鲢嗜麦芽窄食单胞菌分离及药敏试验

为调查福建某养殖场鲢大面积死亡原因，对发病死亡的鲢肠道内容物、肛门出血分泌物及养殖塘池水中进行病原菌分离、鉴定，并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果表明，分离鉴定X1为嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）,X2为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila），且这2株菌对鲢具有致病性。在药敏试验中，X1菌株对15种抗生素耐药；X2菌株对新霉素、氯霉素、青霉素G等11种抗生素敏感，对阿莫西林、复方新诺明表现耐药性。     

牛蛙源米尔伊丽莎白菌的分离鉴定与药敏试验

从湖北荆州江陵县患歪头白内障病的牛蛙（Rana catesbeiana）组织中分离病原菌，经生理生化分析和16S r RNA、gyrB基因序列测定鉴定病原菌，并经人工感染试验，进行药敏试验分析，研究其致病性和耐药性。结果显示，从患病牛蛙脑组织中分离纯化到一株优势菌株Mir-N11，经鉴定为米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）。攻毒试验证实：该分离株对牛蛙有较强的致病能力；该菌株对新霉素、庆大霉素、氯霉素等多种药物耐药，对米诺环素、哌拉西林、多西环素等药物敏感。生长特性试验表明：该分离菌株能产生胞外蛋白酶，不产生淀粉酶；在p H3.0～9.0范围内、盐度0.5%～2.5%范围内均可生长。该研究为牛蛙歪头白内障病害的防控提供了参考。     

斑点叉尾鮰暴发性败血症病原的分离与鉴定

从3尾表现出血症状的患病斑点叉尾鮰（lctalurus Punctatus）体内各分离出一株病菌，测定结果显示致其急性死亡的致病菌为温和气单胞菌（Aeromonas sobria），慢性死亡的致病菌分别为嗜水气单胞菌（A．hydrophila）和温和气单胞菌（A．sobria）。药敏试验结果表明：3株菌对广谱抗生素如氨苄青霉素、青霉素、先锋霉素Ⅵ和红霉素等已产生耐药性，而对菌必治、头孢肤肟和复达欣等高度敏感；菌株Jh-1和菌株Yh-3对复方新诺明、四环素、氟哌酸和丁胺卡那霉素高度敏感，而菌株Jh-2却低度敏感；环丙沙星和诺氟沙星对3株致病菌均具较好的抑菌、杀菌作用。     

黑斑蛙歪头病病原米尔伊丽莎白菌的分离、鉴定及特性分析

为查明湖北石首大垸农场养殖的黑斑蛙（Rana nigromaculata）歪头病病原与致病原理，本研究应用微生物分离技术，从病蛙脑、肝、脾和肾脏组织中分离、纯化病菌，采用形态特征、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析进行细菌种类鉴定，通过组织病理学方法分析患病蛙病理损伤，及人工回归感染确定其致病性，并利用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果显示：分离菌（BSH3）与米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）聚为一支，结合该菌的形态学特征和生理生化特征，综合鉴定为米尔伊丽莎白菌。组织病理切片结果表明分离菌（BSH3）会导致蛙脑组织基质水肿，基质中出现空泡和炎性细胞浸润的现象；肝、脾和肾脏组织出现变性、坏死和炎症细胞浸润。人工回归感染试验显示，菌株可使黑斑蛙出现与自然发病蛙相似症状，半数致死浓度为6.3×10⁴ CFU/mL。药敏试验结果表明菌株已呈现多重耐药性，仅对少数检测抗生素（米诺环素、氟苯尼考、利福平和万古霉素）敏感，根据药敏试验结果及农业部水产用药规定，推荐使用氟苯尼考治疗该疾病。     

花鲈弧菌病病原菌（哈维氏弧菌）的分离与鉴定

1999年4－5月，山东省青岛市胶南海区网箱养殖场花鲈（Lateolabrax japonicus)幼鱼发生暴发性传染病，死亡率达50％。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到1株优势菌SF－1，经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF－3菌株的再感染试验结果表明，所分离的菌株为此次花钙烂层病的致病菌，经形态、生理生化等64项特征指标鉴定，SF－1和SF－3均为哈维氏弧菌（Vibrio harveyi)。药敏试验结果表明，头孢噻肟，头孢三嗪，头孢孟多，呋喃妥因，氯霉素,氧哌嗪青霉素，磺胺类，复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶，多粘菌素E等10种药物对该菌株有明显的抑制作用。     

中华鳖弗氏柠檬酸杆菌的分离、鉴定及药物敏感性试验

从患病中华鳖（Trionyx sinensis）内脏中分离到一株细菌（LCJY-002）。ATBExpression型微生物鉴定系统艋示：该菌为弗氏柠檬峻杆菌（Citrobcwter fundii）。16SrDNA分析得到1条长度为1456bp的核甘=酸序列（genBank登录号为KC691177）；Blast分析显示：该分离株与弗氏柠檬酸杆菌的同源性达99％，在系统发育树上与C．frgulldii聚为一支。鉴定结果确认：菌株LCJY-002为弗氏柠檬酸杆菌。人工回归感染试验证文：该菌具有敛病性，PCR检测表明：分离的弗氏柠檬酸杆菌具有c屈毒力因子。药敏试验结果显爪：该菌对16种抗菌药物中的庆大霉素等7种药物敏感。     

湖北吉富罗非鱼源Ⅰa无乳链球菌毒力分析及药敏特性

为探明湖北荆州某养殖场吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia, GIFT)致病原因，对感染的罗非鱼精准施治，本研究从湖北荆州某养殖场患病吉富罗非鱼脑组织分离到一株优势菌。结果显示：该菌在BHI平板上生长出光滑、圆形、白色菌落，显微镜观察发现细菌呈单个、成对或球形短链状，长短不一，且革兰氏染色为阳性。经16S rRNA序列、PCR鉴定和生理生化特性鉴定，确定分离菌株为罗非鱼无乳链球菌，命名为JZ-202108。分离菌株JZ-202108血清型为Ⅰa型，携带gapC、sodA、bac、bca和hly等5种毒力基因。分离菌株JZ-202108人工感染吉富罗非鱼的症状与自然发病症状类似，出现神经症状和严重的内脏出血现象，并从脑组织中分离到强毒株，其LD₅₀为3.4×10⁵ CFU/尾，对吉富罗非鱼致病性较强。药物敏感性实验表明，分离菌株JZ-202108对β-内酰胺类、头孢类药物敏感，对氨基酸糖苷类药物耐药；乌梅、黄连、朱砂、野菊花等中药对JZ-202108菌株有明显抑制作用，乌梅和野菊花在菌株JZ-2...     

养殖欧洲鳗鲡脱粘病的研究

９９６年６月～１０月，对养殖欧洲鳗鲡的脱粘病进行了病原菌分离、人工感染、病原菌生理、生化特性和药物敏感性的测定，观察其病理组织变化。结果认为病原菌为革兰氏阴性、具动力的弧状菌；氧化酶、过氧化氢酶、甲基红反应、吲哚试验、Ｖ－Ｐ反应阳性；对Ｏ１２９敏感、非Ｏ１群霍乱血清凝集阳性；还原硝酸盐；耐盐范围０～６；对氯霉素、四环素、壮观霉素等敏感。鉴定该病原菌为非Ｏ１群霍乱弧菌。主要病理变化为肝细胞肿胀、核固缩，肝脏、肾脏组织内形成坏死病灶区，肠、胃发炎，肠粘膜层坏死、脱落，部分心肌纤维坏死。     

牛蛙背部肿胀病的病原菌分离与鉴定及药敏实验

在广东广州番禺某牛蛙养殖场发现较为特殊的疾病且传染率和死亡率较高，为查明其致病原，从患病牛蛙(Rana catesbeiana)中抽取其背部的积液和对其他病变部位如肝、脾等进行细菌的分离纯化后得到两株优势菌，然后将两株优势菌进行16S rRNA基因测序、进化树构建、革兰氏染色细菌和生理生化实验进行鉴定和分析，结果显示一株菌株GPY923为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),另一株菌株GPY924为海豚链球菌(Streptococcus iniae),进行人工感染后表明其具有较强的致病性。药敏试验结果显示嗜水气单胞菌对丁胺卡那、红霉素、头孢他啶、头孢呋辛、青霉素和氟苯尼考敏感，对多种药物耐药；海豚链球菌对林可霉素和头孢呋辛耐药，对头孢他啶中度敏感，其余药物均敏感。     

方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺（Babylonia areolata）“急性死亡症”进行了病原分离纯化、人工感染试验，以及病原16SrDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌（Vibrioharveyi）；药敏试验结果显示，该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感，而对青霉素表现为耐药；组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。     

中国对虾白黑斑病组织病理学研究↑（*）

报道了中国对虾白黑斑病的肝胰腺、鳃、血液、胃、肠和肌肉等组织的压制片、显微切片及亚显微切片的观察结果。病虾鳃上常见肉芽肿和菌团（３７％），肝胰腺有细小样病毒（ＨＰＶ）包涵体感染（４１％），但这些组织均未出现有规律的因生物性病原侵入而引起的病理组织变化。肉眼所见的白斑和黑斑是由一些大小不等、形状不一的棕黄色和褐色团块状物质沉积而成。超微结构显示这些类似脂褐质物质内没有包被细菌等生物性病原。据观察结果分析，该病为生理性疾病，而非感染性疾病。还讨论了白斑、黑斑的形成与病虾的生理代谢、酚氧化酶作用之间的关系     

白斑综合征病毒感染克氏原螯虾后的PCR检测及组织病理学研究

采用投喂感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)对虾肌肉的方式,对养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)进行人工感染,以确定WSSV对养殖克氏原螯虾的易感性。结果发现,投喂病虾感染组螯虾的死亡率达到90%,而对照组未出现死亡。采用PCR对试验组螯虾的肌肉进行WSSV检测,发现投喂感染组的阳性检出率为100%,对照组的阳性检出率均为0。PCR检测结果发现,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏六种组织的PCR结果均为WSSV阳性,而对照组的各组织检测结果均为阴性。组织切片的光镜观察也证实,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏及血淋巴等组织均发生了不同程度的病变。     

鲤鱼细菌性败血症病原菌的研究

从具有典型细菌性败血症症状的病鱼或濒死鱼中分离到2 株优势菌,经分离培养、人工感染试验、毒力因子、16S rRNA基因序列的测定及药敏试验,研究分离菌的生理生化特征、致病性及药物敏感性.根据2 株分离菌的菌落形态、生化特性和16S rRNA基因序列的测定结果(同源性为99%),确定为嗜水气单胞菌.人工感染试验的症状与自然发病相似,且再次感染后又分离到该菌株.2 株菌对阿米卡星、氨曲南、头孢噻肟等15 种药物均敏感,对氨苄西林均耐药,对复方磺胺表现出菌株差异.对其敏感的15 种药物可作为防治鲤鱼细菌性败血症的首选药物.     

湖北省潜江地区克氏原螯虾(procambarus clarkii)白斑综合征(White Spot Syndrome)PCR诊断及组织病理学观察

近年来在湖北省范围内人工养殖的克氏原螯虾暴发了严重的疾病，其中白斑综合征病毒（WSSV）已成为危害克氏原螯虾健康养殖的重要病原。2016年5月湖北省潜江市养殖区暴发了一种传染性疾病，为探究此次疾病病因和流行规律，将染病虾进行临床症状观察、对病料进行PCR检测、系统发育树分析、人工感染和组织病理学观察。结果显示，发病克氏原螯虾临床症状主要表现为摄食减少，活力下降，反应迟钝；组织病理学观察结果显示，克氏原螯虾的肝胰腺、肠、肌肉、鳃组织均出现不同程度变性和坏死以及炎性细胞浸润等典型病理学变化，与WSSV感染克氏原螯虾出现的病变相似；PCR检测患病克氏原螯虾样品，结果显示WSSV呈阳性，阳性检出率为55.56%（15/27），未检测到斑节对虾杆状病毒（MBV）和传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）；检测产物测序并进行系统发育树分析，结果显示，该基因序列与WSSV的EG3株（KR083866.1）核苷酸序列同源性为100%。将病虾的肝胰腺、肠和肌肉组织投喂健康克氏原螯虾，投喂组均表现为急性死亡（累积死亡率为100%），并出现与自然发病虾相同的症状。WSSV的巢式PCR检测结果显示，人工感染病虾为WSSV阳性。根据以上显示，本次养殖克氏原螯虾大规模死亡的病原是WSSV。     

复方中草药对鲤肝脏转氨酶的影响

在饲料中添加复方中草药对鲤的正常鱼体和利用鱼类败血病的病原菌导致其肝受损后的鱼体进行药效试验,测定投喂前后血清生化指标中转氨酶浓度变化,表明该复方中草药对正常鱼体的肝脏具有保护作用,同时对鱼类败血病病原菌所致的肝损伤有一定的恢复和治疗作用。     

White spot syndrome virus epizootic in cultured Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei (Boone) in Taiwan

White spot syndrome virus (WSSV) has caused significant losses in shrimp farms worldwide. Between 2004 and 2006, Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei (Boone) were collected from 220 farms in Taiwan to determine the prevalence and impact of WSSV infection on the shrimp farm industry. Polymerase chain reaction (PCR) analysis detected WSSV in shrimp from 26% of farms. Juvenile shrimp farms had the highest infection levels (38%; 19/50 farms) and brooder shrimp farms had the lowest (5%; one of 20 farms). The average extent of infection at each farm was as follows for WSSV‐positive farms: post‐larvae farms, 71%; juvenile farms, 61%; subadult farms, 62%; adult farms, 49%; and brooder farms, 40%. Characteristic white spots, hypertrophied nuclei and basophilic viral inclusion bodies were found in the epithelia of gills and tail fans, appendages, cephalothorax and hepatopancreas, and virions of WSSV were observed. Of shrimp that had WSSV lesions, 100% had lesions on the cephalothorax, 96% in gills and tail fans, 91% on appendages and 17% in the hepatopancreas. WSSV was also detected in copepoda and crustaceans from the shrimp farms. Sequence comparison using the pms146 gene fragment of WSSV showed that isolates from the farms had 99.7–100% nucleotide sequence identity with four strains in the GenBank database – China ( AF332093 ), Taiwan ( AF440570 and U50923 ) and Thailand ( AF369029 ). This is the first broad study of WSSV infection in L. vannamei in Taiwan.     

克氏原螯虾白斑病毒株(WSSV-Cc)基因组的一个印迹

从自然感染、濒死的克氏原螯虾中分离出的白斑病毒株(Cambarus clarkii whispovirus,WSSV-Cc或Cc株)是一株基因组较小的新毒株。为寻找白斑病毒进化过程在基因组中留下的印迹,进行了显微和超微观察、基因组架构与系统发育分析及相关基因扩增等研究。选择Cc株74L、86L、87R、88R、92R和95R的6个基因,与8个白斑病毒株的同源基因所编码蛋白序列构建进化树,结果可分为克氏原螯虾病毒(Cc株、CN02株、Pc株)和海水对虾病毒(CN株、CN01株、CN03株、CN04株、TW株和KR株) 2支。再对不同毒株的同源蛋白进行多重序列比对,显示Cc-87R是与海水对虾病毒株同源蛋白差异显著、缺失跨膜区(TMD)及其相邻287 aa序列、但仍有完整PI3K_rbd结构域的病毒膜蛋白。进一步设计和使用87R-F/87R-R和238-F/87R-R两对引物,分别以淡水小龙虾病毒Cc株和海水对虾病毒CN株的基因组为模板进行核酸扩增,结果从Cc株模板中扩增到大小为709 bp,含Cc-87R全部序列的核酸片段;而从CN株的模板中却扩增到大小分别为1 600和4 810 bp,仅含Cc-87R部分序列的核酸片段,为Cc-87R是Cc株基因组中一个序列结构独特的印迹提供了实验证据。这一发现将有助于克氏原螯虾白斑病毒病原的检测及其流行趋势预警。     

Comparative study on the nutrition composition of adult male Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis) with different coloured hepatopancreases

High lethality of white hepatopancreas syndrome has caused large economic loss of Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis). Hepatopancreas colour of diseased crabs is gradually lighter, turning from golden yellow to yellow‐white to white. This study investigated composition of conventional nutrients in three edible parts of different coloured hepatopancreases of adult males, including normal yellow hepatopancreas group (Control), yellow‐white hepatopancreas group (YWH) and white hepatopancreas group (WH). No significant differences were observed in tissue indices and total edible yield among three crab types; however, condition factor level in crabs of YWH and WH was significantly lower. Dry matter content was significantly reduced in crabs of WH, especially crude fat level of hepatopancreas in WH males. Levels of all the amino acids of WH crabs in muscles and gonads were significantly lower than that of control. Proportion of saturated fatty acids and monounsaturated fatty acids were much lower in hepatopancreas of WH crabs than those of control, while proportion of polyunsaturated fatty acids and highly unsaturated fatty acids were significantly higher. Overall, YWH and WH do not affect growth. WH crabs showed poor nutritional quality, and nutritional value of YWH was in the middle as transition state between control and WH.     

长三角地区罗氏沼虾成虾主要疾病的病原研究

2009年8月-2010年8月在长三角地区开展了罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)成虾主要疾病的流行病学调查.结果显示:所采集病样按其症状分为肌肉白浊病(以上海和浙江病样为主)、蓝体病(以江苏病样为主)、红体病(以浙江病样为主)三类.从采集的罗氏沼虾病样中分离到优势细菌11株,人工感染健康罗...