一种RNA球形病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡的直接病原

本刊讯：栉孔扇贝养殖是我国沿海地区主要的支柱性产业。自1997年起，连续几年暴发的大规模死亡症，导致了该产业的巨大损失。中国水科院黄海水产研究所栉孔扇贝养殖课题组自2000年起分别从统计病学、病理学、病原学以及环境理化、生物因子等开展了深入、全面的研究，研究结果证实，一种RNA球形病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡症的直接病原。     

栉孔扇贝病原感染与病害发生关系探讨

利用电镜负染技术检测自然海区养殖和人工感染试验的栉孔扇贝组织提取液,分别发现病毒和类立克次氏体(RLO)两种病原体。动态检测两类病原体感染状况与整个养殖期间栉孔扇贝发病死亡情况,结果表明,养殖期间病毒感染率在80％—100％之间,最大感染强度出现在栉孔扇贝大规模死亡的7、8月份。人工感染病毒的栉孔扇贝,其病毒感染率和感染强度与养殖栉孔扇贝大规模死亡时期相当。而两种情况下栉孔扇贝类立克次氏体的感染率和感染强度均未见明显变化。综合分析表明,病毒可能是造成栉孔扇贝大规模死亡的直接病原体。     

栉孔扇贝类立克次体自然感染调查及人工感染试验

从 1999年 10月至 2 0 0 1年 3月对导致栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)大规模死亡的可疑病原进行了系统调查 ,在栉孔扇贝体内发现 1种细胞内寄生原核生物。根据该原核生物超微形态结构及所形成的包涵体形态特征及染色性质分析 ,初步确定为类立克次体 (Rickettsia likeorganisms ,RLO)。该RLO大小为 (3.6 2 3± 1.4 35 ) μm× (1.343± 0 .32 6 ) μm (n =4 5 ) ,主要寄生在栉孔扇贝的鳃、消化腺的上皮组织中。其感染率和感染强度与水温及栉孔扇贝死亡率呈负相关关系。人工感染试验证明 ,RLO可引起栉孔扇贝感染 ,但不形成大面积明显的组织病理变化。本研究表明 ,RLO对栉孔扇贝不具明显的致病性 ,不是导致栉孔扇贝大规模死亡的主要原因。     

桑沟湾夏季栉孔扇贝养殖笼内水质变化

以2006年桑沟湾筏式养殖的栉孔扇贝为研究对象,测定了网笼内的水质状况及栉孔扇贝的死亡率,探讨了污损生物的可能影响。结果表明,(1)经过7个月的养殖,初始密度低于30个/层的实验组,栉孔扇贝的死亡率低于6%;高密度实验组(40个/层)的死亡率高达27%;(2)网笼内、外的磷酸盐、硅酸盐浓度没有显著性差异,但是,7、8月份的氨氮浓度差异较为明显;(3)同营养盐浓度的变化相比,网笼内、外叶绿素a浓度的变化较大,在9月份,高密度组的网笼内叶绿素a浓度低于0.67mg/m3,食物可能为高密度组扇贝生长、存活的限制因子;(4)8月份,高密度组网笼内的细菌总数显著高于笼外及其他密度组。分析认为,高温期网笼内的水质状况及食物限制可能与养殖栉孔扇贝的死亡有关。     

栉孔扇贝夏季大规模死亡的神经网络预测模型

根据2002年和2003年对山东荣成桑沟湾栉孔扇贝养殖海区的水温、盐度、pH、氨氮浓度、亚硝氮浓度等环境因子和扇贝血清中的蛋白浓度、酸性磷酸酶活力、碱性磷酸酶活力、超氧化物歧化酶活力和过氧化氢酶活力等免疫学指标及栉孔扇贝养殖密度和死亡率的监测数据,运用人工神经网络(artificial neurd network,ANN)的原理和误差反相传播(back propagefion,BP)网络的方法,利用MATLAB软件初步建立养殖栉孔扇贝夏季大规模死亡的BP人工神经网络预测模型.预测模型经过300次的学习训练,误差平方和由67.46下降至0.009 1.该预测模型对未参与模型构建的样本预测的结果与实际监测结果的符合率达到87.5%.首次将人工神经网络与水产动物病害死亡的预测相结合,建立的预测模型具有对数据适应能力强,可适时学习,预测结果准确等突出优点,为水产养殖动物病害死亡程度的预测提供了一个新的研究方法.     

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病原人工感染研究

从发病疫区栉孔扇贝（Chlamys farreri)组织中分离出病毒和立克次体(Rickettsia organism，RO)，对健康栉孔扇贝进行人工感染。结果显示，病毒注射组死亡率为75％，病毒浸浴组死亡率为68．7％；RO注射组死亡率仅为18．7％；灭活RO注射组死亡率为31％；灭活病毒注射和空白对照组死亡率皆为12．5％；病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率有显著差异。而RO注射组与灭活RO注射组、空白对照组死亡率没有显著差异。电镜复检结果显示，发病扇贝的外套膜、鳃、消化腺组织中分布有大量病毒粒子，该病毒粒子的形态特征、病理学特征与自然海区发病扇贝中的病毒粒子特征完全一致。人工感染实验结果证明，栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(A—cute Virus Necrobiotic Virus，AVNV)是栉孔扇贝大规模死亡的直接病原。     

桑沟湾栉孔扇贝大规模死亡原因分析

在对桑沟湾发生的栉孔扇贝大规模死亡现象进行现场调查研究基础上，从种质、生态、环境等方面对死亡原因进行了分析。认为其主要原因是栉孔扇贝生殖盛期能量大量消耗，降低了抵抗外界不利环境和疾病的能力；而种质退化、高温、养殖密度过高、附着生物及疾病也是造成扇贝大规模死亡的诱发原凼。     

两个海区栉孔扇贝感染AVNV的比较分析

急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)是一种能导致栉孔扇贝大规模死亡的DNA病毒,研究通过检测不同养殖模式和不同苗种来源的栉孔扇贝样本携带AVNV的情况,以寻找合理的养殖模式和苗种,降低疾病的发生。以扇贝单一养殖的青岛流清河海区和贝藻间养的荣成桑沟湾海区为采样点,每月(2010年3月—2011年4月)定期采集2个海区野生苗养殖和人工苗养殖的栉孔扇贝样品各10只,共得到扇贝样本480只。取扇贝外套膜组织,提取DNA,采用巢式PCR检测扇贝感染AVNV的情况,并对2个海区2类栉孔扇贝AVNV感染率进行比较。结果显示,在2个海区的2类栉孔扇贝体内均检测到AVNV,流清河海区野生苗和人工苗养殖栉孔扇贝AVNV感染率分别为21.1%和18.9%,桑沟湾海区2类扇贝AVNV感染率分别为11.1%和5.6%;2个海区AVNV感染扇贝均集中在7、8月份,其中,流清河海区最高可达80%,桑沟湾海区最高仅40%。研究表明,贝藻间养和选用人工苗能有效减少AVNV对养殖扇贝的感染,是控制养殖扇贝发病死亡的有效措施。     

栉孔扇贝与虾夷扇贝杂交及子一代的遗传性状

20 0 0～ 2 0 0 3年在山东省长岛增殖站进行了以栉孔扇贝为母本与虾夷扇贝为父本 (正交 )、虾夷扇贝为母本与栉孔扇贝为父本 (反交 )、栉孔扇贝自交、虾夷扇贝自交的苗种培育 ,并在同一海区进行了养殖试验。结果表明 ,水温 15～ 18℃条件下 ,正、反交均可正常受精 ,受精率在 90 %以上 ,与对照组没有明显差别 ;成体的外部形态与母本基本相同 ,是偏向母本类型的异源二倍体 ;正交组在第 2年高水温季节栉孔扇贝出现大量死亡的情况下 ,成活率达 95 % ,生长速度提高 2 3% ,反交组在苗种中间暂养和养殖过程中的成活率比虾夷扇贝提高 16 % ,生长速度未见显著差别 ;正、反交子一代生殖腺发育正常 ,可排放精、卵。试验证明 ,栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂的杂交子一代 ,外部形态虽与栉孔扇贝基本相同 ,但显著提高了栉孔扇贝的生产性能尤其是抗逆能力 ,远缘杂交育种是解决栉孔扇贝大面积死亡的重要途径之一 ,其杂交子一代已经具有生产使用价值。     

栉孔扇贝大规模死亡致病病原的研究

对2000-2002年山东沿海6个疫区患病栉孔扇贝进行电镜观察，在消化腺、外套膜、肾和肠的结缔组织细胞和间质细胞中发现一种球形病毒．并引起相直的病理学变化。该病毒具囊膜，直径为130～170nm，核衣壳直径为90～140nm。病毒分离纯化后．观察到的病毒囊膜表面覆有长20nm的纤突。病毒在细胞质中的囊泡样结构内完成装配，其内未发现包涵体存在。从发病疫区栉孔扇贝组织中分离出病毒毒种对键康扇贝进行人工感染。结果显示，各感染实验组发病扇贝表现出与自然海区发病扇贝相同的临床症状。病毒注射组死r二率为?5％，病毒浸浴组死亡率为68．7％．灭活病毒注射组和空白对照组死亡率皆为12．5％。病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率差异显著。电镜复检结果显示，各感染实验组发病扇贝组织中分布有大量病毒粒子，与自然海区发病扇贝组织所观察到的病毒粒子在形态特征和病理学特征上完全一致。以上结果证明，病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡的直接病原。     

应用DGGE技术研究扇贝养殖海域微型真核浮游生物多样性

为了研究扇贝养殖海区微型真核浮游生物群落多样性,明确养殖扇贝发病时期高丰度微型真核浮游生物种类,探讨微型真核浮游生物与栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)水平传播的可能关系。于2009年和2010年从青岛流清河湾扇贝养殖海区采集了9个月份的海水样品,经25和3 μm的滤膜过滤收集海水中3~25 μm的浮游生物,扩增18S rDNA可变区序列,并利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gelelectrophoresis,DGGE)技术对扩增序列进行分离以分析微型真核浮游生物多样性。结果表明,该养殖海区微型真核生物包括甲藻、纤毛虫、眼虫、定鞭藻、硅藻、盘蜷虫、隐藻、领鞭毛虫、变形虫和Cercozoan,其中甲藻类和纤毛类生物的最高相对丰度分别达41.0%和38.2%,是海区的优势种类。各月份DGGE谱带聚类分析结果表明,2009年6、7、8、9月份浮游生物群落组成较为相似。中肋骨条藻在扇贝发病前后均有分布。结合相关扇贝AVNV已有的研究结果,研究认为中肋骨条藻是AVNV水平传播的参与者之一,但海区中广泛分布的甲藻和纤毛虫与AVNV传播的关系还有必要进一步研究。     

海湾扇贝一种球形病毒的形态发生及细胞病理学观察

2001年3-5月,青岛海区养殖海湾扇贝发生外套膜"糜烂病"并导致约50%亲贝死亡,主要表现为外套膜糜烂;严重者,约2/3的外套膜溃烂呈胶水状.电镜检测发现病贝体内感染有病毒等病原微生物.本文报道了该病毒粒子的形态、发生及宿主细胞由此所产生的细胞病理学变化.成熟的病毒粒子近球形,直径150～180nm,具囊膜,在细胞核附近的溶酶体内发生和增殖.发生初期溶酶体内形成板层髓样结构,随后形成块状、泡状、絮状等多形态的病毒发生基质及具有正方形花样的蛋白质晶格结构.最后,大量的病毒粒子装配形成,填充在溶酶体内.该病毒粒子主要存在于消化盲囊上皮细胞及结缔组织细胞的胞质中.受感染的宿主细胞线粒体肿胀、嵴溶解,内质网肿胀、核糖体脱落,溶酶体数量增多,核膜膨胀、溶解等,大部分细胞器受损.     

Growth,survival and immune activity of scallops,Chlamys farreri Jones et Preston,compared between suspended and bottom culture in Haizhou Bay,China

We examined the growth, survival and immune response of the scallop, Chlamys farreri, during a 1‐year period in deep water of Haizhou Bay. Scallops were cultured using two methods: (1) in lantern nets at a 5 m depth and (2) in a bottom culture system (sleeves) on the seabed at about a 25 m depth. Shell heights, meat dry weight and immune activities in the haemolymph (superoxide dismutase and myeloperoxidase) were measured bimonthly or quarterly from July 2007 to June 2008. Survival was measured at the end of the study and environmental parameters in the experimental layers were monitored during the experiment. The growth and immune activities of scallops were lower when the water temperature was high, which was consistent with the main mortality occurring in summer. The growth and immunity of scallops were higher in the suspended culture than in the bottom culture during the experiment, with the exception of shell growth during the last study period. Survival of scallops in the suspended culture (54.6±12.3%) was significantly lower than that in the bottom culture (86.8±3.5%) at the end of this study. We conclude from our results that the high mortality of C. farreri can be prevented by culturing them in a bottom culture system before November of the first year, and then transferring them to a suspended culture to improve scallop production.     

Photoprotective activity of scallop shell water-extract in keratinocyte cells

ABSTRACT:   The photoprotective activity of the scallop shell water-extract was investigated using cultured rat skin keratinocyte cells. It was found that the scallop shell water-extract protected keratinocyte cells against ultraviolet (UV)-B-induced damage. The scallop shell water-extract had protective effects against hydrogen peroxide (H₂O₂) in skin keratinocyte cells and also showed 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory activity. In addition, the scallop shell water-extract promoted proliferation of keratinocyte cells. The scallop shell water-extract may protect skin keratinocyte cells against UV-B-induced damage through two factors; antioxidant activity and growth-promoting activity in skin keratinocyte cells. These results suggest utilization of the scallop shell water-extract as materials for protecting skin.     

海水网箱养殖水域异养细菌和弧菌的数量动态

1996年4月至1997年5月对浙江奉化、象山海水网箱养殖水域采用MPN法进行异养细菌和弧菌数量的检测。结果表明,细菌数量的变化受外界环境的影响较为明显,7～9月份细菌数量明显高于其它月份,网箱内菌数高于网箱外菌数。从异养细菌和弧菌数量的周年变化看,细菌数量变化与网箱养殖鱼类疾病的发生有密切关系。菌数的高峰期也是鱼病的频繁发生期。利用检测养殖水域异养细菌和弧菌的数量可预测鱼病的发生。     

病毒感染对栉孔扇贝血淋巴中过氧化氢酶和过氧化物酶活力的影响

用从病贝体内分离的非包涵体球形病毒感染栉孔扇贝,采用分光光度技术,分别于6,24,72h,测定栉孔扇贝血清和血细胞中过氧化氢酶(CAT)活力和过氧化物酶(POD)活力。结果表明,感染病毒后,血清中CAT活力在6,24,72h时,实验组均高于对照组,6h时差异极显著,24h时差异显著,72h时差异不显著;血细胞中CAT活力在6,24,72h时,实验组均高于对照组,6h和24h时差异极显著,72h时差异不显著。血清和血细胞中POD活力在6h和24h时,实验组均高于对照组,且均差异极显著。说明病毒感染后栉孔扇贝血淋巴中CAT和POD的活力增强。     

Comparison of shell strength in wild and cultured scallops (Pecten maximus)

Shell strength development of the scallop Pecten maximus collected from wild stocks and from suspended cultures was described over the culture period when most of the growth takes place (20–110 mm shell height). Shell strength, shell height and shell thickness were determined in scallops of age groups 2–5 years. Wild and cultured scallops showed a strong divergence in shell strength development in scallops older than age group 3, which was not reflected in the concurrent development of shell height and thickness, indicating that factors other than shell height and shell thickness explain the differences in observed shell strength. In wild scallops, shell height, shell thickness and age accounted for about 65% of the variation in shell strength, while the same variables accounted for about 30% in cultured scallops. Wild scallops had stronger shells than the cultured scallops of the same size (53–68 mm shell height) grown at the same site, suggesting that factors related to suspended culture could explain the weak shells in cultured scallops. The results indicate that conditions related to suspended culture can have a negative impact on shell strength development in P. maximus. As the shell is the primary protection against decapod predation in scallops, a better understanding of what affects the shell strength is of importance for the development of release strategies in bottom culture of P. maximus.     

间接免疫荧光法检测栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒

用纯化栉孔扇贝(Chlamys farrei)急性病毒性坏死症病毒(AVNV)免疫兔子,以兔抗血清为一抗,荧光标记的羊抗兔抗体为二抗,采用冰冻切片技术,建立了栉孔扇贝AVNV的间接免疫荧光检测方法。用该方法分析栉孔扇贝和海湾扇贝(Argopecten irradians)体内AVNV感染强度,并对感染率进行统计。结果表明,栉孔扇贝的肾脏、肝胰腺中,AVNV阳性信号最强,呈现中度到重度感染,其AVNV感染率100％。鳃丝、性腺及闭壳肌中未检测到阳性信号。在海湾扇贝的肝胰腺及肾中AVNV的感染率也较高。提示AVNV感染扇贝的靶器官主要是肾脏、肝胰腺。对与栉孔扇贝同一海区养殖的海湾扇贝在栉孔扇贝发病期间存活率较高的原因进行了讨论。