河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用

病原菌对粘液的趋化作用在其对粘液层定植过程中起着重要作用，趋化作用是病原菌的毒力机制之一。为了解病原性河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用，本文采用改良的毛细管法研究了细菌浓度、孵育时间、孵育温度、pH值、NaCl浓度、碳水化合物等对河流弧菌趋化作用的影响。试验结果表明：在较低浓度下，河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化量随着菌浓度的升高而增大；在室温下河流弧菌的趋化量随着孵育时间的延长而增加，60 min趋于饱和；孵育温度在4～15 ℃范围内趋化作用随温度升高而增强，15 ℃时达最大值；pH值为8时细菌的趋化性最强；NaCl浓度超过0.8 %,河流弧菌的趋化性随着浓度升高而显著减弱（P<0.05）；7种碳水化合物中甘露醇、乳糖、甘露糖能够极显著地促进河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用（P<0.01）。以上结果说明：牙鲆表皮粘液对河流弧菌有较强的趋化作用，该趋化作用受环境因子的影响较大；本文所揭示的河流弧菌趋化特性将对养殖牙鲆疾病防治提供有价值的参考。     

转座子mini-Tn10介导的运动突变对溶藻弧菌毒力的影响

采用转座子mini-Tn10/Km构建了致病性溶藻弧菌的突变库,采用半固体双层平板初筛到73株运动缺陷突变株,初筛的突变株纯化及重复筛选后获得运动性缺陷表型稳定的突变株ND-01MM,Southern鉴定确定其为单位点插入。野生型菌株ND-01和运动缺陷突变株ND-01MM对致病性溶藻弧菌的天然宿主大黄鱼粘液的趋化、粘附以及在大黄鱼吞噬细胞内存活能力等生理功能的比较研究发现,溶藻弧菌运动缺陷后趋化及粘附能力均极显著下降(P<0.01),但在吞噬细胞内的存活能力则与野生型菌株差异不显著(P>0.05)。采用腹腔注射和浸泡两种方式感染大黄鱼,结果发现运动缺陷对浸泡感染的影响较为明显,但对腹腔注射的感染方式影响不大。     

人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能的影响

为了解大黄鱼在抗溶藻弧菌感染时免疫功能的变化规律，将160尾健康大黄鱼分为感染组和对照组，通过腹腔分别注射0.2 mL浓度为2×107 CFU·mL-1的溶藻弧菌和灭菌生理盐水，在注射0，1，3，7，11，15，19 d后从两组各取6尾大黄鱼，尾静脉取血，进行外周血的血相、NBT阳性细胞数、血清抗菌活力、抗体效价等免疫学指标的测定。结果显示：在人工感染的初期，感染组大黄鱼外周血的红细胞、白细胞、淋巴细胞和NBT阳性细胞的数量及血清抗菌活力等指标均较对照组有显著提高；在注射后1 d外周血粒细胞的数量显著低于对照组；抗体效价在7 d开始增加，15 d达到峰值，且用间接ELISA和试管凝集两种方法所得结果具有非常高的同步性。结果表明：在感染溶藻弧菌后，大黄鱼能通过红细胞和白细胞增殖、释放抗菌物质、产生特异性抗体等方式提高其对溶藻弧菌的免疫力；在感染的早期阶段非特异性免疫因子起主要作用，在感染后期阶段特异性免疫因子起重要作用；NBT阳性细胞数可以作为细菌感染的指标。图2表1参24     

环境因子对星斑川鲽呼吸频率的影响

研究了温度、盐度与pH对星斑川鲽呼吸频率的影响。结果显示：在适宜温度范围星斑川鲽呼吸频率随温度的升高而加快，在4—26℃范围内，其呼吸频率V冉温度T基本呈线性关系：Vf=1．8168T＋27．23，R=0．9376；在盐度5—31范围内其呼吸频率变动幅度小，呼吸频率的改变量只有10次，分，为广盐性鱼类；高pH（10．15）和低pH（3．0）情况下，星斑川鲽的鳃盖张合大，鳃盖外缘外翘；30分钟后表现出不适应，上下窜动，而在pH=3．0中的鱼1小时50分钟后全部死亡，可见星斑川鲽耐酸性不如耐碱性。     

养殖大黄鱼低温弧菌病病原的研究

浙江沿海深水网箱养殖大黄鱼冬天发生大量死亡，从病鱼体内分离出致病力较强的细菌GYC0227。人工感染试验证实这株菌为大黄鱼的病原菌。对细菌进行了形态、生理生化特性的测定，并进行了16S rRNA分子鉴定。PCR扩增获得了GYC0227菌株大小约1．5kb的16S rDNA部分基因片段，产物经回收纯化，克隆到pMD18-T载体，转化大肠杆菌TG1，对阳性克隆子进行酶切及PCR鉴定，并测序，将测定的序列递交NCBI进行BLAET同源序列比对，与溶藻弧菌的标准菌株的16S rDNA具有96％的同源性。结合菌株的生理生化特性，GYCD227菌株属于溶藻弧菌。该菌适应于低温生长，生长温度范围为7—25℃，并测定了其对14种药物的敏感性。     

大黄鱼养殖疾病及其治疗

1 细菌性疾病主要是弧菌病,病原为副溶血弧菌（vibrio　para-hemolyticus）或溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）,它们均为弧菌科,弧菌属。两者症状和防治方法都比较相似。副溶血弧菌引起的症状为:患病初期,病鱼食欲下降,游动迟缓,平衡失调,体表皮肤有淤斑,鳃浅红色,腹部膨大,肛门红肿;解剖濒死病鱼发现肝、脾、肾、肠均充血,肝脏肿大呈土黄色,肠道内有黄色粘液。治疗:根据大黄鱼的发病情况,在饵料中掺入庆大霉素或土霉素、卡那霉素、丙氟哌酸（环丙沙星）等抗菌药物,用量为投饵量的1％～3％,连续投饵5天。待大黄鱼食欲     

大菱鲆(Scophthalmus maximus)PRL基因、Na+-K+-ATPase a1基因对盐度胁迫的响应

采用荧光定量PCR技术对不同盐度胁迫下各时间点大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼肠、鳃中催乳素(PRL)基因和Na+-K+-ATPase a1两种基因的表达量进行检测。以盐度30为对照组，盐度5、10、40和50为实验组进行数据分析。结果显示，两种基因在两种组织中均有表达，且基因的表达量具有组织和时间特异性。肠组织PRL、Na+-K+-ATPase a1基因的表达量，在盐度50和5条件下，随胁迫时间的延长呈先升高后降低的变化趋势；鳃组织PRL基因表达量，在盐度50和盐度5条件下，随胁迫时间延长先升高后降低，而Na+-K+-ATPase a1基因表达量在低盐条件下(盐度5)没有显著变化，在高盐条件下(盐度50)随时间延长呈现先降低后升高的变化趋势。在肠组织中，两种基因存在极显著的协同作用，随着盐度的升高，两种基因的表达量都呈现先升高后降低的趋势，且相关系数均接近于1；在鳃组织中，在10–40盐度范围内，两种基因的表达存在明显的拮抗作用，当PRL基因的表达量呈现升高(或下降)趋势时，Na+-K+-ATPase a1基因的表达量呈现下降(或升高)趋势，且两种基因的相关系数均为负值。研究表明，PRL具有抑制Na+/K+-ATP酶活性的作用，为今后盐度胁迫分子调控机理研究提供理论依据。     

致病性溶藻弧菌生物膜形成特性研究

采用改良的微孔板法研究静置培养条件下致病性溶藻弧菌ND-01在酶标板上成膜情况。结果显示,溶藻弧菌的生物膜的OD590在16h达到峰值后,随培养时间延长出现下降;在102～108cfu/mL范围内,不同的初始菌密度对生物膜的OD590影响并不显著;NaCl质量分数为4.5%时,所形成生物膜的OD590最高;30℃,溶藻弧菌的生物膜OD590显著高于其他温度组(P0.05);在胰蛋白胨大豆肉汤培养液中加入质量分数1.5%的CaCl2,能够显著促进生物膜形成,而加入MgCl2对于生物膜的影响则不显著;经过大黄鱼表皮黏液包被后,96孔板中生物膜的OD590显著高于其他部位组织提取液包被组(P0.01)。致病性溶藻弧菌ND-01能够在聚苯乙烯材料的96孔酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,且其生物膜的形成与多种环境因素有着密切关系。     

3种致病弧菌感染对大黄鱼血液生化指标的影响

溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、哈维弧菌Vibrio harveyi、副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus是引起大黄鱼溃疡病的3种主要致病菌。本研究将试验大黄鱼随机分成4组,分别腹腔注射0.2 ml的哈维弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和灭菌生理盐水,在感染20d中的不同时间采样,通过检测血清糖类、脂类及蛋白质代谢产物含量,血清蛋白质含量及酶活性,血清电解质含量等有关血液生化指标来比较3种致病弧菌对大黄鱼血液生化指标的影响。结果表明,大黄鱼血液生化指标的变化主要发生在感染后的1～4d,主要表现为总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、K、Fe显著升高(P<0.05),尿素氮、肌酐、血糖、胆固醇、Na、Cl显著降低(P<0.05),甘油三酯、P、Ca、Mg无显著变化(P>0.05),说明致病菌感染对大黄鱼组织器官的生理机能和代谢水平均产生了影响。反映鱼体受感染后从应激反应发生至生化指标变化主要出现在致病菌感染前期,提示血清生化指标的检测可以作为大黄鱼“溃疡病”早期感染的监测指标。     

养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是浙江省养殖大黄鱼(Pseudnosciaena crocea)弧菌病的主要致病菌.本研究选择针对溶藻弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因,哈维氏弧菌的部分ToxR基因的特异性,优化设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,建立了一种检测致病性弧菌的多重PCR检测方法.经过琼脂糖凝胶电泳后的条带分析判断,可以在一个PCR管中同时成功地检测这3种病原细菌,含溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌3种致病弧菌核酸的阳性对照样品分别扩增出大小为737 hp、382 bp和271 bp的预期产物,其灵敏度是102～102 CFU/mL.将该方法应用于检测人工感染后的养殖大黄鱼病鱼肝脏和肾脏,结果在6份组织样本中,5份检出原始感染菌株,与API 20E鉴定结果相符;对弧菌病流行季节采集的未发病的16份养殖大黄鱼组织样本和16份水体样本进行抽检,结果在1份大黄鱼组织样本中检出哈维氏弧菌,7份水体样本中检出这3种弧菌中的1种或2种,鉴定结果与API 20E鉴定结果符合率为93.75%.说明该方法不仅可以检测发病鱼,还可以检测无病症带菌大黄鱼以及带菌水样,且说明海洋水体中存在着大黄鱼弧菌病的致病菌.结果说明,多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,可以缩短检测时间,降低检测成本,该方法的建立对养殖大黄鱼弧菌病的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义.     

Influence of the gametogenic cycle on the biochemical composition of the ovary of the great scallop

The oogenic cycle and biochemical composition of the ovary of raft-cultured great scallop (Pecten maximus) were studied during the period April 1990–July 1991. The ovary condition index (FGI) and stereological studies showed the existence of two principal spawning periods, winter and late spring-early summer. No sexual resting period was found. Oocyte lysis was high throughout the year. Ovarian lipid levels displayed a clear seasonal pattern linked to the gametogenic cycle. Total lipid (TL, 16–21% dry weight), acylglycerol (AG, 20–65% TL) and free sterol (FS, 2.8–6.4% TL) levels were, generally, higher in the ripe ovary and a decrease coincided with spawning. Protein (59–63% dry weight), glycogen (<3% dry weight) and phospholipid (PL, 26–35% TL) levels showed no clear seasonal trend. The TL and AG were a good index of ovarian sexual maturity. The TL % of dry weight) correlated well with the female gonad condition index (r _s = 0.779, p < 0.001), and AG (% f TL) correlated well with the mean oocyte diameter (r _s = 0.630, p < 0.01) and the female gonad condition index (r _s = 0.443, p < 0.05).     

沸石在河蟹育苗中的应用

在河蟹育苗中,利用沸石作水质净化剂．从幼体蚤状Ⅲ期始,每天在3个幼体培育池共90m3水体中投放200×10-6沸石。结果试验组每m3水体大眼幼体出苗量增加54g,效果明显。试验证实,投放沸石能吸附水中有机污染物,降解氨氮,净化水质,促进幼体正常变态发育。     

温度对三疣梭子蟹行为的影响

描述了三疣梭子蟹的摄食、领域、防御、攻击及清洁行为。三疣梭子蟹在水温12℃以上摄食行为加强,领域与攻防行为也很明显,攻防主要其螯肢。三疣梭子蟹的清洁行为比较复杂,在光强度变化较大时较为明显,一般要持续15~20min。随着温度的降低,三疣梭子蟹的摄食、攻防、领域行为都明显减弱。     

强化渔业安全保护渔民利益--学习《辽宁省海洋渔业安全管理条例》

辽宁是重要渔业省份之一，海岸线较长，渔船渔港众多，全省沿海25个县(市、区)拥有渔民20余万人，各类渔船3万多艘。长期以来，因海上生产条件差，环境极其恶劣，渔船比较分散，管理难度越来越大，渔业安全生产形势十分严峻，各类渔船海损事故频繁发生，给渔民造成极大损失，     

饲料中沙门氏菌的污染现状及检测方法探究

沙门氏菌是一类革兰氏阴性、长有鞭毛的兼性需氧菌,多数存在于动物的排泄物中,其引起食物中毒的发病率极高.本文对沙门氏菌的三种主要检测方法:微生物学检测法、酶联免疫吸附法、PCR快速检测技术的实验方法、注意事项以及优缺点进行探究,对于更为准确快速鉴定沙门氏菌,防止沙门氏菌进一步蔓延具有一定的意义.     

我国海洋渔业资源管理中适用预警原则的探讨

海洋生物资源的可持续开发和利用已成为全球海洋生物资源管理的重心。预警原则作为一种新颖的环境资源管理手段，其对海洋生物资源养护的有效性已为一些国际协定和一些国家的国内立法所确认。目前我国海洋生物资源管理实践和相关法规并没有明确采用预警原则。因而，针对我国近海生物资源养护不利的现状，我国有必要增订相关立法，将预警原则规定为我国海洋生物资源管理的基本原则，并根据我国各海域的具体情况，有针对性的适用预警原则，以顺应全球海洋生物资源养护的大趋势。     

利用渔港改造,加快推进游艇公共码头建设步伐

历史上形成的渔港产业体系与传统服务格局,已远不能满足渔港产业延伸要求,更与当今快速增长的新兴海洋休闲旅游发展需求及城市游艇公共服务设施建设未能同步,国内渔港在现代渔业建设的推动下正面临着产业转型与升级问题。笔者认为,当前是我国游艇产业发展的重要关口,尤其是加速游艇公共码头建设,对促进游艇内需的销售与游艇消费将具有不可低估的持续影响力,而利用当前渔港改造和产业提升机会,应是加快游艇公共码头建设步伐,推进地方游艇产业发展的最佳选择。各沿海城市政府主管部门可以通过加大对渔港产业整合力度、统筹规划与合理布局、模式创新与拓宽资金渠道等措施,妥善调整好各种利益关系,以期实现渔港城(镇)市包括游艇业在内的整体产业升级。     

牛蛙爱德华氏菌病病原菌的鉴定和致病因素的研究

从患爱德华氏菌病的牛蛙肌肉、肝、肾、血液和腹水中分离到8株细菌，根据其形态和生理生化特性鉴定为野生型迟钝爱德华氏菌。人工感染实验均为该病的病原菌，毒素检测试验表明，致病因素主要是内毒素而不是外毒素。分离菌株的主要特性为杆状、革兰氏阴性、周生鞭毛、兼性厌氧。接触酶、甲基红试验和硝酸盐还原均为阳性。在三糖铁琼脂上产H2S。氧化酶、丙二酸盐利用、V．P试验、明胶液化、尿素酶。苯丙氨酸脱氨酶为阴性。分解葡萄糖、甘露糖、麦芽糖，产酸产气，不利用甘露醇、蔗糖和阿拉伯糖。     

美国杂交条纹鲈苗种培育水体理化因子调控和生态条件初探

进行了美国杂交条纹鲈的苗种培育试验，科学调节池塘水体理化因子，初步探讨了美国杂交条纹鲈生长的适宜生态条件。认为美国杂交条纹鲈适温范围广，苗种培育过程中溶解氧应在4mg/L以上，碱度、硬度保持3me/L左右，pH8．0以上，COD应在10mg／L以下，对氮、磷营养元素和苗种培育饵料生物也进行了分析。     

弧菌影响斑节对虾受精卵和无节幼体发育的研究

用8种弧菌对斑节对虾受精卵和无节幼体进行感染试验,结果表明,8种弧菌严重地影响虾卵的孵化和幼体的正常发育,其中以混合弧菌感染致病性最强。试验还显示了弧菌对越是早期的胚胎侵害力越强。