凡纳对虾SPF种苗工程与集约化防病养殖模式

对虾养殖业的可持续发展依赖于健康种苗的供给和虾病的预防。池塘培育凡纳对虾全人工繁育和连续传代技术的发展增加了我国人工养殖对虾种苗的可持续供给，减少对我国斑节对虾、中国对虾和日本对虾等土对虾种类野生亲虾的捕捞。目前，我国每年生产30万吨以上的凡纳对虾，约占全国总产量的80％。但是，病害仍是我国对虾养殖业的主要威胁，尤其是病毒病原引起疾病的大规模暴发流行。我国凡纳对虾养殖业中最重要的病毒性病原是白斑综合症病毒(WSSV)桃拉病毒(TSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)。本报道了我国凡纳对虾SPF种苗工程和集约化防病养殖模式的最新进展。SPF种苗工程技术可以使繁育系统排除WSSV、TSV和IHHNV等严重病毒病原的侵害，提高凡纳对虾亲本和种苗的质量。改进的集约化防病养虾系统则是一种生物安全性更高防病更有效果和环境更友好的集约化养殖系统。     

对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究进展

对虾白斑综合症病毒(wkite spot syndrome virus，WSSV)又称对虾白斑杆状病毒(white spot bacilliform virus WSBV)，是对全球对虾养殖业危害最大的病原之一。该病毒分子量较大、结构特异，是已知动物病毒中最大的病毒。自1992年以来，各国学者对WSSV进行研究。由于他们研究的方法及研究的侧重点不同，对该病毒命名各异。陈秀男(1993)称之为白斑综合症杆状病毒(WSBV)；荷兰Wongteerasupaya(1995)称其为系统外胚层和中胚层杆状病毒(SEMBV)；     

套式PCR检测WSSV出现假阳性的原因分析及控制措施

对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是1992-1993年全国范围内对虾暴发性流行病的主要病原,到现在仍然没有能有效控制wssV疫情的技术措施。WSSV每年给我国对虾养殖业带来巨大经济损失,成为对虾养殖业可持续发展的主要障碍。目前检测WSSV病原的方法有很多种,主要有目视观察法、组织学方法、电子显微技术、生化检验法、免疫学方法和分子生物学方法等。其中分子生物学方面中PCR检测具有敏感性高、特异性高等特点,被广泛应用于对虾WSSV检测。     

套式PCR检测WSSV出现假阳性的原因分析及控制措施

正对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV)是1992-1993年全国范围内对虾暴发性流行病的主要病原,到现在仍然没有能有效控制WSSV疫情的技术措施。WSSV每年给我国对虾养殖业带来巨大经济损失,成为对虾养殖业可持续发展的主要障碍。目前检测WSSV病原的方法有很多种,主要有目视观察法、组织学方法、电子显微技术、生化检验法、免疫学方法和分子生物     

中国对虾杂交优势对自然感染白斑综合征病毒的抗病力分析

中国对虾杂交优势对自然感染白斑综合征病毒的抗病力分析=Analysis of the resistance of heterosis in Fenneropenaeus chinensis to natural infection with white spot syndrome virus ［刊，中］/李素红（中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛 266071)，张天时，孟宪红，孔杰//水产学报，—2007，31(1).-68～75 一个包括42个全同胞家系的中国对虾选育群体，荧光标记后每个家系各取40尾健康个体混养，自然发病并确认感染白斑综合征病毒(white spot-syndrome virus，WSSV)。发病1周后将所有个体取出，统计各家系的存活率，并对活体利用巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)进行WSSV检测。对存活率进行分析，结果显示：4个家系的存活率在60％以上，7个家系的存活率在20％以下；存活率与第一次扩增阳性率、第二次扩增阳性率呈不显著负相关。第一次扩增阳性率与第二次扩增阳性率呈极显著正相关。结合两次扩增的阳性率分析得出：青岛野生群体内自交产生的一个家系和韩国群体养殖家系与乳山野生群体杂交产生的一个家系在抗病力上显著优于其它家系；经独立样本t检验表明，群体间交配组合的存活率差异不显著，因此家系选育可能是进行抗WSSV品种选育的重要途径。多重比较结果发现：韩国群体养殖家系(♂)与乳山野生群体(♀)杂交后代的存活率(56.20%±8.75%) 显著高于韩国群体养殖家系自交后代(22.50%±2.50%) (P<0.05)，说明该杂交后代在抗WSSV方面有一定程度的杂种优势。而韩国群体养殖家系 (♂)和乳山野生群体(♀)的杂交后代所表现的杂种优势(26.95)与其反交后代(3.85)差异显著。图3表5参15 关键词：中国对虾； 巢式PCR； 白斑综合征病毒 E-mail:kongjie@sina.com     

不同粒径与厚度沙层对浮游生物过滤效果研究

生产中大部分养殖场用沙滤来预防对虾白斑综合征病毒病,其主要原理是通过采用沙滤来减少携带白斑综合征病毒(WhiteSpotSyndromeVirus,WSSV)的生物和其它病原菌的侵入,改善养殖用水,尽可能减少WSSV和细菌的传播。本文作者通过不同粒径与厚度的沙层过滤效果的对比试验,得出在当前高位池殖对虾的模式中,由1m厚细沙、0.5m厚粗沙组成的沙滤系统的过滤效果最好,能减少携带白斑综合征病毒的生物和其它病原菌。一、材料与方法     

白斑综合征病毒(WSSV)在市售克氏原螯虾中携带情况调查

近年来白斑综合征成为制约克氏原螯虾养殖的重要病害。对市场销售的克氏原螯虾抽样调查,采用PCR仪检测白斑综合征病毒(WSSV)的携带情况,结果为:湖泊养殖的克氏原螯虾不携带WSSV,池塘单养的克氏原螯虾及江河野生克氏原螯虾携带WSSV。     

人工培育对虾苗种体内可培养细菌数量及组成分析

采用常规细菌分离、培养与纯化,结合细菌16S rDNA序列分析等方法,调查分析了山东、天津、浙江部分苗种场凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和中国明对虾(Fenneorpenaeus chinensis)苗种体内的可培养细菌总数以及优势菌的种类和数量,并用PCR的方法检测对虾苗种携带病毒情况.结果显示,凡纳滨对虾和中国明对虾苗种体内的可培养细菌总数均在105-107 CFU/g之间,分离出的细菌分属于弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、盐单胞菌属(Halomonas)等8个属,其中,弧菌属在对虾苗种体内占绝对优势,达40.0％-90.23％.部分凡纳滨对虾和中国明对虾苗种样品检测为白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,VSSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)阳性,WSSV检出率为50.0％,IHHNV检出率为37.5％,同时携带两种病毒的检出率为11.11％.只携带WSSV病毒以及同时携带两种病毒的对虾苗种体内的总菌数量在1.23×107-4.14×107 CFU/g之间,显著高于其他批次的样品(P＜0.05),且弧菌数量在107 CFU/g左右,显著高于其他批次的样品(P＜0.05).只携带IHHNV以及不携带病毒的对虾苗种体内的弧菌数量为104-106 CFU/g.研究表明,弧菌属在凡纳滨对虾和中国明对虾苗种体内普遍存在且为优势菌属,携带WSSV可能会引起对虾苗种体内的弧菌数量增长.     

南美白对虾两大病毒病流行分析及趋势预测

对虾白斑综合征（WSS）和桃拉综合征（TS）是危害我国对虾养殖业的两大病毒病。1993年起我国养殖的中国对虾、日本对虾、斑节对虾中先后暴发白斑综合征，造成重大损失，为恢复对虾养殖产业，我国引进并推广了对白斑综合征有较强抗性的南美白对虾，1998年后该虾在我国逐步形成规模养殖，产量迅速提高，     

WSSV结构、功能及基因组学研究概况

对虾白斑综合征病毒WSSV(White Spot Syndrome Virus WSSV)已成为养殖对虾一主要病原，给对虾养殖业造成了巨大损失。弄清其侵染机理是有效防治的基础，而对其侵染机理的阐释则主要是搞清各基因在侵染中的作用及表达调控的特点，这些恰恰是WSSV基因组学的研究内容。本文对WSSV基因组序列、结构蛋白及非结构蛋白方面的研究成果做了综述，同时介绍了基因组学研究中的一些常用的方法。     

黄渤海区张网渔业

2010年6～7月,利用抽样调查方法对黄渤海区32个主要渔港、渔村的张网渔业进行了实地调查和现场测量。依据调查资料并结合2009年度河北、辽宁、山东以及天津三省一市的渔具渔法调查报告、1983～2009年中国渔业年鉴中记载的张网捕捞产量分类统计资料,对黄渤海区的张网渔业进行了研究。结果表明,1998年张网产量最高,达90.43万t,贡献率为17.18%,此后逐年波动下降。当前,张网是黄渤海区捕捞作业的重要渔具渔法之一,处在第3位,年产量为38.15万t,贡献率为10.49%。目前在黄渤海区进行捕捞作业的张网共有4个型、7个式、19种张网网型、总量69万顶。辽宁省的张网数量占三省一市张网数量的53.54%,主要分布在辽东湾作业;河北省的张网数量占24.69%,主要分布在渤海湾作业;山东省的张网数量占23.08%,主要分布在日照至烟台近海作业。其中以捕捞海蜇、虾类和小杂鱼为主的并列单片张网占54.51%;以捕捞毛虾为主的双锚竖杆张网占16.12%。大多数张网的最小网目尺寸均在4～30mm之间。综合分析表明,张网在黄渤海区渔业中所占比重较大、选择性较差、最小网目尺寸偏小,不利于黄渤海区渔业资源可持续利用。     

Low numbers of repeat units in variable number of tandem repeats (VNTR) regions of white spot syndrome virus are correlated with disease outbreaks

White spot syndrome virus (WSSV) is the most important pathogen in shrimp farming systems worldwide including the Mekong Delta, Vietnam. The genome of WSSV is characterized by the presence of two major ‘indel regions’ found at ORF14/15 and ORF23/24 (WSSV‐Thailand) and three regions with variable number tandem repeats (VNTR) located in ORF75, ORF94 and ORF125. In the current study, we investigated whether or not the number of repeat units in the VNTRs correlates with virus outbreak status and/or shrimp farming practice. We analysed 662 WSSV samples from individual WSSV‐infected Penaeus monodon shrimp from 104 ponds collected from two important shrimp farming regions of the Mekong Delta: Ca Mau and Bac Lieu. Using this large data set and statistical analysis, we found that for ORF94 and ORF125, the mean number of repeat units (RUs) in VNTRs was significantly lower in disease outbreak ponds than in non‐outbreak ponds. Although a higher mean RU number was observed in the improved‐extensive system than in the rice‐shrimp or semi‐intensive systems, these differences were not significant. VNTR sequences are thus not only useful markers for studying WSSV genotypes and populations, but specific VNTR variants also correlate with disease outbreaks in shrimp farming systems.     

Detailed monitoring of white spot syndrome virus (WSSV) in shrimp commercial ponds in Sinaloa, Mexico by nested PCR

WSSV has caused great losses to the global shrimp industry in recent years. This virus can infect shrimps asymptomatically. However, once the clinical signs are developed, mortalities can reach 100% in 3-10 days. PCR has been extensively used to detect WSSV in a specific and sensitive manner. Nested PCR is even more sensitive than single-step PCR and had been used for the detection of WSSV in asymptomatic populations. In this work, a detailed monitoring of WSSV by nested PCR in shrimp commercial ponds in Guasave County, State of Sinaloa, Mexico, is presented. Five ponds from two different farms were monitored for growth and presence of WSSV. At the beginning of the culture, ponds from both farms showed no or very slight WSSV presence. A 3-day period of rain occurred at both farms 10 and 14 weeks of culture for farms 1 and 2, respectively. At this time, WSSV was widely distributed in the shrimp populations of farm 1 according to nested-PCR data, although no visual symptoms were observed. In ponds of farm 2, WSSV was present at low level. However, the number of PCR-positive groups was drastically increased in both farms by nested and single-step PCR. Abrupt fluctuations in temperature and salinity were documented in farm 2 after the rain, which may have contributed to the increasing of viral load in the pond's shrimp populations. Twelve days after the rain period, estimated mortalities of 80% occurred in farm 1. Nevertheless, the study ponds at farm 2 culture continued normally for three more weeks and were harvested successfully (52% and 67% of survival for ponds 1 and 2, respectively). The removal of 40% and 50% of shrimp population 2-4 days after the raining period may have contributed to the thriving of the cultures. Analyses of the presence of WSSV in individuals of both sexes indicated that there is no preference for this virus to infect male or female shrimp. Also, no differences in weight were found between WSSV infected and non-infected individual shrimps, as well as nested-PCR positive against single-step PCR positive organisms. Nested PCR is more useful to monitor shrimp cultures than single-step PCR since it allows knowing how widely distributed the virus is in asymptomatically populations.     

基于COⅠ基因分析辽东湾海蜇群体遗传多样性

为研究海蜇群体的遗传多样性状况,采用PCR扩增获得20个海蜇野生群体样品的线粒体COⅠ基因部分序列,并结合GenBank上其他15个海蜇样品的同源序列,对其序列变异和遗传分化进行分析。结果显示,35条序列的A、T、C、G碱基含量分别为26.7%、36.4%、18.8%、18.1%;在长度624bp的线粒体COⅠ基因片段中共发现21个多态位点,定义了17种单倍型,单倍型多态性为0.91±0.03,核苷酸多态性为0.0056±0.0032。同其他几种大型水母相比,海蜇种群的遗传多样性处于较高或中等水平。研究结果表明,不同海蜇种群尤其是相距较远的群体在其分布范围内可能存在遗传分化现象。     

基于GFM和GAMM模型分析对虾白斑综合征(WSSV)对黄海和东海北部水域虾类生物量的影响

虾类是海洋生态系统功能群的重要组成部分，其生物量变化受到多重因素的影响。本研究在开展黄海和东海北部水域虾类白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)流行病学调查的基础上，利用梯度随机森林模型(gradient random forest model, GFM)和广义加性混合模型(generalized additive mixed models, GAMM)，分析了2016—2018年间黄海和东海北部水域WSSV流行对虾类生物量的影响。分子检测结果显示，调查所获取的26种虾类中，11种被检测为WSSV阳性；2016、2017和2018年WSSV阳性采样站点的比率分别为48.40%、38.75%和21.74%，虾类样品中WSSV阳性检出比率分别为16.86%、9.60%和4.80%。GFM模型分析显示，解释变量“阳性样品数的对数(ln_posi)”对响应变量“虾类生物量的对数(ln_Abu)”的重要性最高。GAMM分析中，根据赤池信息准则(Akaike information criterion, AIC)最小原则筛选出的最优模型为：ln_Abu~WSSV阳性率(P_rate)+ln_posi+经度(Long)，该模型中ln_posi和P_rate是影响虾类生物量的极显著相关因子，ln_Abu随着P_rate的升高而降低。研究表明，WSSV在黄海和东海北部水域虾类中流行，推测对该海域的虾类生物量存在影响。     

微卫星技术对黄、渤海海域7个不同地理群体中国对虾的遗传结构和遗传分化研究

采用微卫星DNA技术对黄、渤海海域7个不同地理群体的中国对虾进行了遗传结构和遗传分化研究.7个地理群体分别来自辽东湾(LD)、渤海湾(BH)、海州湾 (HZ)、乳山湾 (RS)、海洋岛 (HYD)、朝鲜半岛西海岸(KW)以及朝鲜半岛南海岸(KS).7对多态性良好的微卫星引物共检测到109个等位基因,群体平均期望杂合度(He)范围为0.810～0.864.49个群体位点中,只有15个符合Hardy-Weinberg平衡.UPGMA聚类分析显示,各地理群体亲缘关系与地理位置关系密切.根据各地理群体间遗传距离及AMOVA遗传分化检验结果,可将中国对虾分为3个独立种群,分别为中国沿岸黄、渤海群体、朝鲜半岛西海岸群体及朝鲜半岛南海群体;其中中国沿岸黄、渤海群体内部也发生了一定程度的遗传分化,但是否达到种群水平还有待于进一步验证.     

浙江省和广东省部分地区2005年虾病发生的病原学调查研究

对2005年浙江省和广东省部分养殖场南美白对虾的急性传染病病原进行了研究。临床症状发现大部分病虾带有白斑综合症的明显症状,后通过组织病理学观察,PCR检测及测序分析,证实本次病害的主要病原是白斑综合症病毒,说明白斑综合症在对虾养殖中仍存在着流行趋势。     

3种市售养殖对虾白斑综合征病毒(WSSV)的核酸探针检测

对虾白斑综合征病毒是对虾养殖业危害最为严重的病毒, 每年给对虾养殖造成很大经济损失, 已成为对虾养殖业可持续发展的严重障碍。在过去的十几年中, 人们采取各种方法防止白斑综合征病毒的传播。中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis )、凡纳滨对虾( Litopenae vannamei)、日本囊对虾(Marsup enaeus jap onicus)是我国主要的对虾养殖品种, 也是白斑综合征病毒的敏感宿主。按照煮沸- 乙醇沉淀法快速、简便提取市售30 只中国明对虾、28只凡纳滨对虾、29只日本囊对虾DNA, 然后用地高辛标记的核酸探针进行斑点杂交检测白斑综合征病毒,从而了解市场中养殖对虾携带白斑综合征病毒的情况。检测结果显示, 所有样品均未感染白斑综合征病毒, 说明目前白斑综合征病毒在一定程度上得到了有效控制。     

蚯蚓与蝇蛆对中国对虾生长及抗白斑综合征病毒感染的研究

以中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）为实验材料，分别投喂配合饲料、蚯蚓、蛤蜊、蝇蛆等四种饵料，利用生长和抗病性指标综合评价蚯蚓和蝇蛆作为中国对虾饵料的可行性。生长实验前测定每个实验组的初始体长和体重，养殖40d后再次测定生长指标，之后，分别投喂不同毒饵量进行人工感染实验。方差分析表明：投喂四种饵料后，蛤蜊组生长最快，其次是蚯蚓，再次是蝇蛆，最后是配合饲料，各组之间对虾体长增长差异显著（P<0.05），体重增长差异极显著(P<0.01) 。利用线性固定模型分析不同饵料及不同病毒量感染下对中国对虾存活率的影响，其中蚯蚓组存活率最高，配合饲料组存活率最低，并且蚯蚓组存活率显著高于蛤蜊组和配合饲料组(P<0.05)，蝇蛆组显著高于配合饲料组（P<0.05）。研究结果表明：蚯蚓和蝇蛆可显著提高中国对虾的生长速度，明显提高中国对虾的抗病性，是很好的对虾饵料。     

再议东黄渤海带鱼种群划分问题

本研究根据中国水产科学研究院东海水产研究所早年收集的1971—1982年带鱼(Trichiurus lepturus)捕捞统计资料,从地理隔离、数量动态方面分析我国近海带鱼种群的划分问题。研究结果表明,东黄渤海带鱼存在两个种群,即黄渤海种群和东海种群。通过带鱼鱼群移动影像发现,黄渤海带鱼和东海带鱼在江苏北部近海(34?00?N,121?00?E)附近发生了混栖,这一海域的带鱼产量仅占当月总产量的1.16%;两种群带鱼在外海越冬场也发生混栖,这一海域带鱼产量仅占当月总产量的5.51%。本研究认为,之所以分为黄渤海带鱼和东海两个种群,主要证据有6个:其一,可能发生混栖海域带鱼群体的数量很少,均仅占当月带鱼产量的极少数;其二,在混栖海域,不同带鱼鱼群并未发生群体间个体完全混合,在产卵洄游过程中,各自群体将仍旧依照各自洄游路线回到越冬场,因而在产卵场发生遗传杂交的可能性很少;其三,带鱼在越冬场的混合不属于产卵场杂交,因此,不同种群带鱼因为产卵和杂交发生种群遗传性状融合的可能性较少;其四,黄渤海带鱼和东海带鱼有着各自不同的数量变化规律,两者近年来产量差距悬殊,黄渤海种群带鱼资源在衰退的同时,没有得到东海带鱼群体的补充;其五,除了在江苏北部近海和外海发生群体混栖,黄渤海带鱼和东海带鱼各自的分布空间完全隔离;其六,这两个不同带鱼种群在洄游中存在不同的水团背景。结合以往带鱼种群体征差异分析的结果,可以认为,黄渤海带鱼和东海带鱼分属不同的带鱼种群。在东黄渤海,带鱼整体上可以划分为黄渤海带鱼种群和东海带鱼种群。