31种中草药及其复方对维氏气单胞菌体外抑菌研究

为筛选对昆明裂腹鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)有抑菌作用的中草药及复方,本研究通过煎煮法制备31种常见中草药水提取物,以牛津杯法测定各味中草药对该菌的抑菌圈直径,采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);选取体外抗菌活性较好的6种中草药,应用棋盘法进行15组二联药方的部分抑菌浓度指数(FIC)试验;按正交设计表配伍25组复方,同样进行药敏试验。结果显示,31种中草药中,五倍子、地榆、诃子、苏木、黄芩、黄连等6种中草药抑菌效果最好;15组联用药方均未发生拮抗作用,其中以五倍子+地榆、诃子+黄芩联用效果最好,FIC分别为0.31、0.50,表现为协同作用;综合复方中草药的抑菌作用,复方F16(五倍子∶地榆∶诃子∶苏木∶黄芩∶黄连=4∶4∶2∶5∶3∶1)的抑菌效果最佳,抑菌圈直径达23.2 mm, MIC与MBC分别为0.98 mg/mL、1.95 mg/mL,可作为昆明裂腹鱼源维氏气单胞菌抑菌药物的首选配伍组合。     

24味中草药对舌鳎源嗜水气单胞菌的体外抑菌效果

采用水提法提取诃子、知母等24味中草药的有效成分,用琼脂平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定这些中草药对舌鳎嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC),以筛选出体外抑菌效果较好的中草药。结果表明,诃子、夏枯草、青皮、苏木4种药物抑菌效果较好,其中诃子、夏枯草的抑菌效果最好,抑菌圈直径平均25mm以上,MIC为31.25mg/mL。本结果为开发中草药相关产品以及防治由嗜水气单胞菌引起的细菌性疾病提供了参考。     

21种中草药对嗜水气单胞菌的试管内抑菌作用

在试管内测定了21睛种中草药对嗜水气单胞菌8个菌株的抑菌作用。结果表明五倍子、辣蓼、大黄．黄芩、乌梅抑菌作用明显.最小抑菌浓度（MIC）小于10ul／mI;黄柏、菖蒲、金银花、龙胆草有一定抑菌效果，NIC10-50ul／mI;而连翘、板兰根、马齿苋、射干、穿心莲、鱼腥草，白头翁、蒲公英,大青叶,桑叶、车前草和艾抑菌作用不明显。MIC均大于50ul／ml，     

大鲵温和气单胞菌的药物敏感性试验

为研究从患病大鲵内脏组织中分离出的温和气单胞菌对药物的敏感性,采用奈替米星等20种西药和五倍子等22味单方中草药及由单方组合而成的57味复方药进行了体外抑菌试验。结果表明:该菌对奈替米星等16种西药敏感,其抑菌圈直径为21.50~36.75 mm;对五倍子等11味中草药高度敏感,抑菌圈直径为20.20~37.25 mm;其中,抑菌效果位居前6位的五倍子、苦地丁、乌梅、五味子、诃子、黄芩等6味单方中草药(1 g/m L)的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.98、7.81、7.81、7.81、15.63、15.63 mg/m L,最小杀菌浓度(MBC)分别为1.95、15.63、15.63、15.63、31.25、31.25 mg/m L;对由该6味单方中草药按相同质量分数组成的54种复方药高度敏感,其中敏感性较强的复方1(五倍子、苦地丁、五味子、诃子、黄芩)、复方2(五倍子、苦地丁)、复方3(五倍子、苦地丁、黄芩)和复方4(五倍子、诃子、黄芩)的MIC分别为0.24、0.49、1.95、1.95 mg/m L,MBC分别为0.49、0.98、3.91、3.91 mg/m L。     

常用中草药对4种病原弧菌体外抗菌效果的研究

采用琼脂扩散法(打孔法)测定了五倍子等18种中草药对鳗弧菌、副溶血弧菌、河口弧菌及霍乱弧菌等4种病原弧菌的抑制作用。结果表明,五倍子、苏木、地锦草、石榴皮、黄芩、虎杖和山楂等7种中草药对病原弧菌具有较好的抑菌效果,而金银花等11种中草药抑菌作用较弱;同时采用试管连续稀释法,测定了五倍子等抑菌效果较强的7种中草药对4种病原弧菌的抑菌和杀菌浓度。结果表明,苏木、五倍子、地锦草和石榴皮4种中药具有较好的抑菌和杀菌作用,此4种中药对鳗弧菌、副溶血弧菌、河口弧菌及霍乱弧菌等4种病原弧菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.78～6.25mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)为3.12～12.5mg/ml。     

100种中草药体外抑杀嗜水气单胞菌的药效研究

用琼脂扩散法(打孔法)测定了诃子等100种中草药对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的抑制作用,并用二倍稀释法测定抑菌效果较强的48种中草药对嗜水气单胞菌的最小抑菌(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示∶大部分中草药对嗜水气单胞菌有抑制作用,诃子和秦皮的抑杀效果最好,其抑菌圈直径达20 mm以上,MIC和MBC相同,都为3.91 mg/mL(诃子)和7.81 mg/mL(秦皮);红藤、仙鹤草和覆盆子等13种中草药有中等强度的抑菌和杀菌效果;雷公藤等33种中草药抑菌作用弱;而牛蒡子等52种中草药无抑菌作用。     

中草药对牙鲆病原迟钝爱德华氏菌的体外抑制作用研究

用倍比稀释法测定了30种中草药对牙鲆病原迟钝爱德华氏菌(LN031012-8,TH030908-5)菌株的体外抗菌活性。试验结果表明,五倍子、诃子、黄芩、秦皮和红藤的抑菌作用明显,最小抑菌浓度(MIC)<12.5 mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)<50 mg/ml;丁香、穿心莲、虎杖、夏枯草等有一定的抑菌作用,MIC为50~100 mg/ml;而茵陈、鱼腥草、金银花、大青叶等的抑菌作用不明显,MIC均>100 mg/ml;五倍子、地榆、野菊花、马齿苋等中草药的体外抗菌活性表现了株间差异。     

中草药及其配伍对嗜水气单胞菌的抑菌作用

采用二倍稀释法测定了86种中草药对嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并采用正交试验法研究了对嗜水气单胞菌具有较强抑制作用的中草药配伍。结果表明,五倍子、五味子和乌梅对嗜水气单胞菌的抑制作用最强,最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为12.5mg/ml,可作为防治水产养殖动物嗜水气单胞菌病害的首选中草药。正交试验结果表明,儿茶、五倍子、五味子和乌梅4种药分别以4∶2∶4∶1和1∶2∶2∶4的比例配伍时对嗜水气单胞菌具有最佳抑菌和杀菌作用。     

5种海洋致病弧菌对34种中草药敏感性的测定

采用纸片扩散(K-B)法,测试了溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌对34种中草药的敏感性,结果表明:试验菌株对中草药乌梅、黄连、木瓜、五味子、五倍子、马齿苋、白头翁、地榆、公丁香、大黄具有较高的敏感性。采用倍比稀释法,测定10种敏感性较好的中草药对5种海洋致病弧菌的抑菌试验,并测定了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:五倍子抑菌和杀菌能力最强,五倍子对溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC均为1.56 mg/ml,对哈氏弧菌的MIC和MBC为3.125 mg/ml;其次是黄连,对溶藻弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC分别为3.125 mg/ml和6.25 mg/ml,对哈氏弧菌、副溶血弧菌的MIC和MBC分别为6.25 mg/ml和12.5 mg/ml;乌梅对5种弧菌有相同的抑菌和杀菌作用,其MIC和MBC均为12.5 mg/ml。最终确定五倍子和黄连可以作为防治水产养殖动物弧菌病的首选中草药药物。     

黄芩对7种水产动物病原菌的体外抑菌活性研究

采用纸片扩散法和二倍稀释法,利用黄芩水提液对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、温和气单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌进行最低抑菌质量浓度和最低杀菌浓度的测定。试验结果表明,黄芩对鳗弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑菌效果,最低抑菌质量浓度均为15.63 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为31.25、15.63、31.25、31.25 mg/ml;黄芩对大肠杆菌、温和气单胞菌和哈维氏弧菌的抑菌效果弱于副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、金黄色葡萄球菌,最低抑菌质量浓度分别为31.25、62.51、31.25 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为62.5、62.5、125 mg/ml。     

对虾发光病生物防治技术的初步研究

本文探讨了应用哈维氏弧菌噬菌体对致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的特异性噬菌作用防治对虾发光病的必要性和可行性.实验表明:从对虾育苗场分离的对虾发光病致病菌哈维氏弧菌对46种抗菌药物的敏感性逐年减弱,1993年尚有28种敏感药物,其中中度以上敏感的有12种;而到了2003年敏感药物则只剩下9种,中度敏感的仅为头孢三嗪和壮观霉素2种,在养殖生产中常用的几种药物几乎都变为不敏感.在试验水体中添加该噬菌体可使哈维氏弧菌的数量减少2～3个数量级,可以相对减少对虾发光病的发生和虾苗的死亡.实验还显示试验虾苗的死亡与噬菌体的效价高低无关,而与加入的噬菌体上清液的有机质含量有关.     

中华绒螯蟹“腹水病”及“抖抖病”并发病病原的研究

于1998～1999年对中华绒螯蟹主要细菌性疾病“腹水病”、“抖抖病”并发病病原进行研究。结果表明经细菌学鉴定6株病原菌，其中5株为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)，1株为拟态弧菌(Vibrio mimicus),用细菌人工感染蟹，其LD     

Production of bactericidal substances by a marine vibrio isolated from cultures of the scallop Argopecten purpuratus

A marine vibrio (strain C33) having inhibitory effects on the growth of the pathogen Vibrio anguillarum-VAR was isolated from seawater used in mass culture of the north-Chilean scallop Argopecten purpuratus. This bacterial isolate demonstrated broad inhibitory activity on several bacterial strains, including some pathogenic vibrios. Ethyl acetate extracts of extracellular products of strain C33 were separated by thin layer chromatography (TLC), and three fractions thus obtained were found to have antimicrobial activity when tested using microplate bioassays. One of the fractions (A2) having marked antimicrobial activity, was further purified using TLC and analyzed by IR spectrophotometry and NMR'H and was characterized on a preliminary basis as an aliphatic hydroxyl ether. This compound demonstrated bacteriostatic activity against the important marine pathogens Vibrio parahaemolyticus and V. splendidus, and as discussed in the paper, may be useful in developing natural strategies for the control of pathogens in mass cultures of Argopecten purpuratus and possibly other molluscs affected by these bacteria.     

150种中草药体外抑杀维氏气单胞菌的药效研究

采用平板打孔法测定了五倍子(Galla chinensis)等150种中草药对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的体外抑制作用,并采用二倍稀释法测定具有良好抑菌活性的54种中草药对维氏气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:五倍子(G.chinensis)、石榴(Punica granatum)皮、地榆(Sanguisorba officinalis)和乌梅(Prunnus mume)的抑菌效果最好,抑菌圈直径在20 mm以上,其中,五倍子(G.chinensis)抑菌作用和杀菌作用最强,MIC和MBC均为1.95 mg/m L;地榆(S.officinalis)次之,MIC和MBC分别为1.95 mg/m L和3.91mg/m L;虎杖(Polygonum cuspidatum)、黄柏(Phellodendron chinense)、香薷(Mosla chinensis)等16种中草药具有中等抑菌效果;木瓜(Chaenomeles sinensis)、萹蓄(P.aviculare)、桉树(P.aviculare)叶等34种中草药抑菌效果较弱;海风(Piper kadsura)藤、柴胡(Bupleurum chinense)、茵陈(Artemisia scoparia)等96种中草药无抑菌作用。     

栉孔扇贝血清中的免疫因子的研究↑（*）

本文对栉孔扇贝血清的细菌凝集活性、抑菌活性和溶菌活性进行研究。选用２４种细菌和真菌进行凝集试验，发现栉孔扇贝血清能够对金黄色葡萄球菌和代远洋弧菌产生凝集作用，血清的细菌凝集作用经数种细菌刺激没有发生改变，说明这种凝集作用是不可诱导的。栉孔扇贝的血清对某些细菌的生长有一定的抑制作用，但在体外彻底杀灭细菌的效果极差，经大肠杆菌和副溶血弧菌刺激后，抑菌效果基本不变。栉孔扇贝血清还具有一定的溶菌作用，而且大肠杆菌的刺激可以明显提高这种溶菌作用。     

致病性哈维氏弧菌溶血素基因克隆及其检测

从山东沿海的发病鲈鱼（Lateolabrax japonicus）分离到1株致病性哈维氏弧菌（Vibrio harveyi），从该菌的染色体DNA扩增出一条长约1．4kb的特异性片段。DNA序列分析表明，该克隆片段含有完整的1254bp溶血素基因，该溶血素基因与哈维氏弧菌VIB645的溶血素基因VhhA和VhhB的相似性分别为99．0％和98．5％；与副溶血弧菌（V．parahaemolyticus）热稳定性溶血素基因（TDH）的相似性为74．5％；与拟态弧菌（V．mimicus）、创伤弧菌（V．vulnificus）、霍乱弧菌（V．chderae）磷脂酶基因的序列相似性分别为57．4％、59．2％、53．0％；与最小弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、霍氏弧菌（V．hollisae）、河流弧菌（V．tguvialis）、鳗弧菌（V．anguillarum）的溶血素基因的相似性仅为19．9％～24．8％。根据溶血素基因的保守区段，设计了1对特异引物。分析表明，该引物能特异检测哈维氏弧菌。其可检测的DNA最小量为0．001ng。用该方法对55株不同来源的患病鱼分离的疑似病原菌进行检测，结果检出8株哈维氏弧菌，检出率为14．55％，从健康动物中检出数占所检弧菌数的6．25％，海洋环境为10．53％，海水养殖环境为26．53％，表明哈维氏弧菌在不同的海水环境及健康海洋动物中普遍存在，在养殖水体中的数量高于其他海水环境。     

单过硫酸氢钾粉对5种水产常见致病菌的体内外抑菌作用

研究了单过硫酸氢钾粉对5种水产常见致病菌的体内、外抑菌作用,测定了体外最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及以保护率为指标的体内抑菌效果。结果表明,体外抑菌实验中,单过硫酸氢钾粉对爱德华氏菌Edwardsiella、温和气单胞菌Aeromonas sobria、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tard、荧光假单胞菌Psudomonas fluorescens均有明显的抑制作用,其对5种菌的MIC分别为1、0.25、0.125、0.25、0.5μg/ml;MBC与MIC相同。而体内抑菌实验中,随着单过硫酸氢钾粉浓度的增加,由5种致病菌引起鲫鱼的死亡率逐步降低。统计分析发现,使用0.25μg/ml单过硫酸氢钾粉药浴鲫鱼,即可对由5种致病菌引起的鲫鱼病害有治疗的作用。     

Attachment of Vibrio pathogens to cells of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum)

Abstract. The attachment of Vibrio pathogens to cells of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), was studied by use of species-specific monoclonal antibodies and indirect FITC- immunofluorescence microscopy. Vibrio anguillarum, V. ordalii and V. parahaemolyticus attached to cultured cells of rainbow trout gonads, various tissues of cryostat sections of whole fish, and smears of gills, intestine, buccal mucosa and skin. The attachment was inhibited by prior incubation of bacteria with monoclonal antibodies at titres of 1:32, or less. Other Vibrio pathogens used in this study did not attach to any trout cells. The research provides approaches to study the mechanisms of bacterial attachment in the onset of Vibrio infections.