鲤鱼脑垂体中促性腺激素含量的周年变化

经丙酮干制的垂体粉用40％乙醇抽提，冷冻干燥，用放射免疫测定法测定鲤鱼垂体中促性腺激素含量的周年变化。年平均含量为56．1微克／毫克。2月份临近产卵期时，雌、雄鲤鱼垂体中的促性腺激素含量都达到最大值(雌鱼为154．0微克／毫克，雄鱼为160．0微克／毫克)。雄鱼9月份含量最低(8．3微克／毫克)，雌鱼10月份含量最低(3．8微克／毫克)，并分别在10月份和11月份后开始逐渐上升。其周年变化并与其性腺的发育成正相关关系。     

促黄体生成素释放激素类似物对团头鲂血清中促性腺激素和17β-雌二醇含量变动的研究

本文报道了团头鲂(Megalobrama amblycephala)血清中17β-雌二醇放射免疫的测定方法,将所建立的测定方法用于鱼类血清测定,并对方法的准确性(回收率92.8±8.16％)、特异性(抗血清与雌酮、雌三醇的交叉反应分别为<3.20％、<2.99％)和灵敏度(2.36—2.50pg)作了检验。标准曲线的r=-0.998,s=0.023-0.051,检测范围为10—400pg/管。 团头鲂催产后血清中促性腺激素(GTH)含量增高,为产卵前的17倍左右,而未产卵个体的GTH含量则为产卵个体产卵前的3—5倍。与草鱼和鲢鱼一样,当血清中GTH达到一定浓度时,才能实现产卵。 随着团头鲂卵巢的发育,血清中17β-雌二醇(17β-E_2)含量和成熟系数同步逐渐上升,至第Ⅳ期卵巢发育成熟阶段,血清中17β-E_2含量形成一个高峰,达到2004.11±1136.31pg/ml,可作为卵母细胞卵黄迅速积累的指标。过后,血清中的17β-E_2含量略有下降,催产前为1392.71±399.09和1219.29±420.51pg/ml,产卵后,血清中17β-E_2含量在短时间内迅速下降到346.71±129.51和324.28±228.00pg/ml。 雄鱼则与雌鱼相反,17β-E_2含量随精巢发育而逐渐下降,并一直维持在一个低水平。     

镉对鲤血清促性腺激素和生长激素的影响

采用ＣｄＣｌ２浸没法处理鲤，研究镉对鲤血清促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）水平的影响，结果表明，较镐浓度镉（ＣｄＣｌ２９ｍｇ／Ｌ）处理引起血清ＧｔＨ水平降低，ＧＨ水平升高，提高水中钙浓度，能使由镉引起的ＧｔＨ水平的降低恢得取正常水平，并对镉引起的ＧＨ水平升高起延迟作用，镉处理使鲤对ＬＨＲＨ－Ａ刺激ＧｔＨ分泌的反应性下降，提高水中钙浓度也不能恢复正常，实验结果提示，镉引起的ＧｔＨ和ＧＨ的变化可     

鲤鱼注射LRH类似物后血液中激素和采精量的变化

对哺乳动物、鸟类和爬行动物进行的多次研究业已表明,合成 LRH 及其类似物LRH—A 与自然下丘脑释放因子有着相同的生物活性,因为这些物质会诱发雌性个体卵母细胞成熟和排出,蓝增加雄性个体采精量。诸如鲤鱼、虹鳟、大西洋鲑鱼、鲫鱼、     

17β－雌二醇和甲基睾酮对离体长臀鮠脑垂体促性腺激素分泌的影响

性类固醇激素对性腺发育期间的鱼类促性腺激素(GTH)分泌有负反馈作用，而对性未成熟的鱼类GTH分泌有正反馈作用。本实验选取性腺发育中期的长臀鮠(Cranoglanis bouderius)进行研究，将实验用鱼分成4组(实验重复3次，每组共用6尾鱼，)：①持续性17β-雌二醇(17β-Estradiol，E2)处理；②E2在注入促性腺激素释放激素类似物(Analogue of gonadotropin—releasing hormone，GnRH-A)脉冲刺激的处理；③持续性甲基睾酮(17α-methyltestosterone，MT)处理；④MT在注入GnRH-A脉冲刺激的处理；采用离体灌流孵育和GTH放射免疫测定的方法研究E2和MT对长臀鮠脑垂体GTH分泌的影响。持续性的E2(1μmol／L)处理能显著性地抑制长臀鮠脑垂体碎片基础GTH的分泌，而持续性的MT(1μmmol／L)处理能抑制长臀鮠脑垂体碎片基础GTH的分泌，同时E2和MT处理能抑制GnRH-A刺激的GTH分泌，而高浓度的E2和MT处理(10μmol／L)要比低浓度的E2和MT处理(0．1μmol／L)对长臀鮠脑垂体碎片基础GTH释放抑制能力强。这些结果表明，在离体实验中，E2和MT对性腺发育中期的长臀鮠脑垂体的GTH的分泌具有负反馈的作用，并且可能直接参与了长臀鮠脑垂体的GTH调节。     

促性腺激素受体的生物学研究

激素作用时一般具有以下几个特点：(1)组织特异性；(2)种的特异性；(3)感受性；(4)温度依存性等。在这些性质中，组织特异性(即只作用于特定的组织和靶细胞)是由于激素受体的存在而决定的。关于这方面从1970年以来就已经在各种肽素激素认识到了。     

鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展

促性腺激素抑制激素是2000年由日本学者首次从鹌鹑脑中分离出的一种新型下丘脑神经肽,通过其受体介导参与机体的生长、生殖以及摄食等生理过程。迄今,只在金鱼、斑马鱼、星点东方鲀、罗非鱼以及斜带石斑鱼等几种鱼中鉴定出促性腺激素抑制激素。目前,鱼类促性腺激素抑制激素的生理学功能研究相对较少,且存在争议。鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的表达调控以及其他生理学功能仍有待进一步研究。本研究简要总结鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展,并对促性腺激素抑制激素的生理学功能进行概括讨论,旨在加深对鱼类促性腺激素抑制激素的认识和了解,为进一步研究做铺垫。     

牙鲆脑中促性腺激素释放激素受体的克隆和鉴定

GnRH（gonadotropin-releasing hormone）是下丘脑-垂体-性腺轴中重要的十肽信息分子，在所有的脊椎动物的生殖神经内分泌调控中具有重要的作用。GnRH成熟的十肽沿着轴突被运送到下丘脑正中隆起（median eminence）末端，然后进入下丘脑垂体门脉循环（hypothalamo hypophyseal portal circulation）（四足动物）或直接通过轴突末梢（大多数硬骨鱼）把信号传递给刺激性腺的细胞，与特异性受体结合，刺激促性腺激素（GtHs，gonadotropins）的合成与释放，参与脊椎动物繁殖的起始和维持正常生殖功能。伴随着GnRH的研究，研究者对鱼类GnRH受体的研究也越来越感兴趣，牙鲆（Paralichthys olivaceus）是中国重要的海水养殖鱼类，本研究从牙鲆脑组织中克隆得到全长的Type Ⅰ GnRH受体，并对其组织特异性表达作了分析，为牙鲆的神经生殖内分泌研究奠定了一定的基础。 在本研究中，以海水养殖牙鲆为材料，从牙鲆脑组织中采用巢式PCR、5′-和3′-RACE技术克隆得到了1671bp牙鲆促性腺激素释放激素受体（GnRH-R）全长cDNA序列，包括147bp的5′-UTR、1248bp的开放阅读框和276bp的3′-UTR，GenBank登录号是DQ011872。牙鲆GnRH-R和其他物种GnRH-R的氨基酸序列的多序列比对结果显示，其存在许多保守的特征，牙鲆GnRH-R显示有3个主要的功能区域：1个N端胞外结构域（1～44个氨基酸残基）、1个大的跨膜结构域（45～324个氨基酸残基）和1个C端细胞质区域（325～415个氨基酸残基）。空间结构预测显示牙鲆GnRH-R跨膜区域包含7个高度保守的跨膜α螺旋（45—64、76—95、114—135、156—176、207—224、267—286、305—324），这些α螺旋是受体锚定到细胞膜上必需的。 氨基酸序列系统进化分析表明，牙鲆GnRH-R与琥珀鱼GnRH-R1具有高度同源性（85％同源性）。已知的硬骨鱼GnRH—R基因的系统进化分析表明，存在两种类型的GnRH-R基因：Type Ⅰ GnRH—R和Tpye Ⅱ GnRH-R基因。在牙鲆GnRH—R的氨基酸序列中，具有Type Ⅰ GnRH—R共有的典型基序：CAFVT（TMⅢ）和DlLEGKVSHSLTH（TMⅦ开始的序列处），表明克隆得到的牙鲆GnRH-R属于Type Ⅰ GnRH—R。 GnRH-R跨膜α螺旋之间的区域形成了胞内或胞外loops，这些区域参与受体信号转导和肽选择性功能上。牙鲆GnRH-R在TMⅢ的细胞质边界处具有一个保守的DRQSA／（DRXXXI／V）基序，这个基序被认为参与G蛋白偶联信号转导和GnRH肽诱导受体的激活；另一个保守的区域是位于TMⅦ内的NPXXY或DPXXY基序同样存在于牙鲆中（DPVIY），这个基序参与到一些GPCRs（包括GnRH-R）的内在化（internalization），同时这个基序特别是基序中的Tyr残基对于受体激活和信号转导起到关键作用。在第三个胞内loop中，鱼类GnRH—R有个保守的Ala残基（在牙鲆中为Ala^250），其也在G蛋白偶联和受体内在化方面具有重要作用。 在哺乳动物或非哺乳动物GnRH-R中，在第一个和第二个胞外loop之间由2个Cys形成1个保守二硫桥，是受体的正确折叠必需的。和其他的GnRH-R一样，牙鲆GnRH-R在第一个和第二个胞外loop之间存在由2个Cys（Cys^112和Cys^190）可以形成的潜在的二硫桥。这个二硫桥的完全缺失将会影响受体的结构完整性和降低鱼类GnRH—R对GnRH肽的选择性。 GnRH-Rs的NH2-末端区域不是很保守，但含有糖基化位点，是GnRH—Rs表达、GnRH—Rs穿梭到细胞胞表面或受体稳定必需的。将mouse的GnRH—R糖基化位点引进到人GnRH-R中，可以增加受体的数量，但不影响受体结合力或肽选择性。牙鲆Type Ⅰ GnRH—R中在NH2-末端含有3个潜在的糖基化位点（N^11SSW、N^15GSS和N^22WTA），此外，在第一个胞外loop和第二个胞外loop中分别存在1个糖基化位点（N^100ITV和N^178VTI），牙鲆Type Ⅰ GnRH—R含有的糖基化位点比哺乳动物要多，牙鲆糖基化位点的数目是否／怎样影响牙鲆GnRH-R的表达、降解率或亲和力，应该进一步研究。 在牙鲆GnRH-R的第一个胞内Ioop中，存在1个和tGnRH-R Ⅲ基序（^80KRKSH^84）一致的基序（^69KRKSH^74），这个基序是Gs识别基序（BBXXB，B代表碱性氨基酸，X代表任何一种氨基酸）。已经证明这个基序和cAMP产生相关，cGnRH-Ⅱ能通过cAMP-PKA途径提高stbGnRH-R在COS7细胞中的活性。 和其他非哺乳动物GnRH-Rs相似，牙鲆GnRH-R含有1个C-末端细胞内尾巴。这种胞内尾巴是鱼类GnRH-Rs功能必需的，在第三个胞内loop中，牙鲆GnRH-R含有2个PKC磷酸化位点（^233SKR^235和^262TLK^264）；在C端尾巴中，存在1个PKC磷酸化位点（^402TAR^404）。牙鲆GnRH-RC-末端尾巴中含有鱼类GnRH-R具有的Src同源区3（SH3）结合区域（PxxP序列）（^340PPAP），能够潜在地传送偶联的能力到丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs），GnRH通过PKC和PKA调控GtHα和LHβ转录，二者都集中于MAPK水平。 RT—PCR分析表明，GnRH-R在牙鲆脑和垂体有表达，暗示牙鲆GnRH-R参与到生殖行为如产卵行为；RT-PCR也检测到牙鲆GnRH-R在卵巢和睾丸中有表达，其能与牙鲆cGnRH-Ⅱ和sbGnRH在卵巢中共表达，GnRH肽在卵巢中具有自分泌／旁分泌功能，对牙鲆卵巢中的GnRH受体可能起到调控作用。[中国水产科学，2006，13（4）：536—546]     

雄烯二酮和甲基睾酮对日本鳗鲡血清睾酮和17_雌二醇含量的影响

探讨了间隔15d多次埋植雄烯二酮（4－androstene-3,17-dine,ADSD)或甲基睾酮（17α-methyl-testosterone,MT)诱导日本鳗鲡性腺发育过程中，血清睾酮（testosterone,T)和17β－雌二醇（17β-estradiol,17β-E2）含量的变化。在雌鳗中，埋植ADSD后血清T和17β-E2含量显著升高，随后缓慢下降；埋植后第15d的血清T含量随埋植次数的增加呈下降趋势，而血清17β-E2含量随埋植次数的增加而逐渐增加。埋植MT则使雌鳗血清中T含量显著降低，而雌鳗血清17β-E2含量在埋植MT2次后显著升高。在雄鳗中，埋植ADSD后第15天的血清T和17β－E2水平均显著升高，并随埋植次数的增加而增加；而埋植MT后第15天的血清T含量也显著升高，并随埋植次数的增加而增加，但血清17β-E2水平仅在埋植第3次后显著高于对照组。研究结果表明：埋植ADSD和MT对日本鳗鲡血清T和17β-E2的影响存在明显的性别差异。     

鲤、鲢、草鱼促性腺激素垂体含量及血清浓度日周期变化的关系

淡水鱼类有的在池塘中能自然产卵,如鲤(Gyprinus carpio)、鳊(Megalobrama amblyocephala)等,有的鱼必须给予外源激素才能产卵,如青鱼(Mylopharyngodon piceus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)。为探索产生这种差别的原因,本文用放射免疫方法测定了鲤、鲢、草鱼产卵季节促性腺激素(GTH)在垂体中的含量和血清中浓度的日周期变化。鲤、草、鲢24小时血清GTH浓度呈脉冲式波动,白天出现3-4次高峰,夜间雌的有时还有一次高峰。鲤高峰值多在20-40毫微克／毫升血清,峰谷在5—15毫微克／毫升血清,GTH浓度始终保持高水平,而草、鲢高峰值仅2—8毫微克／毫升血清,峰谷0．1—1毫微克／毫升血清。草、鲢每只垂体GTH含量较高,约为鲤的2．5倍。以上数据说明草、鲢垂体释放GTH比鲤少。这种差别可能反映了在池塘中鲤能自产,而草、鲢不能自产的原因。草鱼垂体离体培养,白天和黑夜取材,对LRH-A的反应性不同,白天的反应较弱,对此进行了讨论。     

RAPD技术分析荷包红鲤抗寒品系与亲本的基因组变化

用４０个随机引物对荷包红鲤、荷包红鲤抗寒品系和黑龙江野鲤三个品系鱼进行ＲＡＰＤ反应,共扩增出３６６条带,获得多态性的ＤＮＡ片段６０条。荷包红鲤抗寒品系与荷包红鲤、荷包红鲤抗寒品系与黑龙江野鲤的基因组变异指数分别为０．７７和０．９０。说明荷包红鲤抗寒品系的基因组与其亲本黑龙江野鲤的基因组较荷包红鲤具有更大的变异。     

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢消化酶活性的研究

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢肝脏蛋白酶活性低于肠蛋白酶。肠蛋白酶活性，鳜鱼最高，其余依次为青鱼、鲤、鲢、草鱼、鲫。鳜鱼、鲢的肠蛋白酶活性由前肠向后肠递减；而青鱼、鲤、草鱼的则由前肠向后肠递增；鲫则中肠活性最低。六种鱼不同组织的脂肪酶活性因鱼而异。青鱼、鳜鱼、鲤、鲢肝脏中脂肪酶活性低于肠脂肪酶活性（Ｐ＜０．０１）；而草鱼和鲫肝脏中脂肪酶活性与肠脂肪酶活性差异不明显（Ｐ＞０．０５）。六种鱼肝脏中脂肪酶活性由高到低依次为鳜鱼＞鲢＞鲫＞草鱼＞青鱼＞鲤；肠脂肪酶活性顺序为鳜鱼＞鲢＞青鱼＞鲤＞草鱼＞鲫。脂肪酶活性与鱼类食性无明显相关性。不同组织间淀粉酶活性存在差异。鳜鱼的肝脏和肠均有较高淀粉酶活性，青鱼和鲫肝脏中淀粉酶活性低于肠中的；草鱼、鲤和鲢肝脏中淀粉酶活性高于肠中的，但差异不显著。六种鱼中鳜鱼的肝脏淀粉酶活性明显高于其它五种无胃鱼，它们的淀粉酶活性顺序依次为鳜鱼＞鲢＞鲤＞草鱼＞青鱼＞鲫；肠淀粉酶活性顺序为鳜鱼＞鲫＞鲤＞青鱼＞鲢＞草鱼。     

转牛（羊）生长激素基因工程鲤鱼研究

生产出转牛和羊生长激素基因实验鲤鱼一万余尾，筛选出生长速度快，含有外源基因的转基因鲤鱼１４３尾，遗传实验证实外源基因可遗传给后代，经池塘生长实验证明于代仍具有生长速度快的特征，建立了把外源基直接注入鲤鱼受精卵及确定了外源基因导入鲤鱼受精卵的最佳时期等构建转基因鱼的一整套技术。     

人生长激素基因在团头鲂和鲤中的整合和表达

采用显微注射方法，将带有小鼠ＭＴ－１基因启动顺序与人生长激素ｈＧＨ基因顺序重组的线状ＤＮＡ片段，注入团头鲂和鲤的受精卵，获得成活的实验鱼。经斑点、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫和酶联等方法检测，表明外源基因在受体鱼中得到整合、转录、翻译和表达，并具促生长效应。转基因雌鱼和雄鱼有性繁殖所获得的子鱼带有外源基因，表明外源基因能通过性细胞传递给子代，并仍具促生长效应。     

兴国红鲤同草鱼杂交的受精细胞学研究

兴国红鲤与草鱼杂交虽属亚科间的远缘杂交,却符合鲤科鱼类一般的受精规律,精子由唯一的受精孔道进入卵内,单精入卵。受精的适当时间是在卵细胞第二次成熟分裂的中期。受精后7分钟形成精子星光。接着雄性原核、雌性原核先后形成,并逐渐靠拢;受精后40分钟两性原核结合(水温21℃);受精后45—50分钟出现新个体的第一次卵裂。说明草鱼精子对兴国红鲤成熟卵细胞不仅起激动作用,而且参与了遗传物质的组成。此系亚科间远缘杂交具有生活力的生物学基础。实验发现:在特定的条件下,同一批受精卵中,多倍体,单倍体,雌发育可能同时存在。本文还比较分析了常见的几种鲤科鱼类及其杂种受精的过程。     

鲤鱼棘头虫病的研究

本文报道了1985-1987年在崇明县新民第三水产养殖场对鲤鱼棘头虫病的病原、症状及治疗方法的研究结果。该病可引起鲤鱼自夏花至成鱼大批死亡，全场感染率在70％以上；发病严重的鱼池则感染率高达100％，死亡率高达60％．病鱼肠壁上形成肉芽肿结节，严重时能使内脏粘连，甚至体壁溃烂和穿孔。病原是崇明长棘吻虫(新种）Rhadinorhynchus chongmingnensis sp.nov.。扫描电镜观察，吻上布满细毛。有吻钩14纵行，每行29～32个吻钩，粘液腺8个。治疗方法为每天每公斤鱼拌饵投喂0．6毫升四氯化碳，连服6天，效果良好．     

胡子鲶血浆中外源生长激素的代谢动力学

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）研究了重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）在胡子鲶血浆中的代谢动力学,肌肉注射ｒｃＧＨ（０．２和１μｇ／ｇ）后,胡子鲶血浆ｒｃＧＨ水平迅速升高,于２和３ｈ时达峰值,随后下降,在注射后第２和４天,血浆中检测不到ｒｃＧＨ,腹腔注射ｒｃＧＨ（０．２和１μｇ／ｇ）后,胡子鲶血浆ｒｃＧＨ水平也有同上类似的变动规律,胡子鲶腹腔注射０．５,１和２μｇ／ｇ的ｒｃＧＨ７天     

草鱼卵子和三角鲂精子杂交的受精细胞学研究

本实验观察了两种不同亚科鱼——草鱼()和三角鲂()杂交的受精细胞学过程,证实异源的三角鲂精子能够进入到草鱼卵子中,诱导星光并形成雄性原核。卵子在精子的作用下,继续完成了第二次减数分裂、排出第二极体,最后雌雄原核相互接触而融合。全部过程有正常的受精细胞学程序和卵裂方式,由此产生的后代兼具父、母本双方的遗传性状。