热应激对大正三色锦鲤非特异性免疫指标及HSP70基因表达的影响

为探讨锦鲤的抗逆机理,在实验室条件下研究了持续热应激对大正三色锦鲤非特异性免疫指标及HSP70基因相对表达量的影响.分别于应激前、应激后2、6、10、14、18、22、26 h进行取样测定呼吸爆发、补体蛋白3(C3)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及热休克蛋白70 (HSP70)基因的相对表达量.结果发现,热应激后呼吸爆发降低,在应激后2、10、18～26 h降低显著(P＜0.05)；热应激2h后血清中C3含量略有上升,应激6～26 h过程中与应激前相比均下降,应激14 ～ 22 h显著地下降(P＜0.05)；热应激下血清中SOD有上升的趋势,但差异不显著(P＞0.05)；热应激下,血清中MDA浓度升高,应激10～18 h上升显著(P＜0.05)；应激后2、26 hHSP70基因的相对表达量与应激前相比显著性地上升了5.93倍、2倍(P＜0.05),应激后6～22 hHSP70基因的相对表达量与应激前水平无显著性差异(P＞0.05).结果表明,热应激影响锦鲤非特性免疫指标,降低锦鲤非特异性免疫力；HSP70的表达受热应激调节,热应激下诱导合成的HSP70对锦鲤起到一定的应激保护作用.     

热应激对银鲫生化指标和HSP70 mRNA表达的影响

本研究旨在探讨热应激对银鲫(Carassius auratus gibelio)生化指标及肝脏HSP70 mRNA表达的影响，选取平均体重为(72.8±10.1) g的银鲫，分别在热应激前(25℃，对照组)、热应激后(32℃，0 h、2 h、6 h、10 h)和恢复适温后6 h (25℃，恢复组)的条件下，测定机体血浆乳酸(LD)、血浆葡萄糖(Glu)、肝糖原(Gly)、己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和肝脏HSP70 mRNA表达量变化。研究表明，实验组乳酸含量从热应激开始至恢复期，差异始终不显著(P>0.05)；实验组血浆葡萄糖水平在热应激后0 h、2 h、6 h，极显著高于对照组(P<0.01)；实验组肝糖原水平在热应激0 h时，极显著高于对照组(P<0.01)，其余时间点差异不显著(P>0.05)；己糖激酶活力在热应激后2 h，显著高于对照组(P>0.05)；丙酮酸激酶活力在热应激后6 h，极显著高于对照组(P<0.01)；热应激后2 h，肝脏中HSP70 mRNA表达量达到最高(P<0.01)，恢复至适温后，表达量与应激前无差异(P>0.05)。本研究为进一步探究银鲫的高温应激作用机制及调控机理提供参考数据，同时，也为银鲫养殖和育种等生产实践提供相应参考依据。     

Cd对凡纳滨对虾血细胞活性氧含量(ROS)、细胞凋亡率及应激反应基因表达的影响

为探讨镉(Cd)对虾类血细胞的免疫毒性, 以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象, 设置 0 mg/L 对照组和 10.5 mg/L Cd 处理组, 利用流式细胞仪检测血细胞中的活性氧含量(ROS)和细胞凋亡率, 并利用实时荧光定量 PCR 技术检测血细胞中抗氧化酶(Cu-Zn SOD、CAT 和 GPx)、金属硫蛋白(MT)、热休克蛋白(HSP60、HSP70 和 HSP90)以及 caspase-3 基因的表达量变化。结果显示, 与对照组相比, Cd 胁迫导致血细胞 ROS 含量在胁迫后 3~48 h 极显著升高(P<0.01), 在 24 h 达到最大值; 细胞凋亡率在 3 h 达到最大值 87.99 %(P<0.01), 在 12~48 h 显著升高 (P<0.05); Cu-Zn SOD 和 HSP60 基因表达水平分别在 3~48 h 和 12~48 h 显著升高(P<0.05); GPx 基因表达量在 12 h 和 48 h 显著上调(P<0.05); CAT、MT、HSP60 和 HSP90 的基因表达水平在胁迫 3 h 显著下降(P<0.05), 在胁迫后期显著升高(P<0.05); HSP70 表达量在 3~24 h 无显著变化(P>0.05), 在 48 h 显著上升(P<0.05); caspase-3 基因表达水平在 12~24 h 显著上升(P<0.05)。综上所述, Cd 诱导血细胞产生过量 ROS, 影响应激反应基因的表达水平, 最终促进细胞凋亡。     

克氏原螯虾对高温应激的生理学响应

本实验旨在研究高温对克氏原螯虾(Procambarus clarkia)血液生化指标、抗氧化能力以及热休克蛋白70基因表达的影响。实验分别采用30℃和35℃水温进行高温应激试验,应激前(0 h)和在应激后3、6、12、24和48 h分别采集样本,测定血淋巴液中LDH、GLU、TCHO、TP和TG含量,测定肝胰腺T-AOC、CAT、MDA以及HSP70基因的表达变化。结果显示:在高温应激的初级阶段(6 h),克氏原螯虾血淋巴中的TCHO和LD含量急剧上升,而GLU含量持续上升到24 h;TG含量在应激的初级阶段变化不明显,但在6 h后急速上升,在12 h达到最高后开始回落;TP的含量在初级阶段出现下降,然后在12 h恢复至应激前水平。肝胰腺中的MDA含量在应激后持续上升,在24 h后达到最高值,随后下降至应激前水平;T-AOC在应激后3 h上升至最高水平,随后降低;CAT的含量分别在应激后6 h和12 h上升至最高值然后回落。HSP70基因在应激前未检测到有表达,高温应激后3 h即可检测到少量表达,35℃组在6 h出现大量表达,并持续到12 h,随后24 h降低至无法检出;而30℃组在应激6 h后降低至无法检出。结果表明,30℃和35℃高温能引起克氏原螯虾机体产生应激反应,并对机体的生理机能产生影响。     

氨氮胁迫对凡纳滨对虾肠道免疫相关指标的影响

为研究急性氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道免疫功能的影响,将对虾暴露于氨氮浓度为20 mg·L^-1的海水中72 h,测定了不同时间点肠道中抗病原感染指标如酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)、溶菌酶(Lys)、酚氧化酶原(proPO)以及抗氧化功能指标如总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)等变化。结果显示,与对照组相比,氨氮胁迫后:1)ACP和ALP活性均于6 h显著升高(P<0.05),随后于48~72 h显著低于对照组(P<0.05);Lys活性于24 h显著升高至最大值(P<0.05),随后于72 h显著低于对照组(P<0.05)。2)T-AOC和SOD活性均于6 h和12 h显著高于对照组(P<0.05),随后于48 h和72 h显著降低(P<0.05)。3)HSP70基因表达水平于24 h显著升高至最大值,随后虽有降低,但仍显著高于对照组(P<0.05);HSP90和proPO基因表达水平均于12 h显著升高至最大值(P<0.05),随后于72 h降低至对照组水平(P>0.05)。研究表明,急性氨氮胁迫对凡纳滨对虾肠道免疫功能相关指标影响显著,对其肠道免疫防御系统有明显的损伤作用。     

高碳水化合物日粮对异育银鲫血浆皮质醇含量和HSP70基因mRNA表达的影响

为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35％的日粮；另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50％的日粮,每组3个重复.在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量.结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P＜0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P＜0.05)； 70 d时血浆皮质醇激素含量升高,且70 d时高碳水化合物组肝、心脏、脾和肾HSP70基因mRNA表达与对照组相比全部增强.各组饲养70 d后,饥饿24 h后重新投喂的0h、6h、12h、24 h、48 h,高碳水化合物实验组(HS)皮质醇含量在6h、48 h显著高于对照组(P＜0.05),在6h、12h、48 h肝HSP70基因mRNA表达与对照组相比均增强(P＜0.05),说明异育银鲫对50％碳水化合物含量的饲料的耐受性比较差,鱼体产生了应激反应.结果说明,当异育银鲫血清皮质醇激素含量升高时,其肝中HSP70基因mRNA的表达量却降低,反之亦然.本研究旨在为水生动物营养应激及营养免疫的相关研究提供新的思路,为开辟鱼类应激的营养调节提供科学依据.     

皱纹盘鲍南北方群体的高温应激和生长差异

为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)经过杂交和南方养殖后,南方群体(杂交群体)是否与北方群体(自交群体)在适温性上是否产生了差异,从而是否更加适应南方高温环境,本研究开展了皱纹盘鲍南北方群体的高温应激和南方地区养殖实验。高温应激实验中:经过30℃应激后,南方群体恢复期所有取样组织中HSP70在0 h的表达量都显著高于北方群体(P0.05),HSP90在外套膜和肝胰脏中的表达量也高于北方群体(鳃中的表达量略低但差异不显著);经过33℃应激后,南方群体HSP70和HSP90在足、外套膜和鳃0 h表达量都显著高于北方群体(P0.05)。养殖实验中:从12月开始至翌年2月水温不超过17.11℃,为北方群体的快速生长期,生长快于南方群体;从3月开始,水温逐渐超过20℃,北方群体生长慢于南方群体,同时北方群体开始出现死亡现象,7月北方群体大量死亡,存活数量不足30粒。综合HSP70、HSP90的高温应激表达和养殖实验结果,可以得出:皱纹盘鲍经过杂交和南方累代养殖后,适温上限有所提高,已与北方群体产生较大差异,可适应较高的水温;30℃水温刺激下南北方群体的HSP70的相对表达量与对高温的耐受性具有正相关性,可以在鲍的抗高温选育种中进行辅助筛选。     

注射热休克蛋白促进剂或抑制剂后异育银鲫感染CyHV-2时生理状态的响应

鉴于异育银鲫鳃出血病与温度相关的发病特征,分别对异育银鲫注射HSP70抑制剂和促进剂进行了其体内热休克蛋白的人工干预。研究发现,养殖池塘自然发病的具有鳃出血病典型症状的异育银鲫,其肝脏内HSP70基因的表达量与健康异育银鲫相比明显升高,人工感染Cy HV-2病毒后,肝脏内HSP70表达量在24h后显著增加,当鱼体表现出发病症状时,HSP70表达量极显著上升。对照组在人工感染Cy HV-2后,血清中天门冬氨酸氨基转移酶在鱼体发病时显著升高,且在发病时与注射促进剂和抑制剂组都有极显著差异;注射HSP70促进剂组在人工感染CyHV-2后,血清中天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶在12h时显著升高。注射HSP70抑制剂的异育银鲫体内病毒数在感染病毒后12h时,就达到最高点,明显高于对照组及注射促进剂组的同时间段病毒数。说明HSP70在抵御病毒的增殖中具有一定的积极作用。     

盐度、pH对文蛤肌肉、鳃、外套膜HSP70基因表达的影响

为探讨池塘养殖文蛤的适宜盐度和pH范围,以β-actin为内参基因,采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术,检测不同盐度(16、18、20、22、24)和pH(6.7、7.7、8.7、9.7、10.7)梯度下文蛤肌肉、鳃、外套膜中HSP70基因mRNA的表达水平。结果显示,盐度16、18、22、24处理组肌肉中HSP70基因的表达量显著高于盐度20的对照组(P0.05);除盐度18组鳃和盐度24组外套膜HSP70基因的表达量与对照组差异不显著外(P0.05),16、18、22、24盐度组鳃和外套膜中HSP70基因的表达量均显著高于对照组(P0.05)。pH 6.7、7.7、9.7、10.7处理组肌肉、鳃、外套膜中HSP70基因的表达量与pH为8.7的对照组差异显著(P0.05)。试验结果表明,超出一定盐度、pH范围,可显著诱导文蛤肌肉、鳃、外套膜中HSP70基因的过量表达,研究结果可为池塘文蛤的健康养殖提供参考。     

热休克及菌胁迫对厚壳贻贝HSP70基因表达的影响

70 ku的热激蛋白(HSP70)具有细胞内分子伴侣和细胞外免疫调节功能,是受到热激、重金属、干旱、疾病、寄生虫感染等条件胁迫后产生的诱导蛋白。本实验利用同源克隆法,获得厚壳贻贝HSP70基因1 700 bp的核心序列,BLAST比对和系统进化分析显示,该序列与已知的双壳贝类相应分子高度同源,其中与紫贻贝HSP70基因相似性高达96%,在进化树中两者位于同一分支。37 ℃热激后,厚壳贻贝肝胰腺和鳃中HSP70基因的表达快速上调,2 h即达到对照组30倍,随后持续上升,肝胰腺中最高表达量达到对照组100倍,说明厚壳贻贝HSP70分子为典型的热诱导蛋白。鉴于大肠杆菌及枯草芽孢杆菌是水体中常见微生物,进一步利用实时荧光定量PCR技术检测上述两种细菌感染后,HSP70基因在厚壳贻贝鳃和肝胰腺中的表达水平,结果显示,两种细菌均可引起厚壳贻贝鳃和肝胰腺的HSP70基因表达上升,但大肠杆菌诱导效应显著,8 h时表达量达到最高,鳃为对照组的4倍,肝胰腺为4.5倍,随后逐渐下降,到48 h已恢复到原始水平;枯草芽孢杆菌刺激后,肝胰腺组织中最高表达量在刺激后6 h约为对照组2.5倍,与注射PBS的效果相差不大,鳃组织的响应较肝胰腺组织明显,表达量缓慢升高,8 h达到最高,为对照组4倍,随后迅速下降,直至生理水平。研究表明,厚壳贻贝HSP70分子在调节环境胁迫及宿主免疫防御中具有重要功能。     

吡啶甲酸铬对热应激异育银鲫血清生化指标的影响

选取240尾初始体重为(31.80±1.07)g的异育银鲫(Carassius auratus gibelio),分为4组,分别饲喂在基础饲料中添加0μ/kg(对照组和热应激1组)、300μg/kg(热应激2组)、600 μg/kg(热应激3组)吡啶甲酸铬(以Cr3+计)的试验饲料,在室内可控温循环水养殖系统中常温(2...     

The effect of dietary folic acid on biochemical parameters and gene expression of three heat shock proteins (HSPs) of blunt snout bream (<Emphasis Type="Italic">Megalobrama amblycephala)</Emphasis> fingerling under acute high temperature stress

The effects of dietary folic acid on biochemical parameters and gene expression of three heat shock proteins (HSPs) of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) fingerling under acute high temperature stress. Six dietary folic acid groups (0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, and 10.0) mg/kg diets were designed and assigned into 18 tanks in three replicates each (300 l/tank) and were administered for 10 weeks in a re-circulated water system. The fingerlings with an initial weight of 27.0 ± 0.03 g were fed with their respective diets four times daily. At the end of the experiment, samples were collected before challenge, 0, 24, 72 h, and 7 days. Serum total protein (TP), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), cortisol, glucose, complement C3 (C3), complement C4 (C4, immunoglobulin M (IgM) hepatic superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), and the expression of heat shock protein 60 (HSP60), 70 (HSP70), and 90 (HSP90) were studied. The results showed that fish fed with dietary folic acid between 1.0, 2.0, and 5.0 mg/kg significantly (P < 0.05) increased serum TP, C3, C4 hepatic SOD, CAT, and the expression of HSP60, HSP70, and HSP90 before and after temperature challenge of 32 °C. Also, serum ALP, cortisol, glucose, and hepatic MDA were significantly (P < 0.05) reduced by supplementation of dietary folic acid level 1.0, 2.0, and 5.0 mg/kg before and after the same temperature challenge of 32 °C. Before stress, 0, 24, 72 h, and 7 days significantly (P < 0.05) affects serum biochemical parameters, immune and antioxidant capacities, and expression level of three HSPs. Furthermore, there was no statistical evidence to show that dietary folic acid inclusion level and temperature duration have significant interactive effect on serum biochemical parameters, antioxidant parameters, and gene expression level (P > 0.05) of the three HSPs. However, there were statistical significant interactive effect between dietary folic acid inclusion level and temperature duration on serum C3 and C4 (P < 0.05) except IgM (P > 0.05). The present results indicate that supplementation of basal diet from 1.0 mg/kg; 2.0 and 5.0 mg/kg can enhance acute high temperature resistance ability in M. amblycephala fingerling to some degree and improve physiological response, immune and antioxidant capacities, and expression level of three HSPs.     

丙氨酰—谷氨酰胺投喂方式对建鲤生长和抗急性拥挤胁迫能力的影响

以初始体质量为(33.52±0.17)g建鲤为研究对象,在室内单循环养殖系统中进行8周(w)生长试验,分别配制成添加0.0%(对照)和0.5%(试验)丙氨酰—谷氨酰胺(Ala-Gln)的等氮等能(35%CP、17 kJ/g)饲料,采用5种投喂方式:连续8 w投喂对照饲料(Ⅰ);试验饲料2 w间隔投喂(Ⅱ);前4 w投喂试验饲料,后4 w投喂对照饲料的间隔投喂(Ⅲ);前4 w投喂对照饲料,后4 w投喂试验饲料的间隔投喂(Ⅳ);8 w连续投喂试验饲料(Ⅴ)。养殖试验结束时,进行急性拥挤胁迫试验。探讨Ala-Gln投喂方式对建鲤生长和抗急性拥挤胁迫能力的影响。结果表明,Ala-Gln连续投喂和间隔投喂组的生长都显著高于对照组(P<0.05)。2 w间隔投喂的特定生长率都显著高于4 w间隔和连续8 w投喂的饲料组(P<0.05);前4 w间隔投喂组的特定生长率要显著高于8 w连续投喂组(P<0.05)。血清皮质醇和血糖分别在急性胁迫后恢复0和1 h时达到高峰,血清HSP70在胁迫后恢复1～12 h都保持较高水平,然后下降,胁迫后恢复48 h达到胁迫前的水平。各种投喂方式组的血糖和血清皮质醇含量都显著低于对照组(P<0.05)。胁迫后恢复期,血糖迅速升高幅度最小的是2 w间隔投喂组,最先恢复到胁迫前状态的是2 w间隔投喂组和前4 w投喂的4 w间隔投喂组。胁迫后恢复期,各投喂组的血清HSP70都显著高于对照组(P<0.05),胁迫后恢复48和72 h时,后4 w投喂的4 w间隔投喂组和连续8 w的投喂组的血清HSP70显著高于对照组(P<0.05)。     

Effects of dietary α‐ketoglutarate supplementation on the antioxidant defense system and HSP 70 and HSP 90 gene expression of hybrid sturgeon Acipenser schrenckii ♀ × A. baerii ♂ exposed to ammonia‐N stress

This study was conducted to determine the effects of dietary α‐ketoglutarate (AKG) supplementation on the antioxidant defense system and gene expression of heat shock protein (HSP) 70 and HSP 90 in hybrid sturgeons Acipenser schrenckii ♀ × A. baerii ♂ exposed to ammonia‐N stress. A 2 × 3 factorial experiment was arranged, in which each diet (0%, 1% AKG) was randomly assigned to 0.25 (control) 5 and 10 mg L^?1 ammonia‐N groups with three replicate aquaria for each 72 h. The 10 mg L^?1 ammonia‐N significantly increased serum ammonia concentrations and intestinal Gln concentrations and GS activity compared with the 0.25 or 5 mg L^?1 ammonia‐N groups. The intestinal Gln concentration and GS activity increased, and the serum ammonia concentration decreased, in fish given dietary supplementation of 1.0% AKG compared with fish given diets without AKG. Superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) activity in serum, gills and intestines decreased when fish were exposed to 5 or 10 mg L^?1 ammonia‐N, and their activity increased in fish given diets with 1% AKG. Catalase in the serum and gills decreased when fish were exposed to 5 or 10 mg L^?1 ammonia‐N and increased in fish given diets with 1% AKG. The 10 mg L^?1 ammonia‐N or 1% AKG supplementation increased HSP 70 and HSP 90 gene expression in the liver. The increased activity of antioxidant enzymes, and increased HSP 70 and HSP 90 gene expression in fish fed diets containing 1% AKG suggested higher tolerance to ammonia‐N stress.     

Physiological responses and HSP70 mRNA expression in GIFT tilapia juveniles,Oreochromis niloticus under short‐term crowding

Physiological responses and HSP70 mRNA expression to short‐term crowding were tested in juveniles genetically improved farmed tilapia (Oreochromis niloticus) (70.43 ± 4.43 g). Fish were kept at control group (5 g L^?1) and stress groups (low density 10 g L^?1, medium density 40 g L^?1 and high density 70 and 100 g L^?1) for 48 h. Each density was tested in triplicates. The effects of a short‐term exposure on the physiological responses of fish were determined before stress (0 h) and at 6, 12, 24 or 48 h post‐crowding. There was a significant increase in serum cortisol, total protein, lysozyme and aspartate aminotransferase (AST) activities in all stressed groups at 24 h post‐crowding (P < 0.05). Serum glucose and alanine aminotransferase (ALT) of 100 g L^?1 stressed group were lower than that of the control after 48 h of crowding stress (P < 0.05). The levels of serum triglyceride and cholesterol in crowding stress with high density were significantly decreased compared with the control group at 48 h. The mRNA expression data showed that hepatic HSP70 mRNA levels were markedly elevated at all stressed groups. HSP70 mRNA levels of 70 and 100 g L^?1 stressed groups decreased at 48 h compared with the 24 h post‐crowding. The protective ability of HSP70 was limited.     

发酵南极磷虾粉替代鱼粉对锦鲤生长、体色及血清生化指标的影响

为探讨发酵南极磷虾(Euphausia superba)粉替代鱼粉对锦鲤(Cyprinus carpio L.)生长、体色和血清生化指标的影响，以初始体质量为(4.92±0.22) g的锦鲤450尾为实验对象，随机分为5组，每组设置3个重复，每个重复30尾鱼，对照组添加未发酵的脱脂南极磷虾粉，实验组添加由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和复合菌(1∶1∶1)发酵的脱脂南极磷虾粉，分别命名为ES (对照组)、EF、LP、CB和MIX，南极磷虾粉的添加量均为200 g/kg，共投喂70 d。结果表明，与对照组相比，发酵南极磷虾粉替代鱼粉显著提高了锦鲤的终末体质量、特定生长率和增重率(P<0.05)，MIX组的终末体质量、特定生长率和增重率显著高于其他组(P<0.05)。实验组皮肤和鳞片中类胡萝卜素含量显著增加(P<0.05)，红色(a*)值、黄色(b*)值以及tyr在皮肤和鳞片中相对表达量显著提高(P<0.05)，MIX组的a*值、b*值和基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05)。实验组血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量均显著提高(P<0.05)，谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)比值和丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05)。对照组锦鲤肝细胞出现脂滴和空泡化现象。研究表明，在脱脂磷虾粉添加水平为20%的锦鲤饲料中，使用复合菌对磷虾粉进行发酵能有效提高磷虾粉的吸收和转化利用率。     

大黄素、维生素C及其配伍对团头鲂感染嗜水气单胞菌后生理生化指标的影响

为综合评价大黄素、高剂量维生素C及其配伍对团头鲂(Megalobrama amblycephala Yih)抗嗜水气单胞菌感染能力的影响,选取1 200尾健康的团头鲂,体质量为(133.44±2.11)g,随机分成4组,其中1组为对照组,投喂基础日粮,另外3组在基础日粮中分别添加60mg/kg大黄素、700 mg/kg维生素C、60mg/kg大黄素+700mg/kg维生素C(配伍组).饲养60 d后,经腹腔注射感染嗜水气单胞菌,并在攻毒前后检测团头鲂血液和肝脏的生化指标以及肝脏2种热休克蛋白70s(HSP70s)mRNA的表达水平;另从各池中取10尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点鱼的累积死亡率.结果表明,攻毒后,与对照组相比,大黄素、维生素C组不同程度地提高了血清总蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)和碱性磷酸酶(AKP)的水平,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及HSC70和HSP70 mRNA的表达水平,降低了血清皮质醇(COR)、血糖(GLU)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、甘油三酯(TG)以及肝脏丙二醛(MDA)的水平;配伍组中,这些指标的变化趋势虽与上述类似,但大多与对照组的差异不显著(P＞0.05),且未表现出协同增效作用.此外,各组鱼血清胆固醇(CHOL)的含量在攻毒前后的差异均不显著(P＞0.05).统计也表明,大黄素和维生素C组鱼的累积死亡率在攻毒后24 h、48 h均显著低于对照组(P＜0.05),而配伍组试验鱼的累积死亡率与对照组差异均不显著(P＞0.05).由此可见,在基础日粮中添加大黄素60 mg/kg或维生素C 700 mg/kg,可提高鱼体的非特异性免疫力、抗氧化能力以及2种HSP70s mRNA的表达水平,增强鱼体抗病原菌感染的能力.二者配伍则效果不佳.     

海豚链球菌感染对不同品系罗非鱼血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达的影响

以吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和红罗非鱼为研究对象,饲养100d后,进行海豚链球菌(2.95×108CFU/mL)感染试验,分析攻毒前后各品系罗非鱼的血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达量的变化规律。另从各桶中取20尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点的累积死亡率。结果表明,感染海豚链球菌96h后,吉富罗非鱼和新吉富罗非鱼对病原较为敏感,累积死亡率分别达到36.67%和38.33%;埃及尼罗罗非鱼对病原敏感性较差,试验期间未见死亡。吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼和红罗非鱼血清皮质醇和葡萄糖水平以及肝脏HSP70 mRNA的表达量在攻毒后明显提高,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶与溶菌酶活力也呈上升趋势,碱性磷酸酶活力与甘油三酯和胆固醇水平低于攻毒前。埃及尼罗罗非鱼可以利用糖原和脂类产生的能量,提高了HSPS与一些特定免疫蛋白(溶菌酶、球蛋白等)的合成,增强了鱼体的非特异性免疫力。罗非鱼选育过程中,需要将抗病力与生长性能进行有效的结合,在注重生长速度的同时也要增强其抗应激能力,从而为罗非鱼产业的可持续发展提供保证。     

Anti-stress properties and two HSP70s mRNA expressions of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) fed with all-plant-based diet

The influence of all-plant-based diet on fingerling blunt snout breams (Megalobrama amblycephala) was tested by examining growth performance, anti-stress properties and related gene expression. Healthy fish were randomly divided into triplicate groups per dietary treatment and fed with different formulated diets. The results showed that both weight gain, specific growth rate and protein efficiency ratio of all-plant-based diet group were significant higher than those of the control (p < 0.05). In contrast, FCR of all-plant-based diet group was significantly lower than that of the control (p < 0.05). Therefore, all-plant-based diets could not affect the growth performance of blunt snout breams. Compared to the control group, the lysozyme levels in serum and mucus, and glutamic-oxaloacetic transaminase activities in serum and liver decreased significantly (p < 0.05). In contrast, the glutamic-pyruvic transaminase activities in serum and liver increased significantly (p < 0.05). For blunt snout breams fed with all-plant-based diets, the superoxide dismutase activities in mucus, serum and liver as well as catalase activity in serum and liver were decreased significantly (p < 0.05) comparing with that of the control group. But malondialdehyde contents were higher (p < 0.05) in serum and liver than that of control group. The expression of HSC70 mRNA increased significantly (p < 0.05) in blunt snout breams fed with all-plant-based diet, whereas the HSP70 mRNA expression decreased significantly (p < 0.05) when compared with control group. In conclusion, all these results indicated that the application of all-plant-based diet could decrease the anti-stress properties (non-specific immunity, stress resistance and antioxidant ability) and HSP70 mRNA expression in blunt snout breams fingerling. Although all-plant-based diets could not affect the growth performance of blunt snout breams, the application of all-plant-based diet should be discreet in the production practice.