.75 ml以上的MAS-Ⅳ-4样品液能显著提高小白鼠的痛阈值.MAS-Ⅳ-4还具有微弱的溶血活性和丝氨酸蛋白酶抑制活性.     

海蜇毒素的分离纯化及其性质的初步研究

通过研究冻融海蜇触手,Sephadex G-10凝胶过滤层析脱盐,SP Sephadex C-25离子交换层析等分离纯化技术,从海蜇Rhopilema esculentum触手中分离到RE-5-6毒素,初步测定其分子量约为66.2 kD并对其性质进行了初步研究.结果表明,RE-5-6具有下列性质.(1)对鸡血表现出较强的溶血活性;(2)可大大提高小白鼠的对热痛阈值即有明显的镇痛效果,且镇痛作用随着注射浓度的增加而加强;(3)对小白鼠皮肤和眼睛分别表现中度和轻度刺激性;(4)对革蓝氏阴性菌大肠杆菌以及真菌白色念珠菌等有抑制作用.但未检测到丝氨酸蛋白酶抑制剂活性.     

食品中农药残留分析技术进展

综合叙述了近几年来国内外食品中农药残留的样品前处理技术和分析方法.其中固相萃取、固相微萃取、超临界流体萃取、基质固相分散萃取、微波萃取、凝胶渗透色谱技术在农残分析的样品前处理中得到了迅速发展和广泛应用.气相色谱、超临界流体色谱、液相色谱--质谱联用技术、免疫分析等已广泛应用于食品的残留检测中.     

浒苔提取物对太平洋牡蛎受精卵孵化的抑制效应

针对2007-2009年间在黄海海域形成"绿潮".的大型绿藻浒苔(Enteromorpha prolifera).研究了其3种不同极性有机溶剂(甲醇、丙酮、氯仿)提取物对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)受精卵孵化的影响.结果表明.在48 h内.浒苔的甲醇和丙酮提取物对太平洋牡蛎受精卵孵化有较强的抑制作用.高浓度提取物能够完全抑制太平洋牡蛎受精卵孵化至D型幼虫.而氯仿提取物对太平洋牡蛎受精卵孵化的影响没有明显的浓度-效应关系.应用乙酸乙醋和石油醚对浒苔的甲醇提取物进行液-液萃取.并探讨了乙酸乙醋相和石油醚相中的浒苔提取物对牡蛎受精卵孵化的影响.结果表明.石油醚相和乙酸乙醋相中的浒苔提取物对牡蛎受精卵孵化均有很强的抑制效应.上述研究表明.浒苔中存在能够抑制太平洋牡tfi受精卵孵化的活性物质.这类物质应具有较高的极性.