曼氏无针乌贼胚胎发育的初步观察

将曼氏无针乌贼受精卵卵膜剥离,在显微镜或解剖镜下观察胚胎发育的全过程,结合室内人工育苗的孵化技术进行探讨。曼氏无针乌贼卵为粘性卵,呈黑色,类型属端黄卵,卵膜属三级卵膜,卵裂类型为不全卵裂,囊胚呈盘状,发生类型为直接发生型。在水温为23.8～26.2℃、盐度29.3时,最快14d孵出幼体,最慢23天孵出幼体,孵出幼体高峰期为18～21d,高峰期的孵出量占总孵出量的79.4%,孵化率为83.1%。胚胎发育速度与温度高低（20～30℃）成正比,盐度低于22对孵化率有严重影响。     

金乌贼和曼氏无针乌贼胚胎发育及其盐度耐受能力的比较研究

采集金乌贼(Sepia esculenta)及曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)受精卵,观察了金乌贼胚胎发育过程,比较分析了2种乌贼受精卵和仔乌的形态特征;分别研究了金乌贼受精卵在盐度20,25,30(对照)、33,36及曼氏无针乌贼受精卵在盐度15,20,25,30(对照)、36条件下的孵化率,分析了2种乌贼受精卵在192 h盐度突变过程中卵液渗透压和受精卵Na~+/K~+-ATPase活力的变化,比较了其在相同盐度20,25,30,36条件下的孵化率及耐受盐度突变的生理适应过程.结果表明,金乌贼胚胎发育第7天器官开始分化,第14天器官开始形成,盐度30、水温22～24℃时,其孵化时间为20～21 d;盐度30处理组,2种乌贼受精卵的孵化率均显著高于其他盐度处理组(P<0.01);在192 h盐度突变过程中,2种乌贼受精卵卵液渗透压随环境盐度的变化而变化,金乌贼受精卵卵液渗透压与环境渗透压相等,而曼氏无针乌贼受精卵卵液渗透压比环境渗透压平均高出60 mOsm/kg,2种乌贼受精卵均未检测到Na~+/K~+-ATPase活性.比较发现,虽然2种乌贼受精卵调节渗透压能力均较弱,但曼氏无针乌贼受精卵比金乌贼能更好地适应盐度变化.本研究旨在探明两种乌贼受精卵对盐度的适应性,为开展规模化人工繁育与资源增殖提供基础依据.     

曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)生物学研究现状及展望

曼氏无针乌贼作为我国主要的海产捕捞对象,由于长期以来过度捕捞、自然产卵场破坏等原因,资源量急剧下降。近年来在广大科研工作者不懈的努力下,曼氏无针乌贼的生物学研究和人工养殖都取得了可喜的成绩,人工放流取得显著的效果,资源量有显著回升。本文简单介绍近年来曼氏无针乌贼研究领域内取得的一些成绩,并且提出了展望。     

曼氏无针乌贼精子的超微结构

采用透射电镜的方法研究曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)成熟精子的形态及结构特征.结果表明,曼氏无针乌贼的成熟精子由头部和尾部组成,尾部可明显地分为中段、主段和末段3部分.头部由顶体和细胞核构成,顶体呈倒"U"形,位于核的顶端,其内电子密度均匀.细胞核呈稍弯的长柱状纺锤形,为高电子密度的均质结构.尾部中段可见,是由无数个线粒体组成的线粒体距(mitochondrial spur)围绕尾部鞭毛.鞭毛由"9+2"结构的轴丝及外围9束粗纤维组成,形成"9+9+2"结构.尾部主段线粒体距消失,粗颗粒物质包绕轴丝.精子末段呈细长鞭状,由轴丝和质膜组成,随后包围轴丝的9束粗纤维直径变细直至消失,最终,轴丝仅为单一微管.研究认为,曼氏无针乌贼的精子类型是介于原生型与修饰型之间的中间型.[中国水产科学,2009,16(1):8-14]     

曼氏无针乌贼对溶解氧耐受力的研究

在封闭的容器内,设置不同的温度梯度,进行不同规格的曼氏无针乌贼对溶解氧耐受力的实验.采用隔膜法检测实验过程中不同阶段的溶解氧,及结合乌贼养殖生产实际情况,研究其对溶解氧耐受情况.结果表明曼氏无针乌贼耗氧率与水温成正比例关系、与个体体重成反比例关系,耗氧率为146.0～431.4mg/kg·h-1,窒息点为1.96～3....     

北方地区曼氏无针乌贼越冬养殖技术

为解决春季育苗亲体需求,日照市海洋与渔业研究所进行了曼氏无针乌贼的人工养殖,并进行了越冬养殖技术研究。经过几年的越冬实践证明,用太阳能作为热源进行曼氏无针乌贼越冬是可行的。     

曼氏无针乌贼遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)10个个体的遗传多样性进行了检测,从24个随机引物中筛选出10个,对每个曼氏无针乌贼的DNA进行扩增,结果表明,每个引物扩增出2～8条清晰可辨且重复性强的条带,10个引物共检测到48条清晰且重复性好的条带,相对分子质量在200～2 000 bp,其中多态位点为7个,占14.6%,平均杂合度H0为0.032.实验所得出的曼氏无针乌贼的遗传多样性是比较低的.由于缺乏历史资料和数据的比较,只依据本实验的结论不能断定究竟是过度捕捞还是环境破坏影响了曼氏无针乌贼的遗传多样性.     

光棘球海胆胚胎发育生物学零度和有效积温的初步研究

通过室内试验和数理统计的方法,研究了光棘球海胆受精卵发育的生物学零度及有效积温。试验结果表明:光棘球海胆受精卵发育的生物学零度为4.66℃;受精卵发育至棱柱幼体的有效积温为482℃.h;受精卵发育至初期稚胆的有效积温为350℃.d。     

黄河口及莱州湾海域曼氏无针乌贼的群体组成和洄游分布

曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni de Rochebrune)是一年生的中型乌贼,俗名叫墨鱼,生长快,肉质鲜美,是受市场欢迎的海味食品。在我国沿海本种乌贼是资源丰厚,产量最高的一种经济头足类。它每年产量可选几万吨,其中以东海产量为最高,是东海群众渔业的主要捕捞对象之一。本种在黄河口及莱州湾一带海域也有繁殖群体洄游,是我国北方海区重要的水产资源。每年5、6月间,当水温上升到16℃时,无针乌贼的群体从黄海越冬场,游抵黄河口及渤海其他海湾,进行产卵繁殖。秋末11月水温下     

野生和养殖曼氏无针乌贼亲体形态、生化组分及其胚胎发育的比较

为优化曼氏无针乌贼人工繁育技术,提高人工增殖苗种的产量与质量,采用实验生态学方法,对比分析了野生和养殖曼氏无针乌贼（Sepiella japonica）的表观形态、生化组分及其受精卵的形态差异,探究了光照周期与受精卵胶质外膜对曼氏无针乌贼胚胎发育的影响。结果显示：野生和养殖曼氏无针乌贼的表观形态、生化组分均存在显著差异,野生群体性成熟规格远大于养殖群体,肌肉和肝脏组织中的脂肪含量显著低于养殖群体（P<0.05）,卵巢中的蛋白质含量则显著高于养殖群体（P<0.05）;养殖亲体所产黑卵在12D12L光照周期条件下孵化率最高,所产白卵在24D和24L条件下孵化率最高,野生亲体所产卵在24D和12D12L条件下孵化率最高;随光照时间的延长,受精卵的平均孵化时间具有先增加后减小的趋势,表明光照周期是影响曼氏无针乌贼胚胎发育的重要因素;实验发现,将受精卵胶质外膜剥离处理后,养殖亲体所产黑白卵的平均孵化时间具有减少的趋势,但孵化率显著下降（P<0.05）。综上所述,建议在曼氏无针乌贼人工苗种生产过程中,尽量选用大规格野生乌贼作为繁育亲体。此外,在受精卵孵化期间,应对孵化池进行适当遮光处理,避免受精卵长时间暴露于强光照环境中,以提高孵化率和仔乌成活率。本实验研究结果可为曼氏无针乌贼人工苗种繁育技术优化提供参考。     

曼氏无针乌贼的卵子发生及卵巢发育

采用组织学方法对人工养殖曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)卵子发生、卵巢发育周期进行组织学、细胞学观察。根据细胞大小、胞核形态及卵母细胞与滤泡细胞的关系,将曼氏无针乌贼卵子发生划分为卵原细胞期、卵母细胞期、成熟期和退化吸收期4个阶段,并阐述了各期卵母细胞的组织学特征。曼氏无针乌贼卵子发生过程具有种的特异性,大约孵化出膜12 d的乌贼可见有卵原细胞,此后进入增殖期。卵母细胞属于典型的滤泡型,发育过程中同时存在同步性与异同步性;卵母细胞无初级卵膜,只有次级卵膜和三级卵膜,次级卵膜由滤泡细胞分泌,三级卵膜由输卵管腺、缠卵腺以及墨囊分泌物共同构成。通过对卵巢的外观形态和组织学观察,将曼氏无针乌贼卵巢发育划分为6个时期。     

背瘤丽蚌钩介幼虫寄生变态发育和有效积温的研究

选用黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)作为寄主鱼,研究了背瘤丽蚌(Lamprotula leai)钩介幼虫寄生变态发育的过程、生物学零度和有效积温等重要生物学特征。结果显示,背瘤丽蚌钩介幼虫在黄颡鱼的鳃丝、鳍条或须上均能完成变态发育。在水温(25±1)℃时,寄生期为8 d。钩介幼虫腹缘先与寄主鱼体表组织接触,寄生后5 h,大部分被鱼体组织包裹;第2天,内幼虫足丝消失,钩介幼虫全部被包在包囊中;随着钩介幼虫寄生变态发育的进行,其壳颜色逐渐加深;第7天,变成黑色不透明,并有少量钩介幼虫变态为稚蚌;第8天,稚蚌脱落达到高峰期;第9天,稚蚌全部脱落。在寄生阶段,钩介幼虫壳长、壳高和铰合部长未发生显著变化。钩介幼虫寄生变态发育的生物学零度为12.8℃,有效积温为100.2℃.d。     

体外培养条件下三角帆蚌胚胎早期发育观察及胚胎发育生物学零度和有效积温分析

为了探寻三角帆蚌胚胎体外培养方法,本实验以解剖获得的雌雄配子为材料,使用与三角帆蚌体液等渗的平衡盐溶液(BSS)进行人工体外受精和体外培养,观察各阶段胚胎的形态特征,并分析计算不同胚胎发育阶段的生物学零度和有效积温。结果显示,在温度为(25±1)℃的BSS培养条件下,受精卵发育至第二极体排放、二细胞期、四细胞期、八细胞期、十六细胞期和桑葚期的时间分别为1.8、2.8、5.6、10.5、13.9和17.3 h,胚胎最长发育至桑葚期后停止发育。另外,池塘平均水温分别为26.5、28.1和29.2℃时,三角帆蚌胚胎发育至成熟钩介幼虫分别需要10、9和8 d,计算得出三角帆蚌胚胎发育的生物学零度为14.81℃,根据生物学零度计算胚胎发育至卵裂期、囊胚期、原肠期、膜内钩介幼虫期和成熟钩介幼虫的有效积温分别为12.95、25.99、42.27、69.21和118.14℃×d。研究结果初步尝试对三角帆蚌受精卵进行体外培养,并根据胚胎发育水温和时间获得三角帆蚌早期胚胎发育的生物学零度和有效积温,可为突破三角帆蚌全人工繁育技术奠定基础,对淡水贝类现代生物育种技术研发和种质资源保护具有重要意义。     

人工养殖曼氏无针乌贼生殖系统的解剖学与组织学研究

采用解剖学和组织切片技术对人工养殖曼氏无针乌贼（Sepiella maindroni）成熟个体的生殖系统进行观察。曼氏无针乌贼为雌雄异体,其雄性生殖系统包括精巢、输精管、精囊（精囊Ⅰ、精囊Ⅱ、精囊Ⅱ的桃核体和精囊Ⅲ）、副性腺和精荚囊：雌性生殖系统包括卵巢、输卵管、输卵管腺以及附属腺（缠卵腺和副缠卵腺）。光镜下,精巢属于小叶型,由精巢壁和实质部分组成,实质部分由精小叶和小叶间质构成;卵巢呈葡萄串状,由卵巢壁、不同时相的卵母细胞和卵巢基质构成。     

曼氏无针乌贼缠卵腺组织学及超微结构的研究

采用组织学和电镜技术对曼氏无针乌贼的缠卵腺及其腺体细胞进行了研究。试验结果表明,缠卵腺由缠卵腺壁、分泌叶瓣两部分构成。其中分泌叶瓣由两类细胞组成:Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞,Ⅰ型细胞有分泌功能,分泌物以糖蛋白为主;Ⅱ型细胞无分泌功能,对Ⅰ型细胞起支持作用。     

曼氏无针乌贼副性腺中6种酶的初步研究

采用试剂盒测定了曼氏无针乌贼副性腺产卵前后乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活力,比较其产卵前后的变化,发现产卵后6种酶的活力均有下降。其中产卵前缠卵腺、副缠卵腺中乳酸脱氢酶活力分别为89、57 U/g,产卵后分别为56、45 U/g。产卵前缠卵腺、副缠卵腺中超氧化物歧化酶活力分别为78、47 U/mg产卵后缠卵腺、副缠卵腺中超氧化物歧化酶活力分别为51、32 U/mg。     

振荡频率对曼氏无针乌贼死亡率及生存状态的影响

在实验室条件下，研究了不同振荡频率（0、60、100、120、140和160 rpm）对乌贼（胴背长6.5±0.3 cm）喷墨率、死亡率、乳酸、糖原含量及酶活性的影响。结果表明：除160 rpm死亡率略有下降外，其它组随着频率的增高死亡率升高，频率120、140 rpm时死亡率最高为91.7%，显著高于0、60、100 rpm处理组（P<0.05）。死亡时间主要分布在振荡后的4~8 h区间，频率越低乌贼出现死亡的时间越晚，160 rpm率先在2 h出现死亡个体。除个别组出现波动外，随着频率的增大两种组织（肌肉、肝脏）的糖原含量降低、而乳酸含量增大，140 rpm处理组糖原、乳酸含量与对照组间差异显著（P<0.05）；除60 rpm处理组外，随着频率的增加干胰脏组织中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)活性降低，超氯化物歧化酶(SOD)活性增加，且三种酶120、140、160 rpm处理组与其它组间差异显著（P<0.05）。碱性磷酸酶(ALP)活性随着频率的增加而升高，140 rpm、160 rpm处理组与其它组间差异显著（P<0.05）。综合分析认为，频率显著影响乌贼的存活率，乌贼产生了行为和生理反应来适应振荡产生的影响，能量耗尽和干胰脏损伤可能是乌贼运输过程高死亡率的主要原因，运输过程建议车速小于40 km/h（100 rpm）且其运输时间因小于3 h，运输过程中应尽量避免大的晃动发生。     

饥饿对曼氏无针乌贼肝脏与卵巢脂肪酸组成的影响

在曼氏无针乌贼（Sepiella maindroni）性腺成熟阶段（4～5月）对其进行饥饿处理,以空腹处理组饥饿0d（禁食1d）、饥饿12d（禁食13d）和饥饿24d（禁食25d）为取样时间取其肝脏和卵巢组织进行脂肪酸组成及质量分数测定。结果表明,随着饥饿时问的延长,乌贼体质量下降,肝脏和卵巢萎缩,肝脏中的饱和脂肪酸（SFA）和单不饱和脂肪酸（MUFA）较空腹处理组有显著下降（P〈0．05）,而多不饱和脂肪酸（PUFA）和高不饱和脂肪酸（HUFA）均有显著提高（P〈0．05）。与肝脏相比,乌贼卵巢中的各脂肪酸组成在饥饿12d变化较小,饥饿24d时∑SFA较空腹处理组有极显著下降（P〈0．01）,而∑MUFA、∑PUFA＋∑HUFA和∑n-6 PU—FA显著高于空腹处理组（P〈0．05）。