中华绒螯蟹"颤抖病"研究进展

综述了近年来中华绒螯蟹“颤抖病”研究进展,提出该病可能是由多病原引起,并展望了“颤抖病”的研究及防治前景。     

中华绒螯蟹“颤抖病”防治

中华绒螯蟹（河蟹）是我国淡水名产之一，近年来随着养殖规模的扩大，河蟹的病害问题日显突出，其中“颤抖病”最为常见，是河蟹养殖过程中危害最严重的一种疾病。1 症状病蟹反应迟钝、行动缓慢、螯足的握力减弱、蜕壳困难、摄食量减少以至不摄食；鳃排列不整齐、呈浅棕色，少数甚至呈黑色；血淋巴液稀薄、凝固缓慢或不凝固；心脏、腹神经节肿大，心跳乏力，肝胰腺呈淡黄色、严重时呈灰白色，背甲内有大量腹水，步足的肌肉萎缩水肿；有时头胸甲的内膜也坏死脱落。该病的典型症状为步足颤抖、环爪、爪尖着地，腹部离开地面，甚至蟹体倒立，所…     

中华绒螯蟹“颤抖病”研究进展

<正> 中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis),俗称河蟹,为我国特有的名贵水产品,近年来蓬勃发展,产生了很高的经济效益。与此同时,养殖病害问题已成为制约养殖生产的主要因素。1994年在江苏养殖成蟹池塘首次发现了河蟹“颤抖病”,1995年后迅速蔓延,至1998年已扩大到上海、福建、江西、浙江以及辽宁等地,几乎覆     

中华绒螯蟹颤抖病的一种病原特性初步研究

病毒球状、无囊膜,大小为５５ｎｍ左右,病毒核酸有１２个基因组片段,为３／３／６型,总分子量２０ｋｂ左右。推测病毒核酸为ＲＮＡ,初步确定为呼肠孤病毒样病毒（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ Ｖｉｒｕｓ）。实验提示该病毒对温度有较强的敏感性。     

患颤抖病中华绒螯蟹体内类立克次体侵染的光镜和电镜观察

对江苏和安徽地区患颤抖病的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis)各器官和组织进行光镜和电镜观察。结果表明，类立克次体（Richettsia-like Organisms,RLOs)广泛寄生于病蟹各器官和组织中。它们特异性地寄生于病蟹各器官的肌肉和结缔组织以及血细胞中，血淋巴中的小颗粒细胞是类立克次体的主要繁殖场所和传播载体。类立克次体对病蟹机体的结缔组织的广泛侵入，以及对胸神经节及神经与肌肉的接头-运动终板的侵染正是颤抖病症状（不食、肌无力、肢体阵发性颤抖）的病理结构基础。本研究旨在探讨RLOs与中华绒螯蟹颤抖病的关系，从而为建立有效的防治措施奠定理论基础。     

中华绒螯蟹颤抖病病原的初步研究

本文作者将发生颤抖病的中华绒螯蟹内脏匀浆,３００００ｒ．ｐ．ｍ离心３０分,将沉淀重悬,细菌过滤器过滤后,注射病蟹内脏接种健康的中华绒螯蟹进行人工感染试验,感染蟹表现出与野外发病中华绒螯蟹同样的症状。超薄切片后,电子显微镜下在细胞质中可观察到病毒样颗粒及略小于细胞核大小的病毒包埋体样结构。     

中华绒螯蟹颤抖病药物治疗的初步研究

用水产常用清塘剂、杀菌驱虫药、消毒剂、中草药及自配药物克螺威1号(SI-1)对中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体进行体外药敏试验。结果表明,螺原体对生石灰、茶籽饼、敌杀死、硫酸铜、硫酸锌、次氯酸钙、三氯异氰脲酸、二氧化氯、溴氯海因、二溴海因、高锰酸钾、五倍子、黄连、黄柏及自配药物克螺威1号具有不同程度的敏感性。通过最小杀菌浓度(MBC)比较,螺原体对清塘剂茶籽饼、杀菌驱虫药硫酸铜、消毒剂次氯酸钙、中草药黄连、自配药物克螺威1号更为敏感,其中克螺威1号为最敏感药物,最小抑菌质量浓度(M IC)为0.16 mg/L,MBC为2.5 mg/L。对克螺威1号进行急性毒性试验和颤抖病治疗试验表明,克螺威1号的96 h LD50为1106.62 mg/kg,安全使用量为110.66 mg/kg。用其治疗人工诱发颤抖病的中华绒螯蟹,克螺威1号具有显著效果(P<0.05),随后在10个被确诊为螺原体引发中华绒螯蟹颤抖病的养殖场进行药物治疗试验,在6个养殖场治疗有效,而在其他4个养殖场治疗无效,治疗试验效果不一,用克螺威1号治疗中华绒螯蟹颤抖病具有较好的前景,但仍需进一步做大面积长期临床试验。     

中华绒螯蟹“颤抖病”病毒提纯方法的比较

以患“颤抖病”中华绒螯蟹组织浓缩液为材料,比较了差速离心结合PEG盐析法(方法1)、葡聚糖柱层析法(方法2)和蔗糖密度梯度超速离心法(方法3)三种方法分离提纯病毒的效果,对提纯病毒进行紫外吸收测定及电镜检查等。结果表明:方法3是用于分子生物学等深入研究该病的比较理想的提纯方法;而方法1所得病毒浓缩液虽纯度不及方法3,但基本可以满足一般研究的要求,且对仪器及技术的要求相对较低;方法2则介乎方法1与方法3之间。故可根据具体需求和实验室条件选择适合的中华绒螯蟹“颤抖病”病毒提纯方法。     

中华绒螯蟹腹水病病原分析

从六安地区患腹水病的中华绒螯蟹(Eriochersinensis)体内分离到一株病原菌(HX4菌株),经API/ATB半自动化鉴定和分子遗传学鉴定,确定为拟态弧菌(V mimicus)。应用PCR技术、电镜技术、组织细胞模型和动物实验对该菌的毒素共调菌毛(ToxinCoregulatedPilus,TCP)、外毒素和内毒素等毒力因子研究的结果表明,HX4菌株为TCP+株,在pH6 7定居因子培养基中,30℃需氧培养条件下可较好表达TCP;TCP+菌对肠管的黏附率为(32 19±0 14)%、对HEp 2细胞的黏附菌数为16 03±4 66、对中华绒螯蟹的毒力(LD50)为2 08×106CFU·mL-1,均显著高于TCP-菌,其相应值分别为(0 52±0 06)%、6 8±2 06和2 09×107CFU·mL-1;外毒素具有很强的细胞毒性(TCID500 25μg)、肠毒性(皮肤蓝斑直径15mm)和中华绒螯蟹致死性(LD501 40μg),而内毒素对中华绒螯蟹基本无致病性。由此可见,TCP和外毒素是拟态弧菌HX4菌株的2种重要毒力因子,在细菌致病过程中起重要作用。     

中华绒螯蟹在欧州

分析了中华绒螯蟹侵移欧洲的过程，介绍了该种群目前在欧洲的分布情况。     

中华绒螯蟹在北美洲

介绍并分析了中华绒螯蟹侵移北美洲的过程以及目前的分布情况。     

中华绒螯蟹免疫相关基因的研究进展

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是我国重要的增养殖对象之一,近年来,随着养殖规模的不断扩大和集约化程度的提高,由细菌、病毒和类立克次体等引起的各种疾病日趋严重,给中华绒螯蟹养殖产业造成了巨大损失~[1-3].     

中华绒螯蟹性早熟的早期判别

结合对生殖腺的组织学研究,对发生性早熟发育与未发生性早熟发育的中华绒螯蟹的２２个形态特征参数进行了比较,确定了判别雌、雄中华绒螯蟹性早熟的三个形态特征参数,建立了雌、雄蟹性早熟判别公式;对雌蟹的判别准确率达９０．９％,对雄蟹的判别准确率达９６．９％。     

Cd^2＋对中华绒螯蟹的急性致毒研究

研究了Cd^2＋对中华绒螯蟹幼蟹的急性毒性影响。利用直线回归法计算出Cd^2＋对中华绒螯蟹96h的半致死浓度LC50为5．348mg／L。利用透射电镜方法观察了浓度为6．310mg／L的Cd^2＋96h对中华绒螯蟹视神经节不同类型神经分泌细胞超微结构的影响,结果显示：Cd^2＋可导致神经分泌细胞的质膜和核膜加犀或褶皱变形、断裂,线粒体形变、空泡化。     

中华绒螯蟹不同组织中基因组DNA含量比较

用改进后的柱式回收法提取了中华绒螯蟹不同组织中的基因组DNA,并通过紫外吸收光谱法初步分析了附肢肌肉组织、鳃、性腺组织和肝脏组织中基因组DNA的含量,初步得出同质量不同组织中基因组DNA含量大小关系趋向于:鳃>肝脏>性腺>附肢肌肉.     

中华绒螯蟹血清凝集素的分离纯化与性质研究

运用硫酸铵盐析和GlcNAc-Sepharose 6B亲合层析等方法从中华绒螯蟹的血清中分离出一种天然的凝集素,经SDS-PAGE测得其分子量约为82 kD,由单一亚基组成,由等电聚焦凝胶电泳测得其等电点(pI)为5.4.糖凝集抑制试验中检测到葡萄糖、半乳糖、甘露糖、乳糖、果糖和蔗糖对中华绒螯蟹血清凝集素均没有抑制作用,但N-乙酰氨基糖GIcNAc、GalNAc和ManNAc等能抑制其凝集活性.热变性试验结果表明,温度为10～50℃,凝集素仍保持强的凝集活性,但温度升至60℃后,凝集活性迅速下降,至80℃失去凝集活性,在pH 4.0～8.0的各缓冲液中保持较强的凝集活性,而在此pH范围外,凝集活性均有不同程度的下降.中华绒螯蟹血清凝集素可使外源红血细胞发生凝集,还具有凝集细菌或抗菌作用.     

中华绒螯蟹、日本绒螯蟹及其杂交F_1代群体的遗传多样性AFLP分析

通过4对引物组合对辽河水系中华绒螯蟹群体,俄罗斯的日本绒螯蟹群体及其杂交F1代(辽河蟹♀×俄罗斯蟹♂)的遗传多样性进行了AFLP分析。结果表明,4对引物共扩增出233条带(100bp~1000 bp),其中辽河群体多态条带184条,多态位点比例78.97%;俄罗斯群体177条多态带,多态位点比例75.97%;杂交群体182条多态带,多态位点比例78.11%。3个群体的群体内遗传相似度分别为0.7074±0.0469,0.7171±0.0475,0.7406±0.0449,香农多样性指数分别为0.185±0.128,0.194±0.119,0.176±0.138。变异来源有79.13%来自群体内,20.87%来自群体间。     

中华绒螯蟹生态育苗池塘细菌群落分析

为探究江苏省射阳地区沿海滩涂中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)生态育苗池塘细菌群落结构,分别对养殖池塘水体(S7,S8,S9)和池塘底泥(N7,N8,N9)细菌群落16SrDNA的V3、V4、V5可变区进行扩增,检测合格的文库进行高通量测序;利用Qiime(v1.7)软件,对序列阈值97%相似性水平进行聚类分析;分别以门、纲、目、科和属的分类水平对样本进行α-多样性指数分析;以Chaol指数和Shannon指数评估菌种丰富度和多样性。结果表明,3个生态育苗池塘得到OTU分别为8 881、7 406、8 566个。S7微生物归属于16门、29纲、58目、97科、191属;S8为9门、18纲、38目、68科、132属;S9为17门、32纲、60目、111科、227属。N7为41门、103纲、198目、325科、572属;N8为42门、103纲、203目、318科、534属;N9为40门、99纲、196目、323科、578属。养殖水体优势菌群以变形菌门(Proteobacteria)为主,其次是拟杆菌门(Bacteroidetes);池塘底泥优势菌群以变形菌门为主,其次为拟杆菌门、绿弯菌门(Chloroflexi)和浮霉菌门(Planctomycetes)。养殖池塘底泥中细菌群落的丰富度和物种多样性明显高于养殖水体,水体中细菌群落的丰富度S9S7S8,物种的多样性S7S9S8。池塘底泥中细菌群落的丰富度N7N9N8,物种的多样性N7 N9N8。