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相似文献
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1.
为探究鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV)复制增殖与谷氨酰胺还原性代谢(reductive glutamine metabolism, RGM)途径的相互作用关系,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cells, CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒拷贝数和RGM途径关键酶mRNA表达水平变化,并通过蛋白免疫印迹方法检测RGM途径关键酶蛋白表达水平变化。结果发现,当培养基缺失谷氨酰胺时SCRV拷贝数降低了99.5%,表明谷氨酰胺是SCRV增殖所必需;而SCRV感染上调CPB细胞RGM途径关键酶的表达,其中异柠檬酸脱氢酶2(isocitratedehy drogenase2,IDH2)上调倍数最大,表明SCRV感染上调了细胞RGM途径中关键酶基因的表达;同时,抑制细胞RGM途径关键酶的表达导致SCRV病毒产量显著下降,表明RGM途径有利于SCRV复制增殖;进一步敲降细胞IDH2基因表达可显著抑制SCRV N蛋白表达,而过表达细胞IDH2基因可显著促进SCRV N蛋白表达,表明IDH2在病毒增殖中具有重要作用。综上所述, SCRV感染可调控CPB细胞RGM通路以满足其自身增殖,其结果可为阐明鳜弹状病毒病致病机制和抗病毒治疗策略提供新的思路。  相似文献   

2.
凋亡是机体为维持内环境稳定而由基因控制的细胞的自主、有序性死亡,与细胞坏死的方式不同。近年来的一些研究显示,水产病原致病过程中可诱导宿主细胞凋亡。文章总结并展望了细菌、病毒和寄生虫诱导水产动物细胞凋亡的研究进展和发展趋势,可为水产病原致病机制的深入研究提供参考。  相似文献   

3.
不同摄食状态下南方鲇幼鱼肠道黏液细胞的量化分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
量化分析了南方鲇(Silurus meridionalis)幼鱼在正常摄食节律下摄食前(S0d)、摄食后64 h(S0d-64h)、饥饿16d(S16d)、饥饿32 d(S32d)以及饥饿后首次恢复摄食64 h(S16d-64h,S32d-64h)肠道各类型黏液细胞的反应特征。结果发现,摄食后肠道各部位黏液细胞总数均有一定程度减少,其中前肠减少最为显著(P<0.05);中肠和后肠II型黏液细胞数量显著减少(P<0.05),中肠的III型黏液细胞数量显著增多(P<0.05);肠腔中黏液增多,黏液细胞呈空泡结构。S16d组和S16d-64h组前肠和中肠的I型细胞数量显著减少(P<0.05),III型细胞数量显著增多(P<0.05)。S32d组和S32d-64h组前肠各类型细胞数量以及黏液细胞总数变化不明显(P>0.05);中肠的II型细胞数量显著增多(P<0.05),IV型细胞数量显著减少(P<0.05);饥饿和恢复摄食后肠各类型黏液细胞数目变化不明显(P>0.05)。研究表明,南方鲇幼鱼肠道黏液细胞的摄食反应明显;饥饿胁迫以及恢复摄食后肠道黏液细胞的反应特征与肠道各段的生理功能相适应;面对营养胁迫时,肠道前段能迅速调节黏液细胞的数目,而后肠基本不变,可能是该鱼应对营养缺乏的保护性适应机制。  相似文献   

4.
细胞凋亡是由一系列相关基因严格调控的细胞程序性死亡,在抵御病原入侵、维持机体内环境稳态等方面有着重要意义。其中细胞色素c从线粒体释放到细胞质中是凋亡开始的关键一步。本研究利用RACE技术首次克隆获得了克氏原螯虾(Procambarus clarkii)细胞色素c基因(PcCytc),全长为897 bp,包括163 bp的5′-UTR、419 bp的3′-UTR和315 bp的开放阅读框,编码104个氨基酸。定量PCR检测结果显示,PcCytc基因在克氏原螯虾的各组织中均有表达,其中在鳃、肠道和肌肉中表达高,在胃中表达最低。WSSV感染实验显示,在病毒感染后PcCytc在肝胰腺、肠道和肌肉组织中的表达水平均出现上调,并在24 h达最高值,约是此时PBS组表达量的2.65、2.07和2.20倍,均存在极显著性差异(P<0.01)。PcCytc基因干扰后,克氏原螯虾体内WSSV病毒拷贝数显著增加(P<0.05),表明PcCytc能够抑制WSSV在克氏原螯虾体内的复制,延迟感染;同时,凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3的表达均发生显著上调或下调(P<0.05)。本研究表明,PcCytc可通过调节凋亡途径抑制WSSV感染,为克氏原螯虾对WSSV感染的免疫反应提供了新的见解。  相似文献   

5.
1938年,Rose确定了8种必需氨基酸后,谷氨酰胺(Olutamine,Gln)一直被认为是非必需氨基酸。近20年来的研究表明,Gln是一种十分重要的具有特殊营养作用的氨基酸。Gln除作为蛋白质、肽的组成氨基酸之一外,它还是体内嘧啶和嘌呤核苷酸、核酸及氨基糖的生物合成前体。同时,Gln是快速增生细胞如肠粘膜细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞、肾小管细胞、成纤维细胞和肿瘤细胞等的主要能源物质。在正常生理状态下,肠上皮细胞生长需要消耗大量的Gln;在病理状能满足需要,血液和组织中的Gln水平降低,此时必须由外补充。Gln对保持和恢复肠道代谢、结构和功…  相似文献   

6.
早期断奶仔猪的谷氨酰胺营养   总被引:2,自引:0,他引:2  
近20年来,非必需氨基酸(NEAA)谷氨酰胺(Gln)因其独特而复杂的生理功能逐渐成为营养学及营养免疫学等学科领域的研究热点。谷氨酰胺在猪乳游离型或蛋白质结合型氨基酸中含量最丰富,断奶后肠细胞谷氨酰胺氧化速率的加快表明谷氨酰胺作为断奶仔猪肠细胞代谢的能量物质非常重要。在NRC(1998)《猪的营养需要》中,谷氨酰胺已经被定义为“条件性必需氨基酸”(NRC,1998)。1谷氨酰胺的营养生理功能谷氨酰胺最重要的生理功能是作为组织间转氨作用的载体。谷氨酰胺是体内蛋白质、辅酶I、嘧啶和嘌呤核苷酸以及氨基糖等合成…  相似文献   

7.
TNBS诱导的草鱼肠炎模型   总被引:1,自引:1,他引:0  
通过建立草鱼肠道炎症模型,为经济鱼类炎症性肠病发病机理研究及药物筛选提供实验平台。于水温28℃条件下,从草鱼肛门插管注入0.25 mL浓度为2.5%的三硝基苯磺酸(TNBS)50%乙醇溶液,诱发草鱼肠炎,注入等体积0.7%生理盐水作为对照,观察草鱼机体损伤程度、肠道组织病理,分析不同肠段组织内髓过氧化物酶(MPO)活性及IL-1β、IL-8和TNF-α等炎性相关基因表达量。病理观察结果显示,实验期间实验鱼未出现死亡现象,经TNBS诱导后出现较严重的肠道炎症,肠灌TNBS后1 d,草鱼肠粘膜严重充血溃烂,肠道组织中出现大量炎性细胞浸润;3 d后出现腹水,损伤部位招募大量炎性细胞,溃疡开始愈合;7 d后炎性细胞逐渐减少,出现杯状细胞,呈慢性炎症;14 d时腹水减少,肠粘膜中杯状细胞丰富,21 d仅有少量炎性细胞,肠道组织基本恢复正常。TNBS诱导后1 d,MPO活性极显著升高,3 d后明显下降,至第7天趋于正常,与组织病理变化趋势一致。TNBS致炎后第1天,IL-1β、IL-8和TNF-α等炎性相关基因表达量极显著升高,3 d时开始下降,3~14 d表达量略高于对照组,急性炎症转为轻微的慢性炎症,21 d时基本恢复到正常水平。结果还显示,不同肠段间的炎症反应存在差异,第三、四肠段明显较第一、二肠段严重。本研究构建的草鱼TNBS肠炎模型稳定,可作为鱼类肠炎病理机制研究和新型药物筛选的良好工具。  相似文献   

8.
刘会娟  姜龙 《畜禽业》2006,(1):8-10
细胞凋亡(apoptosis)是细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后一种主动的、由一些凋亡相关基因相互作用的细胞消亡过程。凋亡的发生具有积极的生物学意义,是维持机体内环境稳定所必需。细胞凋亡与有丝分裂相互协调,共同控制胚胎发育、器官的发育与退化以及免疫、造血等生理过程。  相似文献   

9.
钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在 Ca2+ 刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程, 在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR 基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用 RT-PCR 技术克隆了吉富罗非鱼 CaSR cDNA 全长序列, 利用 qRT-PCR 技术分析了该基因在不同组织中的表达模式, 并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55 mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因 mRNA 的表达变化, 同时利用 ELISA 法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化, 以及通过 HE 和 TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示, 吉富罗非鱼 CaSR cDNA序列全长 3265 bp, 包括 21 bp 5′非编码区、2823 bp 开放阅读框和 421 bp 3′非编码区, 编码 940 个氨基酸。CaSR 基因 mRNA 在不同组织中均有表达, 其中肌肉中表达量最高, 肾脏次之; 组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤, 促进肝细胞凋亡; 与对照组(5.0 mg/L)相比, 缺氧可增强 SOD、CAT 和 GSH-Px 抗氧化酶活性, 上调 CaSR mRNA 的表达, 并引起 Bcl-2、Caspase-3 和 P53 凋亡基因 mRNA 的表达变化。研究结果表明, CaSR 可能通过介导 Ca2+调控细胞凋亡, 从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。  相似文献   

10.
沉默交配型信息调节因子 2同源蛋白 3 (silent mating type information regulation 2 homolog 3, SIRT3)是一种去乙酰化酶, 可调节线粒体氧化代谢。为探讨鳜(Siniperca chuatsi) SIRT3 在传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)感染中的作用, 本研究克隆分析了鳜 SIRT3 基因, 采用 qRT-PCR 和 western blotting 方法检测了病毒感染后 SIRT3 基因的表达, 并探讨了 SIRT3 对细胞代谢酶基因的表达和病毒增殖的影响。结果显示, 鳜 SIRT3 基因的开放阅读框全长 1350 bp, 编码 449 个氨基酸, 在鳜各组织均表达, 其中后肾中表达量最高, 脾脏中表达量较低; ISKNV 感染鳜脑细胞系和鱼体后, SIRT3 表达量均显著升高; 使用 SIRT3 抑制剂 3-TYP (10 μmol/L)和 siRNA 处理细胞后, 谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS)和谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase, GDH)的表达量以及 ISKNV 产量均显著降低; 使用 SIRT3 激动剂 honokiol (7 μmol/L)处理细胞后, 代谢酶表达量和 ISKNV 产量均显著升高。结果表明, ISKNV 感染可通过 SIRT3 诱导宿主细胞谷氨酰胺代谢重编程, 进而促进自身增殖。  相似文献   

11.
12.
A cell line, RTgutGC, was developed from the intestine of Oncorhynchus mykiss. RTgutGC has an epithelial‐like shape, been passaged over 100 times, and cryopreserved successfully. A rainbow trout origin was confirmed by sequencing a 652 bp region of the mitochondrial cytochrome c oxidase I gene. RTgutGC is grown routinely in Leibovitz’s L15 without glutamine supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). Cell viability was evaluated with Alamar blue (AB) for metabolic activity and carboxyfluorescein diacetate acetoxymethyl ester (CFDA AM) for membrane integrity. Viability was unchanged by lipopolysaccharide (LPS) for cultures in FBS. For cultures at low cell densities in L15 without FBS or glutamine, cell viability declined in a LPS dose‐dependent manner, allowing calculation of the concentration causing a 50% decline in viability (EC50). When glutamine was present, the EC50 was increased for both AB and CFDA AM. As the cell density increased, LPS became much less cytotoxic and no EC50 could be calculated for very confluent cultures. Only high‐density cultures had alkaline phosphatase (AP) activity. Thus, glutamine and possibly AP protect against LPS cytotoxicity. RTgutGC should be a useful in vitro tool for studying problems of nutrition and gastrointestinal health in fish.  相似文献   

13.
Oxidative damage repair by glutamine in fish enterocytes   总被引:1,自引:0,他引:1  
Fish intestine is very sensitive to oxidative damage. Repair of damaged enterocytes may be involved to restore normal function of fish intestine. However, studies of fish enterocyte repair are scarce. The present study aimed to investigate the potential repair role of glutamine after a H2O2 challenge. In this study, fish enterocytes were post-treated with graded levels of glutamine (0, 4, 8, 12 and 20 mM of glutamine) after expose to 100 μM H2O2. The basal control cells were kept in the glutamine-free minimum essential medium only. Results showed that the H2O2-induced decreases in 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide optical density, alkaline phosphatase and Na+, K+-ATPase activities were completely restored by subsequent glutamine treatments. In addition, cellular injury (lactate dehydrogenase), lipid peroxidation (malondialdehyde) and protein oxidation (protein carbonyls) caused by H2O2 were reversed by subsequent glutamine treatments. Furthermore, the H2O2-induced decreases in glutathione contents, glutathione reductase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase activities were completely restored by subsequent glutamine treatments. In summary, the present study indicated that glutamine improved the repair activity in fish enterocytes after challenge with H2O2.  相似文献   

14.
为研究氨对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(体重18~25 g)生理指标的影响,将其暴露于30 mmol/L NH_4Cl溶液和空气中0 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,以研究体外和体内氨对其体组织中谷氨酰胺含量、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响。研究发现,氨和空气暴露下,随着暴露时间的延长,大鳞副泥鳅肝脏和肌肉组织中谷氨酰胺含量有明显累积的趋势,脑、肝脏和肠道组织中谷氨酰胺合成酶活性均显著上升。氨和空气暴露显著影响大鳞副泥鳅脑和肠道组织中谷氨酸脱氢酶活性,但对肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并没有显著性影响。结果表明,大鳞副泥鳅可通过体组织中累积谷氨酰胺来应对体外或体内氨浓度的上升,氨暴露和空气暴露可刺激体内谷氨酰胺的合成,将氨转化为无毒性的谷氨酰胺。肠道中谷氨酸脱氢酶活性显著上升,可能在鱼类应对氨氮毒性中,肠道谷氨酸脱氢酶比谷氨酰胺合成酶有更重要的作用。而大鳞副泥鳅肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并不受氨和空气暴露的影响,这可能是由于肝脏组织中转氨酶催化生成了足量的谷氨酸。  相似文献   

15.
为探讨C-Myc表达、谷氨酰胺代谢和神经坏死病毒复制三者之间的关系,本研究首先克隆了斜带石斑鱼鳍条细胞(GF-1)中的C-Myc基因(GF-1-C-Myc),结果显示GF-1-CMyc基因cDNA全长814 bp,开放阅读框(ORF)为285 bp,编码95个氨基酸(aa),有亮氨酸拉链结构域与螺旋-环-螺旋(HLH)结构域。实验表达和纯化了GF-1-C-Myc蛋白,并制备其多克隆抗体。采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)与免疫印迹法(WB)检测了GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒的复制。结果显示,缺乏谷氨酰胺会同时抑制GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒(NNV)的复制,添加谷氨酰胺可同时促进GF-1-C-Myc的表达和NNV的复制;此外,NNV感染可上调GF-1-C-Myc基因的表达,并显著消耗GF-1细胞培养液中的谷氨酰胺。研究表明,GF-1-C-Myc基因可调控宿主谷氨酰胺代谢,从而有利于神经坏死病毒的复制。本结果为防控NNV的感染提供了参考。  相似文献   

16.
以刚上浮哲罗鱼(Hucho taimen)仔鱼(体质量0.11~0.12g)为研究对象,在实验饲料中添加5个水平的谷氨酰胺二肽(Ala-Gln),各处理饲料中Ala-Gln添加量分别为0%(对照组)、0.125%、0.25%、0.50%、0.75%和1.0%,每处理3个重复,每重复1000尾仔鱼。实验期间水温7~10℃,溶氧保持高于7.8mg/L,实验共进行8周。结果表明,添加Ala-Gln能够显著提高哲罗鱼仔鱼肠谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸含量(P0.05),提高肠脂肪酶活性和Na+,K+-ATPase活性(P0.05),同时,丙二醛(MDA)含量显著(P0.05)或极显著降低(P0.01)。结论认为,饵料中适量添加Ala-Gln可以提高哲罗鱼仔鱼肠道Gln和谷氨酸含量,以及消化酶活性和抗氧化能力。  相似文献   

17.
Glutaminase (GLS) is the key enzyme of glutamine (Gln) metabolism and utilization. In this study, a cDNA encoding GLS protein was identified from common carp Cyprinus carpio intestine. The open reading frame of GLS cDNA encodes a polypeptide of 595 amino acids, which shows a high similarity with its zebrafish Danio rerio counterpart. Bioinformatic analysis showed the protein belongs to kidney‐type GLS. The putative protein has glutaminase domain and ankyrin repeats domain, which are highly conserved among vertebrate orthologues. Real‐time quantitative PCR analysis revealed that the abundance of GLS mRNA was the highest in the white muscle, followed by the brain, eyeball and pituitary. Glutaminase was ubiquitously expressed in all intestinal segments of common carp. The activity of GLS did not distribute uniformly along the entire length of the intestine. In primary culture enterocyte, and the expression of GLS mRNA is up‐regulated quickly and effectively by Gln.  相似文献   

18.
To determine the main expression site of major yolk protein (MYP) gene and the mechanisms for adaptation to starvation and refeeding in Strongylocentrotus intermedius, MYP mRNA expression amounts were analysed using a real‐time RT‐PCR. The results showed that MYP could be transcribed in the intestine, stomach, gonad and coelomocytes, and that the intestine was the main expression site of MYP gene in non‐starved urchins. The MYP synthesis in the intestine decreased during 15 days of starvation (67.70%, 52.58% and 71.35% of the control at 5, 10 and 15 days of fasting respectively) and then increased dramatically by different amounts (the peaks were 2.71‐, 12.16‐ and 7.89‐fold that of the control respectively) during the refeeding stages. Nevertheless, the expression amounts in the gonads did not decline, but increased continuously during all periods of fasting (2.66‐, 3.72‐ and 13.19‐fold that of the control at 5, 10 and 15 days of starvation respectively) and during the refeeding stages. At the end of the recovery feeding experiment, the levels reached 9.58‐, 17.48‐ and 100.69‐fold that of the control. These data suggested that the ‘priority’ strategy for the sea urchin is to reduce MYP expression amounts in the intestine if food is limited and to increase MYP gene expression in the gonad to protect reproductive function.  相似文献   

19.
纳米氧化锌对斑马鱼肠组织的氧化损伤   总被引:2,自引:1,他引:1  
刘林  赵群芬  朱帅旗  许峰 《水产学报》2015,39(11):1702-1711
为探讨纳米氧化锌颗粒(ZnO-NPs)对斑马鱼肠组织的损伤及损伤机理,研究了ZnO-NPs对肠组织结构、抗氧化酶活性及相关凋亡基因表达的影响。将斑马鱼分别暴露于浓度为0、0.05、0.1、5、10、25和50 mg/L的ZnO-NPs水体中,在4、24和96 h时,用比色法测定了肠组织中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性;用实时荧光定量法测定了Bcl-2、Baxp53和MDM2 mRNA表达水平的变化;在第7、15和30天时用H.E染色技术观察了肠组织解剖结构变化。与对照组相比,实验组结果显示:斑马鱼肠中的MDA含量均高于对照组;随着时间的延长,组织中GSH-PX和GST活性呈先升高后下降的趋势;肠组织中Bax/Bcl-2和p53的mRNA的表达量均升高,而MDM2的mRNA表达量则随着时间的延长和浓度的增加表现为先降低后升高;H.E染色观察到肠组织结构发生变化,表现为杯状细胞增多,肿胀变形,部分细胞质空泡化,肠中淋巴细胞增多,肠绒毛侵蚀变形,且有时间和浓度依赖性。结果表明:ZnO-NPs能诱导斑马鱼肠组织产生氧化应激作用,使组织中抗氧化酶活性发生变化,诱导肠中细胞凋亡相关基因的表达,并且能对肠组织结构造成损伤。  相似文献   

20.
为了解罗非鱼在碱水环境适应过程中的氨代谢机制,将尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)放在(2、4、6 g/L)碳酸盐(Na HCO3)碱水环境中进行急性胁迫。检测碱胁迫72 h内的血氨浓度,肝、肾、鳃组织及水体、尿液、血液尿素浓度变化,肝、脑、鳃谷氨酰胺(Gln)浓度,肝、脑谷氨酰胺合成酶(GS)活性,肝氨甲酰磷酸合成酶(CPS)活性,不同组织中GS、CPS、谷氨酰胺酶(GLS)的基因表达变化。结果显示:急性胁迫下尼罗罗非鱼血氨浓度上升,于12 h到达峰值。随着血氨升高,各组织中的尿素浓度0~6 h快速升高,CPS活性0~2 h快速升高,基因相对表达量0~24 h升高,表明尿素代谢途径0-6 h内启动。肝谷氨酰胺浓度0~6 h快速升高到达峰值,肝GS活性0~6 h和12~24 h快速升高,组织中GS、GLS基因相对表达量在0~24 h升高,表明谷氨酰胺代谢途径0~6 h内启动。结果表明,在碱胁迫条件下,尼罗罗非鱼在胁迫早期同时启动尿素代谢途径与谷氨酰胺代谢途径共同参与调节血氨浓度。  相似文献   

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