鞍带石斑鱼(♂)与褐石斑鱼(♀)、云纹石斑鱼(♀)杂交后代变态发育和生长比较

本研究利用鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)冷冻精子分别与褐石斑鱼(E. bruneus)、云纹石斑鱼(E. moara)卵进行人工授精，对2种杂交子代褐龙石斑鱼(E. bruneus♀×♂E. lanceolatus)和云龙石斑鱼(E. moara♀×♂E. lanceolatus)的变态发育、仔稚幼鱼的生长进行观察和比较。结果显示，2个杂交后代受精率相近，但褐龙石斑鱼畸形率高于云龙石斑鱼，孵化率低于云龙石斑鱼。根据卵黄囊的消长、第2背鳍棘和腹鳍棘长度变化、鳞片及体色的变化，杂交后代的胚后发育划分为仔鱼期、稚鱼期和幼鱼期。在温度为24℃~26℃、盐度为29~31、溶解氧≥10 mg/L的条件下，褐龙石斑鱼与云龙石斑鱼生长发育至5 d时卵黄囊消失；培育至41 d进入稚鱼期，此时第2背鳍棘、腹鳍棘长度分别为(9.74±0.42)、(7.79±0.39) mm和(9.59± 0.46)、(5.81±0.09) mm，达到最长值，之后开始退化缩短；褐龙石斑鱼发育至51 d时，稚鱼完成变态进入幼鱼期，全长为(25.46±1.16) mm，云龙石斑鱼稍晚(56 d)，此时，全长为(23.24±1.21) mm；62 d褐龙石斑鱼体表出现4条褐色斑带，云龙石斑鱼体表出现6条褐色斑带；生长至70 d时，褐龙石斑鱼全长是云龙石斑鱼的1.04倍。褐龙石斑鱼全长日生长公式为L=2.6208e0.0465x，R²=0.9603；云龙石斑鱼全长日生长式为L=2.7158e0.0453x，R²=0.9451。褐龙石斑鱼肛前距与日龄关系式为P=1.3371e0.0483x，R²=0.9643；云龙石斑鱼肛前距与日龄的方程式为P=1.4017e0.0467x，R²=0.944。褐龙石斑鱼与云龙石斑鱼全长日增长率均在1日龄时达到最大，分别为27.89%和30.03%；13 d时，褐龙石斑鱼肛前距日增长率达到最大(25.21%)，云龙石斑鱼12 d时达到最大(27.01%)。研究表明，褐龙石斑鱼表现出较云龙石斑鱼生长更快的杂种优势，为同父异母石斑鱼杂交后代的生长及进一步育种提供了丰富的生物学数据。     

短期高脂应激对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长性能、肝脏健康和脂代谢基因的影响

本研究旨在探讨短期饲喂高脂饲料对珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus ♀×Epinephelus lanceolatus ♂) 生长性能和抗氧化能力所产生的影响, 以便于预估高脂饲料对石斑鱼生长可能产生的负面影响。在粗蛋白水平为 48%的基础上分别配制脂肪水平为 8% (EE8)、10% (EE10)、12% (EE12)、14% (EE14)、16% (EE16)、18% (EE18) 和 20% (EE20)的 7 组等氮饲料, 饲喂初均重为(13.70±0.01) g 的珍珠龙胆石斑鱼 4 周。实验结果表明, 随着饲料粗脂肪水平的提升, 增重率(WGR)和存活率(SR)无显著性变化(P＞0.05), EE14~EE20 组饲料系数(FCR)显著降低(P＜0.05), 而脏体比(VSI)显著增大(P＜0.05), 饲料粗脂肪超过 16%后蛋白质效率(PER)显著上升(P＜0.05)。EE14~EE20 组腹肌粗脂肪(AMEEC)显著升高(P＜0.05), EE16~EE20 组的肝体比(HSI)显著增大(P＜0.05)。与 EE12 组相比, EE8、EE10、 EE18 和 EE20 组的总胆固醇(T-CHO)显著升高(P＜0.05), EE16~EE20 组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著下降 (P＜0.05), EE20 组丙二醛(MDA)含量显著上升(P＜0.05), EE8、EE16~EE20 组的肝脏细胞空泡化面积和脂滴量显著增加(P＜0.05)。脂肪合成基因 g6pd、6gpd 和 me 的相对表达量在 EE20 组显著上升(P＜0.05), 脂肪分解基因 cpt-1、pparα 相对表达量在 EE16~EE20 组显著上升(P＜0.05)。研究结果表明, 饲料粗脂肪超过 16.77%时, 会造成珍珠龙胆鱼肝脏脂肪沉积, 降低肝脏抗氧化能力, 使肝脏健康受损。     

低鱼粉饲料添加枯草芽孢杆菌对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长、消化酶活性、抗氧化酶活性及其mRNA表达的影响

为探究低鱼粉饲料添加枯草芽孢杆菌对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长、消化酶活性、抗氧化酶活性及其mRNA表达水平的影响，实验以720尾初始均重为(7.00±0.02) g的珍珠龙胆石斑鱼幼鱼为研究对象，分为8个处理，每个处理3个重复，设计1个正常鱼粉对照组(鱼粉含量35%)，1个低鱼粉对照组(鱼粉含量15%)。投喂不同添加比例0(正常鱼粉对照组)、0(低鱼粉对照组)、0.10%、0.25%、0.50%、0.75%、1.00%和1.25%枯草芽孢杆菌的饲料，养殖期8周。结果显示，低鱼粉条件下，添加不同比例枯草芽孢杆菌对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼的成活率无显著影响。增重率与特定生长率随添加量的变化呈先上升后下降趋势，但均显著高于低鱼粉对照组，低于正常鱼粉对照组；当添加0.75%枯草芽孢杆菌时，饲料系数最低，其他各组显著低于低鱼粉组，高于正常鱼粉组，而蛋白质效率的变化规律则与饲料系数相反。随枯草芽孢杆菌添加量的增加，肠蛋白酶、淀粉酶活性先升高后降低。血清过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性，在添加0.75%枯草芽孢杆菌的饲料组达到最大值。肝脏过氧化氢酶mRNA相对表达水平在添加量为0.50%达到最大值，谷胱甘肽还原酶mRNA表达水平在枯草芽孢杆菌添加量为0.75%时达到最大值。通过哈维氏弧菌攻毒实验7 d，珍珠龙胆石斑鱼存活率随枯草芽孢杆菌添加量的增加显著升高。以增重率为判断依据，根据折线模型得出，低鱼粉条件下(豆粕替代配方中20%鱼粉)，饲料中添加0.63%枯草芽孢杆菌(1.0×10⁸ cfu/mL)可显著促进珍珠龙胆石斑鱼幼鱼的生长，提高抗病力、消化酶、血清过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性及其mRNA表达水平。     

第四代凡纳滨对虾抗WSSV选育家系的抗病及免疫特性研究

35个第四代凡纳滨对虾抗WSSV选育家系和未选育对虾按每克体重注射10³拷贝WSSV病毒量,根据选育家系的抗病性能分3个类群:高抗性类群,成活率达24.45%±6.56%;中抗性类群,成活率为10.70%±1.41%;敏感类群,成活率为2.72%±2.76%,各类群间差异显著(P＜0.01)。对分别代表高抗、中抗和敏感类群的12、7和3号家系以及未选育对虾按每克体重注射10²、10³、10⁴和10⁵拷贝 WSSV,高抗性对虾在10²、10³、10⁴及10⁵感染水平下的存活率分别为100%、23.3%±3.5%、7.8%±1.9%和0%;中抗对虾分别为87.7%±3.9%、12.2%±1.9%、0%和0%;敏感对虾分别为54.4%±3.9%、2.2%±1.9%、0%和0%;未选育对虾分别为51.1%±5.1%、0%、0%和0%。在10³拷贝组感染过程中免疫相关因子的变化表明,高抗对虾血液中血细胞数分别比中抗、敏感和未选育对虾提高20.7%(P>0.05),36.7%(P<0.05)和34.4%(P<0.05);PO活力上述三类对虾提高40.0%(P<0.05),76.3%(P<0.05)和63.4%(P<0.05);SOD活力分别比上述三类对虾提高31.1%(P>0.05),58.8%(P<0.05)和32.0%(P>0.05);POD活力分别比上述三类对虾提高29.6%(P>0.05),44.9%(P<0.05)和43.3%(P<0.05);血清蛋白含量分别比分别比上述三类对虾提高31.2%(P>0.05),38.7%(P<0.05)和39.3%(P<0.05),而敏感对虾和未选育对虾之间则无显著差异。结果表明,经四代选育后的高抗对虾免疫性能明显高于其他对虾,表现出良好的抗WSSV性能。     

低温胁迫对云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交后代血清生化指标的影响

选取云纹石斑鱼(Epinephelus moara♀)×鞍带石斑鱼(E.lanceolatus♂)的杂交种(俗称云龙石斑鱼)为研究对象,设定20℃、16℃、15℃、13℃和10℃共5个温度梯度(20℃为对照组),从20℃开始,采取1℃/d的降温速率,对其进行低温胁迫实验,并对云龙石斑鱼血清中生化指标和代谢酶活力进行检测.同时对棕点石斑鱼(E fuscoguttatus♀)和鞍带石斑鱼(♂)的杂交种(俗称珍珠龙胆石斑鱼)、斜带石斑鱼(E.coioides♀)×鞍带石斑鱼(♂)的杂交种(俗称青龙石斑鱼)进行低温胁迫,每天记录3种杂交石斑鱼的存活率.当存活率低于50％时,记录半致死温度.结果显示,云龙石斑鱼半致死温度为8℃,珍珠龙胆石斑鱼的半致死温度为11℃,青龙石斑鱼的半致死温度为9.5℃.云龙石斑鱼血清中肌酐(CREA)含量和总胆固醇(T-CHO)含量随低温胁迫强度增加呈先降低后上升的趋势,血清甘油三酯(TG)含量呈现波动,在15℃和10℃时与对照组比较,出现显著性差异(P＜0.05).血清葡萄糖(GLU)含量随胁迫强度的增加呈现波动,在16℃和13℃时与对照组之间有显著性差异(P＜0.05).碱性磷酸酶(AKP)活性在16℃时有所升高,但整体上与对照组无显著性差异(P＞0.05).过氧化氢酶(CAT)活性呈现波动,除13℃以外,其余各组均与对照组有显著性差异(P＜0.05).血清中谷草转氨酶(GOT)的活性在13℃和16℃时略高于对照组.谷丙转氨酶(GPT)活性呈现先升后降的趋势,在16℃和15℃时,与对照组差异显著(P＜0.05).结果表明,3种杂交石斑鱼中,云龙石斑鱼最耐受低温;低温胁迫会导致幼鱼免疫力和抗氧化能力下降,实际生产中仍应降低胁迫强度和缩短胁迫时间.     

云龙石斑鱼海水网箱健康养殖技术研究

正云龙石斑鱼又称云龙斑,体梭长形,呈灰黑色,布满白色条块花纹,并间杂白色斑点;背前部具有U形左右对称马蹄纹,体两侧分别有宽窄交替的条状白色斑纹,头部具有块状斑纹;游泳速度快,性凶猛,杂食兼肉食性;是以鞍带石斑鱼(俗称龙胆石斑鱼)为父本、云纹石斑鱼(俗称油斑)为母本进行杂交而获得的石斑鱼新品种(品种登记号:GS-02-002-2018),具有抗逆性强、生长     

云纹石斑鱼(E. moara)(♀)×七带石斑鱼(E. septemfasciatus)(♂)杂交F1生长特征与其亲本子代的比较

为获得在工厂化养殖条件下的生长特性和规律,分别对10-14月龄的云纹石斑鱼、七带石斑鱼及其杂交F1 3个群体的体长、体重、生长指标、肥满度、超亲优势率等主要生长参数进行测定、比较和分析,并对3个群体的生长模型进行方程拟合。结果显示,在体长和体长生长指标方面,依次为杂交F1>云纹石斑鱼>七带石斑鱼;10-11、13月龄时,累积体重值依次为杂交F1>七带石斑鱼>云纹石斑鱼,体重和体重生长指标方面,增重依次为云纹石斑鱼>七带石斑鱼>杂交F1;七带石斑鱼的肥满度始终最高,杂交F1次之。研究表明,杂交F1体长生长速度最快,且在11月龄前的体重生长速度最快;云纹石斑鱼在11月龄后体重增长速度加快并超过其他两个群体;每月体长、体重生长值的超亲优势率分析显示,杂交F1在14个月的生长中表现出杂种优势。云纹石斑鱼为等速生长类型,七带石斑鱼与杂交F1同属于异速生长类型。     

不同维生素E水平饲料对云纹石斑鱼幼鱼低盐胁迫前后抗氧化和渗透压调节功能的比较

维生素E(VE)在鱼类繁殖、生长代谢、抗氧化能力和免疫机能等方面有至关重要的作用。为探究饲料VE添加量对云纹石斑鱼低盐度胁迫下抗氧化和渗透压调节功能的作用,本实验设计0、20、40、80和160 mg/kg等5个VE水平饵料添加量,依次为A、B、C、D、E组,饲喂云纹石斑鱼幼鱼56 d。然后进行6 h低盐度(12)胁迫实验,测试皮质醇(COR)、葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)等血清生化指标,超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)等抗氧化指标,以及鳃Na⁺/K⁺-ATP酶(NKA)、Ca²⁺-ATP酶活力等。结果显示,血清COR含量最高为盐度胁迫后A(32.74±1.53) ng/mL,最低为胁迫前E(19.06±3.88) ng/mL;GLU含量最高为盐度胁迫后A(16.46±0.99) mmol/L,最低为养殖前O(7.90±0.34) mmol/L;LD含量最高为低盐度胁迫前C(1.94±0.15) mmol/L,最低为胁迫后E组(1.30±0.06) mmol/L。说明VE的添加可以增强云纹石斑鱼抗应激的能力,且在47.524~134.566 mg/kg(B~D)的添加范围,效果较好。血清SOD、CAT、GSH-Px活力、T-AOC和MDA含量与投喂饲料中VE水平密切相关,SOD最高为胁迫前C(105.29±9.07) U/mL,最低为胁迫后A(11.23±2.30) U/mL;CAT最高为养殖前O(4.09±0.17) U/mL,最低为胁迫后A(0.35±0.10) U/mL;GSH-Px最高为胁迫前E(972.58±55.35) U,最低为胁迫后A(47.90±10.64) U;MDA最低为胁迫前D(33.48±2.34) nmol/mL,最高为胁迫后A(101.79±7.79) nmol/mL。饲料中添加91.378~178.924 mg/kg(C~E)水平VE对其抗氧化能力有增强作用。VE可增强NKA活力,当VE添加量为91.378 mg/kg(C)时,低盐度胁迫对NKA影响较小。而添加91.378~178.924 mg/kg(C~E)水平VE可增强云纹石斑鱼Ca²⁺-ATP酶活力。研究表明,饲料中添加91.378~134.566 mg/kg范围的维生素E,可以增强云纹石斑鱼的机体活力、抗应激及环境胁迫能力。     

云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F1的DNA甲基化分析

为探讨石斑鱼杂种优势形成过程中基因组DNA甲基化水平的变化，本研究采用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism, MSAP)技术检测云纹石斑鱼(Epinephelus moara)、鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)及云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F1 3个群体的基因组DNA甲基化水平，分析杂交F1与亲本基因组DNA甲基化水平的差异。结果显示，云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼的基因组DNA属于甲基化程度较高的类群；云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F1的DNA总甲基化率分别为60.62%、59.38%和55.78%，DNA全甲基化率分别为31.37%、30.67%和29.27%，DNA半甲基化率分别为29.25%、28.71%和26.51%；杂交F1的DNA总甲基化率、全甲基化率和半甲基化率均低于双亲，并存在极显著差异(P<0.01)，3个群体的全甲基化率均大于半甲基化率。研究表明，云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F1 DNA甲基化水平与杂种优势呈负相关，杂交F1 DNA甲基化水平的降低可能是形成快速生长等杂种优势的原因之一。     

云龙石斑鱼

正一、品种概况(一)育种过程1.云龙石斑鱼的亲本来源(1)母本:云纹石斑鱼(Epinephelus moara),2005年12月从福建东山县、广东饶平县养殖渔排收集野生苗种养殖的云纹石斑鱼,筛选健康的4龄～5龄性成熟个体294尾,构建了云纹石斑鱼基础群体。(2)父本:鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus),2003年4月从马来西亚收集和引进5龄～6龄野生鞍带石斑鱼30尾;从台湾引进人工培育鞍带石斑鱼群体中筛选健康的5龄～6龄个体75尾,构建了鞍带石斑鱼育种基础群体。     

青石斑鱼胃蛋白酶原的分离纯化及酶学性质

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、SP-Sepharose阳离子交换柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼的胃中分离纯化到3种胃蛋白酶原(PG-1、PG-2和PG-3),SDS-PAGE结果显示,它们的分子量分别为35、36和37 ku.在pH 2.0下,3种胃蛋白酶原转化为有活性的胃蛋白酶P-1、P-2和P-3,分子量分别约为33、33和34 ku.3种酶的最适pH分别为3.0、2.5和2.5,最适温度均为40℃,且均能被典型的天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatin A有效抑制.免疫交叉反应结果表明,3种胃蛋白酶原能与大鼠抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ,PG-3b,PG-3a,PG-4a及PG-4b多克隆抗体发生不同程度的免疫交叉反应.动力学参数测定结果表明,P-1、P-2和P-3对酸变性牛血红蛋白的KM/Kccat及Kcat/Km值分别为7.0×10-5 mol/L,17.6 S-1,2.5×105mol/(L· S);5.5×10-5 mol/L,22.8 S-1,4.1×105 mol/(L · S)和5.2 ×10-5 mol/L,18.7 S-1,3.6 ×105 mol/1(L· S).     

真空包装青石斑鱼片在0 ℃贮藏时的品质变化特性

以感官特性、细菌总数、理化参数(基本营养组成、质构、色差、pH、TBA、TMA-N、TVB-N、K值、Ca²⁺-ATPase活性、SDS-PAGE)为指标,考察了真空包装的青石斑鱼片在0 ℃贮藏过程中的品质变化情况。结果表明,青石斑鱼片是一类高蛋白低脂肪的食品;气味和口感与贮藏时间均有显著正相关性(r=0.94和0.98),且口感评分比气味评分增加得快,但未达到阈值3分;细菌总数随贮藏时间呈显著递增(r=0.97),在第12天仍没有超过4 Log CFU/g,保持着一级鲜度,在第15天达到4.34 Log CFU/g,处于二级鲜度;硬度(r=-0.89)、胶黏性(r=-0.73)、咀嚼性(r=-0.87)与时间显著负相关;随着肌肉的老化,L^*值和C^ab值随贮藏时间显著下降(r=-0.91和-0.95),而b^*值与贮藏时间呈显著正相关性(r=0.99),肌肉逐渐呈灰色调、变暗、彩度明显下降;pH、TBA值在贮藏期变化不大,与贮藏时间弱相关,因此,不适合用于作为反映青石斑鱼片品质变化的指标;在贮藏期末,TVB-N与TMA-N与贮藏时间呈显著线性相关(r=0.86和0.99),其含量分别达到12.94 mg N/100 g和0.75 mg N/100 g,均低于腐败水平阈值;SDS-PAGE显示肌动蛋白球重链和肌动蛋白呈连续性的水解;Ca²⁺-ATPase活性下降速度较快,且与贮藏时间显著相关(r=-0.96);K值随贮藏时间延长而显著增加(r=0.98),贮藏末期达到54.91%,呈中等新鲜水平。因此,0 ℃真空包装下,其细菌总数增长缓慢,保持较好的感官品质及延缓TVB-N等理化指标的变化及和蛋白质的水解。感官指标、细菌总数、质构(硬度、粘附性和咀嚼性)、色度(L^*、b^*和C^ab值)、TVB-N、TMA-N、Ca²⁺-ATPase活性和K值在贮藏期内变化显著,且与贮藏时间显著相关,可考虑作为反映青石斑鱼片腐败的合适指标,但货架期的评定,需综合上述参数而定。     

斜带石斑鱼IgM、IgZ和IgD重链基因的克隆

应用RACE方法获得斜带石斑鱼膜结合型免疫球蛋白M(membrane-bound immu-noglobulin M,mIgM),膜结合型免疫球蛋白D(mIgD),分泌型免疫球蛋白Z(secretory immu-noglobulin Z,sIgZ)的重链基因。斜带石斑鱼膜结合型IgM重链恒定区包含3个恒定区结构域(μ1,μ2,μ3)以及两个跨膜外显子(TM1,TM2),TM1外显子与μ3结构域末端相连接。氨基酸序列相似性分析结果显示,斜带石斑鱼mIgM各恒定区与牙鲆mIgM恒定区相似性最高,为53%~78%。mIgD的cDNA全长为3 375 bp,开放阅读框包含3 006 bp,其恒定区由1个μ1外显子,7个δ外显子以及跨膜区组成。斜带石斑鱼IgD恒定区与鳜IgD各恒定区氨基酸序列相似性最高,δ1~δ7的相似性分别为75.5%、75.8%、65.4%、76.6%、88.1%、90.6%、82.8%,TM结构域为82.7%。sIgZ的基因结构与其他硬骨鱼类sIgZ的结构相似,包括4个外显子和3个内含子,内含子长度分别为222、129和458 bp。利用半定量PCR分别检测了这3种基因在斜带石斑鱼各器官/组织中的表达,发现mIgM在头肾、肾脏、脑、脾脏、肠、鳃、心脏和胸腺中均有表达;mIgD的mRNA在头肾、肾脏以及胸腺中有较高的表达,在肠中表达量较低;sIgZ mRNA主要分布于淋巴组织如头肾、肾及脾脏中,而在鳃、心脏和胸腺中的丰度较低。     

鞍带石斑鱼(♀)×云纹石斑鱼(♂)杂交后代早期发育及正反交后代生长特性

以鞍带石斑鱼为母本,云纹石斑鱼为父本,采用人工授精技术进行了种间反交实验,并对反交子代的胚胎发育和仔稚幼鱼的生长情况进行了观察,进而与亲本及正交F1云龙石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)的表型性状进行对比分析。结果显示,反交子代受精卵为圆形、透明、浮性卵,卵径为(0.787±0.013) mm,有1个油球,居卵中央,在水温为24°C、盐度30、pH为7.8的孵化条件下,胚胎可以正常发育,经历受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、器官形成和出膜6个阶段25个时期完成胚胎发育,初孵仔鱼全长为(1.595±0.015)mm,说明反交的可行性。孵化后3 d,卵黄囊消失,由前期仔鱼发育为后期仔鱼,全长(2.530±0.023) mm。孵化后52 d进入稚鱼期,全长(17.500±1.915) mm,第二背鳍棘长(5.795±0.049) mm,第一腹鳍棘长(2.992±0.911) mm;58 d稚鱼背鳍棘收缩至最小值(4.460±0.600) mm时,鳞片和体色开始出现。孵化后67 d进入幼鱼期,全长(34.500±1.291)mm,第二背鳍棘和第一腹鳍棘完全退化,体型与成鱼相似,全身覆盖鳞片,反交F_1体色不一致,具4种表现型。生长对比结果显示,正反交F_1的发育速率均介于亲本之间,均快于云纹石斑鱼,慢于鞍带石斑鱼,反交F_1生长速率慢于正交F_1。研究结果为石斑鱼杂交优势性状形成及遗传解析提供了一定数据基础。     

斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立

本研究以斜带石斑鱼肝细胞为实验对象,在不同培养条件下进行原代培养,旨在探讨稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法。采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)的含量,以分析肝细胞生长状态。结果表明,组织块方法不适于斜带石斑鱼肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出,而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108个/g肝重,活细胞数达到95%;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199培养基;启动原代培养的48~72 h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清液中LDH活性显著降低,ALB和BUN含量显著升高。结果显示,0.25%的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48~72 h生长代谢旺盛。     

不同饲料蛋白水平下点带石斑鱼对鸡肉粉、羽毛粉和血粉混合物的利用能力

通过10周网箱养殖实验,评价了不同饲料蛋白水平下点带石斑鱼对1种鸡肉粉、羽毛粉和血粉混合物的利用能力。采用2×4实验设计,设2个饲料蛋白水平(490 g/kg和530 g/kg粗蛋白),每个饲料蛋白水平下设4个鱼粉水平,其中1组饲料中加入500 g/kg鱼粉(对照),另外3组饲料中分别加入139、278、416 g/kg的鸡肉粉、羽毛粉和血粉混合物(鸡肉粉∶羽毛粉∶血粉=65∶20∶15)替代对照饲料中30%、60%、90%的鱼粉。实验鱼初始体重为(33.4±0.1) g。实验期间,除恶劣天气外,每天分两次按饱食量投喂实验鱼。实验结果表明,饲料蛋白水平对摄食量、增重,饲料系数、氮储积效率、能量储积效率和鱼体组成无显著影响;饲料鱼粉含量显著影响增重,饲料系数、氮储积效率和能量储积效率,但对摄食量和鱼体组成无显著影响。在相同饲料蛋白水平下,特定生长率(SGR)随鱼粉含量降低而下降;当鱼粉含量相同时,摄食高蛋白饲料的鱼SGR略高于摄食低蛋白饲料的鱼。本实验结果显示,通过添加鸡肉粉、羽毛粉和血粉混合物可将点带石斑鱼饲料鱼粉含量降低到200 g/kg,在490~530 g/kg范围内提高饲料蛋白水平无助于降低点带石斑鱼饲料鱼粉含量。     

Changes in Na+,K+-ATPase activity and gill chloride cell morphology in the grouper Epinephelus coioides larvae and juveniles in response to salinity and temperature

The activity of the enzyme Na⁺,K⁺-ATPase and morphological changes of gill chloride cells in grouper, Epinephelus coioides larvae and juveniles were determined 6–48 h after abrupt transfer from ambient rearing conditions (30–32 ppt, 26.5–30 °C) to different salinity (8, 18, 32, 40 ppt) and temperature (25, 30 °C) combinations. Na⁺,K⁺-ATPase activity in day 20 larvae did not change at salinities 8–32 ppt. Activity decreased significantly (P <0.01) after exposure to 40 ppt at 25–30 °C, which was accompanied by an increase (P <0.05) in density and fractional area of chloride cells. Enzyme activity in 40 ppt did not reach a stable level and larvae failed to recover from an osmotic imbalance that produced a low survival at 25 °C and death of all larvae at 30 °C. Enzyme activity and chloride cell morphology in day 40 groupers did not change in 8–40 ppt at 25 °C and 8–32 ppt at 30 °C. A significant decrease and a subsequent increase in Na⁺,K⁺-ATPase activity in 40 ppt at 30 °C was associated with the increase in chloride cell density resulting in an increased fractional area but a decreased cell size. Enzyme activity and chloride cells of day 60 grouper were unaffected by abrupt transfer to test salinities and temperatures. These results demonstrate that grouper larvae and juveniles are efficient osmoregulators over a wide range of salinities. Salinity adaptation showed an ontogenetic shift as the larvae grew and reached the juvenile stage. This development of tolerance limits may reflect their response to actual conditions existing in the natural environment.     

Pyridoxine deficiency of grouper, <Emphasis Type="Italic">Epinephelus coioides</Emphasis>: physiological and biochemical alteration

Pyridoxine is essential for animals. The purpose of this study was to investigate the pyridoxine deficiency symptoms and the fit dose of pyridoxine to keep normal physiological function in grouper, Epinephelus coioides. Graded levels of pyridoxine (0, 1, 2, 4, 8, 16, 32 mg pyridoxine kg⁻¹ diet) were fed to grouper juveniles (14.83±0.31 g) for 8 weeks, and then some physiological and biochemical parameters were measured. Pyridoxine deficiency symptoms such as anorexia, poor survival, convulsion, helically swimming and hyperirritability were observed in fish fed the pyridoxine-deficient diet, and these fish also showed low whole blood haemoglobin level, liver glutamic-pyruvic transaminase (GPT) and superoxide dismutase (SOD) activities. Slight symptoms of pyridoxine deficiency also appeared among fish fed the diet with very low dose (1 mg pyridoxine kg⁻¹ diet) of pyridoxine in 6 weeks. Broken-line regression analysis showed that the optimal pyridoxine levels for these fish to keep normal survival, whole blood haemoglobin level, liver GPT and SOD activities were approximately 1.75, 1.87, 2.22 and 2.05 mg kg⁻¹, respectively.