过滤结构与水流设置

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对造纸废水造成的斑马鱼基因纽DNA损伤进行检测.首先进行急性毒性试验,确定造纸废水96h-LC50浓度为11.328%.从50条RAPD引物中筛选出20条对正常斑马鱼能稳定扩增且重复性好的引物用来检测.利用造纸废水(原浓度的3.8%)对斑马鱼染毒96h,随机提取染毒后6尾斑马鱼基因组DNA,用筛选的20条引物对其进行PcR扩增.用同样的引物对未染毒对照组的另外10尾斑马鱼基因组DNA进行分析,比较两组鱼的RAPD图谱,从而分析造纸废水对斑马鱼的致突变作用.20个引物中引物S112可以检测出造纸废水染毒前后斑马鱼基因组DNA的差异.用引物S112,选取的对照组每个斑马鱼DNA的RAPD谱带均为8条亮带,随机抽取的染毒组20尾鱼中,每尾斑马鱼基因组DNA的RAPD谱带为5～7条,其中有20尾出现了71 3bp稳定条带的缺失,14尾出现了480bp稳定条带的缺失,7尾出现了1 332bp稳定条带的缺失.这20尾鱼的RAPD图谱中的条带总数为120条,低于20尾对照组的条带总数(160条).本文得出的结果显示了造纸废水对斑马鱼的基因组DNA损伤作用,同时验证了RAPD技术在检测造纸废水对水生动物基因组申的致突变作用的可行性.     

蓝鳃太阳鱼F1—F3三个子代遗传多样性的RAPD分析

利用随机引物扩增多态DNA(RAPD)对吴江市水产养殖有限公司所采集的蓝鳃太阳鱼亲代、人工繁殖获得的F1-F3代各30尾个体进行遗传多样性分析.从60条随机引物中筛选出条带较好的16条引物进行扩增,共扩增出42个多态位点,多态位点比例为48.3％.三代群体的多态位点比例分别为48.4％、50.8％、45.7％.Shannon多样性指数分别为1.323、1.325、1.125.随着选育的进行,上述各项参数的计算值逐渐降低,反映出选育群体在遗传上逐渐得到纯化,基因型逐步趋向纯合、稳定,经进一步的选育可望获得较稳定的品系.     

利用AFLP技术筛选锯缘青蟹性别差异DNA片段

采用高盐和酚氯仿异戊醇 (PCI)结合法提取DNA ,利用AFLP技术 ,应用 5 2个引物组合 ,检测了锯缘青蟹 (Scyllaser rata)雌雄基因组DNA的多态性 ,筛选与锯缘青蟹性别相关的分子标记。实验中共扩增出 4 312条带 ,筛选出候选差异DNA片段 74 8条。这些差异DNA片段的获得 ,为研究锯缘青蟹性别的分子标记奠定了基础     

异精雌核发育草鱼F1与普通草鱼的SCAR标记鉴别初报

以赤眼鳟生理失活精子诱导的雌核发育草鱼F1群体(CC)和与之母本同源的普通草鱼群体(PC)为材料,采用RAPD和SCAR分子标记相结合的技术,在100条RAPD随机引物扩增的16条有效引物中扩增筛选出7条群体差异条带,其中1条为异精雌核发育草鱼群体中特有,其余均表现为异精雌核发育草鱼群体缺失;对7条RAPD特异条带的回收中仅得到S32和S336的特异条带。经回收、克隆、测序后根据序列信息设计了4对SCAR引物,其中S336的2对SCAR引物在两群体间扩增出的条带一致,特异性消失;S32的2对SCAR引物能扩增出两群体间的特异条带;对S32-Scar1F/S32-Scar1R扩增出的SCAR标记S321643进行大样本检测结果表明:该标记在异精雌核发育草鱼群体中的出现频率为0(0/55),在普通草鱼群体中出现频率为76.7%(46/60)。     

1种快速鉴定金钱鱼遗传性别的方法

金钱鱼(Scatophagus argus)是我国东南沿海名优养殖鱼类, 具有 XY 性别决定系统, Dmrt1 是其性别决定候选基因。金钱鱼生长具有性别二态性, 雌鱼生长快于雄鱼。目前缺乏快速鉴定金钱鱼遗传性别的分子标记, 阻碍了其性别控制育种技术的建立。本研究以公布的金钱鱼基因组数据, 在 Dmrt1 附近设计多对标记引物, 并通过 PCR 扩增验证标记的性别特异性。其中, 标记引物 Dmrt1-Marker-4-F/R 在雌鱼中仅扩增出一条 593 bp X 染色体条带, 而在雄鱼中能扩增出 593 bp 和 693 bp 两条条带, 分别来自 X 和 Y 染色体, 表明该标记为共显性标记。利用该标记检测我国南海沿岸 3 个不同地理群体 213 尾金钱鱼的遗传性别与表型性别完全一致。此外, 快速 DNA 提取试剂盒提取的片段较短 DNA 样品也可用于该对标记引物准确鉴定遗传性别。本研究建立了一种快速、准确、经济可靠的金钱鱼遗传性别鉴定方法, 将旨为促进金钱鱼性别控制育种技术的建立, 并为金钱鱼性别决定与分化机制研究提供依据。     

罗非鱼的SRY基因PCR扩增分析

SRY与性别有关，本文通过对罗非鱼SRY基因分析来探索罗非鱼的性别决定机制。引物对A是根据人的SRY基因来设计的，它特异扩增正常男性SRY基因含保守区在内约600bpDNA片断。用引物对A扩增三种罗非鱼的SRY基因，结果表明：在奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼、以及奥尼杂交鱼这些鱼的雌雄中都只出现了大小一致的1条带，经检测为SRY的同源基因，无性别特异性。     

三种黄鳝RAPD分析的引物筛选

试验用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对黄鳝属中产自缅甸的山黄鳝、印度尼西亚的穴黄鳝及中国的黄鳝的混合DNA进行引物筛选。40条引物有35条引物扩增出多态性片段。35条引物共获得334个扩增片段,长度为250～5417bp。     

剑尾鱼RW-H近交系的遗传结构分析

筛选31条随机引物对剑尾鱼的第8代近交RW-H系A、B、C3窝共11尾剑尾鱼个体基因组DNA进行RAPD扩增，计算近交系个体间及不同窝间的相似系数及遗传距离。结果筛选的31条引物共扩增出383条带，扩增片段的大小在0．2～3kb。其中多态性带30条，多态性带频率在0～58．33％，平均为7．83％。近交系剑尾鱼不同个体拥有相同条带的比率较高。计算得到近交系的平均相似系数(S)为0．9829(0．9716～0．9960)，平均等位基因频率(q)为0．8692，最低平均杂合率(H)为0．1308。同时，用5个微卫星标记对非选育剑尾鱼和近交系RW-H系的基因组进行分析，检测等位基因的个数和大小，结果5个微卫星座位在非选育剑尾鱼中显示为多态，而在近交系RW-H系除1个位点出现等位基因外，其余均为纯合子，计算得到近交系的平均遗传相似系数为0．9345，两种方法均证明近交RW-H系第8代剑尾鱼有较高的遗传纯合度。     

杂交一代_尼罗罗非鱼_奥利亚罗非鱼_及其亲本基因组DNA的比较

采用RAPD技术,用20个随机引物对尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交一代的精巢DNA进行扩增反应,发现引物OPZ-14和OPZ-18在尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼之间扩增出有差异的DNA片段,作为鉴定两种鱼的分子标记有较高可信度.对这两种鱼的杂交一代基因组DNA的RAPD扩增能获得足够的多态性,20个引物中有8个引物扩增出差异性产物,表明杂交一代基因杂合性增强,这是杂种优势得以形成的重要遗传物质基础之一.     

合浦珠母贝3个养殖群体的RAPD分析

利用RAPD标记技术检测了广西省北海市、海南省三亚市、广东省深圳市等 3个地理种群养殖合浦珠母贝(Pinctadamartensii)基因组DNA的多态性 ,并对其遗传结构进行了初步分析。从 4 0个随机引物中筛选出 13个10bp引物 ,它们在 3种群中共扩增出了 14 0条DNA片段 ,3种群共有片段 16条 ,DNA片段数分别为 5 8、91和 71条 ,多态性位点比例分别为 4 1 4 % ,6 5 0 %和 5 8 4 %。遗传距离分析表明 ,广西种群与广东种群的亲缘关系较近 ,而与海南种群亲缘关系较远。 13个引物中 ,引物S11和S3 58扩增出的 3种群指纹图谱差异显著 ,可作为 3种群鉴定的分子标记。     

5种石斑鱼遗传差异的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）技术对鞍带石斑鱼（Epinephelus lanceolatus）、驼背鲈（Cromileptes altivelis）、棕点石斑鱼（E.fuscoguttatus）、斜带石斑鱼（E.coioides）和鲑点石斑鱼（E.fario）的遗传多样性及系统发生进行了研究。从120个RAPD随机引物中筛选出扩增效果好的引物19个,分别用于5种石斑鱼基因组DNA的扩增。结果显示,5种石斑鱼平均多态性位点比率（P）分别为64.23%,72.61%,60.34%,69.97%,73.94%;个体间平均遗传相似系数（S）分别为0.8238,0.8110,0.8345,0.8277,0.8064;平均遗传距离（D）分别为0.1762,0.1890,0.1655,0.1723,0.1936;平均Nei基因多样性指数（H）分别为0.1189,0.1364,0.1028,0.1439,0.1648;平均Shannon信息指数（Hi）分别为0.1801,0.1992,0.1530,0.2100,0.2434。5个种间的遗传距离（Dxy）在0.3964～0.6085之间。     

27株嗜水气单胞菌致病性及ERIC—PCR指纹图谱分析

从福建省淡水养殖鱼类体内分离到27株嗜水气单胞菌，根据嗜水气单胞菌16SrDNA基因和气溶素基因（aerolysin）的保守序列，设计2对引物，对所分离到的27株嗜水气单胞菌进行双重PCR扩增，扩增结果表明，其中18株为含有Aer毒力基因的潜在致病性嗜水气单胞菌，占总菌数的66．67％。应用ERIC-PCR分型技术对27株嗜水气单胞菌菌株进行分析，以相似度54．00％为限，所有菌株可分为Ⅰ和Ⅱ两大聚类，以76．00％相似度为界，27株嗜水气单胞菌可分为11个聚类，同一个聚类中菌株分离区域基本相同。分析结果表明，分离的嗜水气单胞菌基因型的多样性和分离地域具有一定的关联，也表明ERIC-PCR可以有效应用于嗜水气单胞茵分子流行病学调查。     

漠斑牙鲆引进群体子一代遗传多样性的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对引进群体漠斑牙鲆Paralichthys lethostigma 子一代48个个体的遗传多样性进行了分析，筛选的40个10bp的随机引物中，25个引物产生了稳定性好，可重复性强的谱带。共检测到154个位点，其中多态位点有122个，多态位点的比例为79．22％，有效等位基因数为1．5629±0．3631，Nei＇s基因多样性指数为0．3184±0．1843，Shannon信息指数是0．4651±0．2574。结果表明，漠斑牙鲆处于较高的遗传多样性水平。     

大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达

依据大菱鲆红体病虹彩病毒（Turbot viral reddish body iridovirus，TRBIV）主要衣壳蛋白（Major capsid protein，MCP）基因序列，设计了一对特异性引物，并在正反向引物中分别引入EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点，从而将PCR扩增得到的TRBIV MCP基因双酶切后定向克隆到真核表达载体pGAPZαA的GAP启动子的下游位点，并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin筛选、PCR、EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切以及测序分析，构建了含有α-factor信号肽的真核重组表达载体pGAPZαA MCP。重组表达质粒pGAPZαA MCP经Avr Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33中，挑选阳性克隆，提取表达上清经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹分析。结果显示，TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72h诱导培养后，重组TRBIV MCP的表达量高达60.2μg/ml左右。     

逆流运动及葵花籽油替代鱼油对吉富罗非鱼生长和体成分的影响

选取初始体质量（73．81±9．02）g的雄性吉富罗非鱼（GIFFOreochromisniloticus），分别投喂含100％鱼油（A）、50％葵花籽油＋50％鱼油（B）和100％葵花籽油（C）的饲料，每种饲料设置2个流速运动水平（0BL·s-1、1．5BL·s-1）（BL，体长），共6个试验组合（0A、1．5A、0B、1．5B、0C、1．5C），饲养42d后测定试验鱼生长和体成分变化。结果显示各组合吉富罗非鱼的成活率没有显著性差异（P〉0．05）。1．5B组合的特定生长率（4．96±0．02）％·d-1显著高于其他各组合（P〈0．05）。逆流运动后红肌和白肌蛋白质含量分别最高增加10．25％和7．74％（P〈0．05）。逆流运动对全鱼和肌肉多不饱和脂肪酸（PUFA）含量没有显著影响（P〉0．05），但饲料B组和c组鱼体红肌PUFA含量显著高于A组（P〈0．05），而B组和c组之间则没有显著差异（P〉0．05）。研究结果表明，葵花籽油替代鱼油对吉富罗非鱼的生长和体成分没有显著影响，而逆流运动能够显著提高肌肉蛋白质含量。     

3个群体泥鳅mtDNA D-loop的PCR-RFLP分析

采用PCR-RFLP方法,对采自安徽怀远、河南范县及安徽舒城的3个群体共112尾泥鳅（Misgurnus anguilli-caudatus）线粒体DNA（mtDNA）的D-loop区段进行PCR扩增,使用11种核酸限制性内切酶进行酶切。结果显示,在11种内切酶中,8种有酶切位点,4种存在个体间变异,共产生7种单倍型。怀远、范县和舒城群体的核苷酸多样性指数为0.0033、0.0083、0.0011,单倍型多样性指数分别为0.6048、0.8370、0.2344。范县与怀远、舒城群体间的Rogers遗传距离分别为0.3456和0.6847,怀远和舒城群体间的Rogers遗传距离为0.6326。SspⅠ的酶切类型C组成的单倍型在舒城群体中占87.5%,而在范县群体中为0;同时发现,SspⅠ的酶切类型C、D和XspⅠ的酶切类型B分别组成的单倍型仅在范县群体中存在。     

厦门筼筜湖大型底栖生物调查及其评价

于2007年8月至2008年5月，对筼筜湖外湖深水区（YD-Ⅰ）、内湖（YD-Ⅱ）及干渠浅水区（YD-Ⅲ）3个调查站位进行冬、春、夏、秋4个生物季节的大型底栖生物调查，调查共鉴定大型底栖生物（Macrobenthos）9种，隶属于3门3纲8科9属。其中多毛类种数最多，达5种，双壳类软体动物2种及端足类甲壳动物2种。小头虫（Capitella capitata Fabricius）和腺带刺沙蚕（Neaethes glandicincta Southern）2种多毛类是筼筜湖底栖生物群落的优势种群。筼筜湖年总生物量为59．83g/m^2，总栖息密度为1168个／m^2。三个站位四季总体上内湖（YD-Ⅱ）的多样性指数（H’），均匀度指数（J）丰富度指数（d）和优势度指数（D2）相对较高，外湖（YD-Ⅰ）及干渠浅水区（YD-Ⅲ）的各项生态特征指数明显较低，筼筜湖底栖生物群落组成、结构、时空变化与环境密切相关，湖区生境脆弱。     

大黄鱼EST微卫星标记初步筛选

通过构建大黄鱼性腺线性化cDNA文库，并经测序后获得3535条EST，对其二碱基至六碱基重复序列进行筛选，共发现微卫星位点150个，占EST序列的4．24％；其中包括二碱基重复序列64条，三碱基重复序列80条，四碱基重复序列5条，五碱基重复序列1条；三碱基重复序列是最丰富的重复单元，占53．3％。在这些微卫星序列中，（TG／GT／AC／CA）n形式在二碱基重复中最为常见，（GAG／AGG／GGA／CCT）n形式在三碱基重复序列中最为常见，分别占微卫星序列总数的26％和14％。选取其中的62条微卫星序列进行引物设计、合成与多态性检测，经过PCR扩增，2．0％的琼脂糖凝胶电泳检测，获得呈多态性微卫星引物8对，多态率为12．9％。本研究为开发大黄鱼EST微卫星分子标记和大黄鱼基因编码区微卫星的功能研究提供有价值的信息。     

斑节对虾7个全同胞家系间亲缘关系的微卫星分析

为了斑节对虾（Penaeus monodon）后续育种工作的需要,研究了斑节对虾7个全同胞家系的亲缘关系。从95对微卫星引物中筛选出16对,16个微卫星位点共发现79个等位基因（A）。每个位点的A为2～10个,平均4.9375,有效等位基因（Ne）1.7575～5.3980,平均3.3878,平均杂合度观测值（Ho）0.6679,平均杂合度期望值（He）0.6698。平均多态信息含量（PIC）0.6110。7个家系总近交系数（FIT）0.0099,家系内近交系数（FIS）-0.3725,家系间基因分化系数（FST）0.2709。根据遗传距离采用UPGMA法对7个家系进行聚类,F2和F6家系之间的遗传距离最小聚为一类,与F7家系遗传距离最远。结果表明,家系间基因交流较低,遗传分化程度较高,且很少发生近交,F7家系可以优先考虑与其他家系进行杂交选育。     

东海中部海域蟹类群落结构及其多样性研究

根据2008年春（5月）、夏（8月）、秋（11月）和冬（2009年2月）四季东海区桁杆拖虾M调查资料，分析了该海域蟹类群落结构的季节变化特征。结果显示，该海域四季共捕获蟹类30种，隶属十9科，16属；平均渔获质量为3173．05～9835．67g．网-1；四季调查海域中出现的优势种有双斑好（Charybdis bimaculata）、细点圆趾蟹（Ovalipes punctatus）、银光梭子蟹（Portun msargentatus）和武士蚵（Charybdis miles）4种，其中细点酬趾蟹是常年优势种；物种丰富度指数（D）为0．09～1．41，物种多样性指数（H’）为0.02～1.67，均匀度指数（J）为0．02-1．00。各群落多样性指数各季节间差异不显著（P〉0．05）。