鲢、鳙染色体基因文库的构建

鲢、鳙染色体基因文库的构建王朝元，汤伏生，龙华（中国水产科学研究院长江水产研究所，荆沙市４３４０００）实验材料和方法（一）材料鲢（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓｍｏｌｉｔｒｉｘ）鳙（Ａｒｉｉｓｔｃｈｔｈｙｓｎｏｂｉｌｉｓ）基因工程菌、酶等试剂均...     

鲢、鳙胰蛋白酶的研究

鲢、鳙胰蛋白酶的研究黄峰，严安生，汪小东（华中农业大学，武汉４３００７０）关键词鲢，鳙，胰蛋白酶ＳＴＵＤＩＥＳＩＮＴＲＹＰＳＩＮＩＮＳＩＬＶＥＲＣＡＲＰＡＮＤＢＩＧＨＥＡＤＣＡＲＰ￥ＨｕａｎｇＦｅｎｇ；ＹａｎＡｎｓｈｅｎｇａｎｄＷａｎｇＸｉａｏｄｏｎ...     

蛤蟆通水库鱼类组成和鲢、鳙生长规律的研究

蛤蟆通水库的鱼类区系组成现有鱼类９科２６种，其中鲤科鱼类占６２％。实行人工放养后鲢、鳙占优势，年产量占总渔获量的８０％以上。鲢、鳙的体长（Ｌ）与体重（Ｗ）相关关系式分别为ＬｏｇｗＨ＝２．９６５８ＬｏｇＬ－１．６７８８、ＬｏｇｗＡ＝３．１２５４ＬｏｇＬ－１．９２４５。同时应用ｖｏｎＢｅｒｔａｌａｎｆｙ生长方程［２］计算鲢、鳙的生长参数为：Ｌ∞（Ｈ）＝１３６．５ｃｍ，Ｌ∞（Ａ）＝１６１．９ｃｍ；Ｗ∞（Ｈ）＝４５０３４ｇ，Ｗ∞（Ａ）＝９５２４０ｇ；Ｋ（Ｈ）＝０．０９６９，Ｋ（Ａ）＝０．０８０２；ｔ０（Ｈ）＝－０．１３３６，ｔ０（Ａ）＝－０．２２９３。生长拐点处的体重分别是１３３３６ｇ（０．２９６Ｗ∞（Ｈ）和）２８３２４ｇ（０．３０Ｗ∞（Ａ））     

保护和开发我国特有的世界著名观赏鱼种--塘鱼

鲤科鱼类在观赏鱼类中占据特殊的地位。我国从宋代开始饲养鲫鱼的变异品种金鲫，从池养到盆养，通过人工选择、纯化、杂交、定向培育出形形色色的金鱼品系几十个。金鱼被作为世界人民共同喜爱的观赏鱼类遍及世界各国。除了金鱼之外，中国特有的塘鱼，也以其色彩鲜艳夺目，而成为一种世界著名的观赏鱼类。 塘鱼（Ｔａｎｉｃｈｔｈｙｓ ａｌｂｏｎｕｂｅｓ Ｌｉｎ）俗称红尾鱼、白云金丝、白云山鱼，英文名为Ｗｈｉｔｅ ｃｌｏｕｄｍｏｕｎｔａｉｎ ｍｉｎｎｏｗ。隶属鲤形目鲤科　亚科Ｄａｎｊｏｎｉｎａｅ塘鱼属Ｔａｎｉｃｈｔｈｙｓ，是我…     

鳙小卫星DNA的克隆

鳙基因组ＤＮＡ 经内切酶Ｓａｕ３ＡⅠ完全酶切后，与Ｂａｍ ＨⅠ－ ｐＵＣ１８ 质粒连接，转化ＤＨ５α后，获得９３３ 个重组体。用人源小卫星探针３３ ．１５ 对重组体进行原位杂交筛选，获得１４ 个阳性克隆，取其中的１ 个阳性克隆（ 即小卫星ｐＢＣ１７４） 作探针，与５ 尾鳙和４ 尾鲢基因组ＤＮＡ 杂交，能产生具有高度变异性的、个体特异性的ＤＮＡ 指纹图，表明克隆的鳙小卫星ｐＢＣ１７４ 可用于鱼类ＤＮＡ 指纹分析。     

鲢染色体图象电脑自动核型分析↑（*）

应用ＩＢＡＳ－２０００图象分析系统对鲢（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓｍｏｌｔｔｒｉｘ）染色体进行自动核型分析，获得比较准确的鲢染色体相对长度、臂比、着丝点指数数据和核型标准图象信息。染色体组型２ｎ＝４８，核型公式１８ｍ＋２２ｓｍ＋８ｓｔ，总臂数（ＮＦ）为８８。与常规方法比较，该方法重现性好，准确性高，速度快，图形和数据能永久保存，便于建立鱼类染色体标准图形信息库。     

长江天鹅洲故道“四大家鱼”种质资源天然生态库建库可行性研究

天鹅洲故道水面面积为１３．７－３０．０ｋｍ＾２。据１９９１－１９９４年的调查，该故道具有以下优良性状：（１）水质好，溶解氧为５．７－１０．５ｍｇ／ｍｌ，透明度为０．３－１．７５ｍ。（２）水生生物丰富，共有１６门，３０６种。（３）鱼类种类繁多，计有９目１８科７７种。（４）家鱼资源丰富，性状优良。每年７－８月约有近２０万尾鲢、鳙、草、青鱼苗种进入故道育肥，其渔获量在７万ｋｇ左右；生长参数的比较分析证明     

溴氰菊酯对黄鳝的急性毒性试验

采用常温静水实验法进行溴氰菊酯对黄鳝（Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓ ａｌｂｕｓ）（体长１１～１５ｃｍ，平均体重３．６克／尾）的急性毒性试验，结果表明：溴氰菊酯对黄鳝鱼种的半致死浓度（９６ｈＬｃ５０）为６．４０μｇ／Ｌ，安全浓度（Ｓｃ）为０．６４μｇ／Ｌ。黄鳝苗种对溴氰菊酯敏感。     

用浮游植物的生产量估算武昌东湖鲢鳙生产潜力与鱼种放养量的探讨

本文根据浮游植物生产量求得对鲢、鳙的供饵能力，并通过浮游植物对鲢、鳙转化效率的计算，估算出武昌东湖鲢、鳙的生产潜力，进而求得武昌东湖鲢、鳙的合理投放量。作者求得东湖浮游植物全年对鲢、鳙的供饵能力是61，153吨(鲜重)；由此估算出东湖鲢、鳙的生产潜力是789公斤／公顷以上，每年鱼种(四寸以上)的合理投放量，鲢是209万尾，鳙是110万尾。     

长江中下游鲢、鳙、草鱼、青鱼种群分化的同工酶分析

为查明长江中下游鲢、鳙、草鱼、青鱼有无不同种群，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了长江中游天鹅洲故道、汉阳、瑞昌江段和下游安庆江段鲢、鳙、草鱼、青鱼各４个群体间的生化遗传变异。同种鱼各群体间的遗传变异未见有显著差异。遗传距离Ｄ值均小于０．００１。由此，初步认为长江中下游的鲢、鳙、草鱼、青鱼应各属一个没有显著遗传分化的种群，我们称之为“长江种群”。因而，在长江中下游选择一处优良保护场所就有可能达到就地保护长     

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢消化酶活性的研究

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢肝脏蛋白酶活性低于肠蛋白酶。肠蛋白酶活性，鳜鱼最高，其余依次为青鱼、鲤、鲢、草鱼、鲫。鳜鱼、鲢的肠蛋白酶活性由前肠向后肠递减；而青鱼、鲤、草鱼的则由前肠向后肠递增；鲫则中肠活性最低。六种鱼不同组织的脂肪酶活性因鱼而异。青鱼、鳜鱼、鲤、鲢肝脏中脂肪酶活性低于肠脂肪酶活性（Ｐ＜０．０１）；而草鱼和鲫肝脏中脂肪酶活性与肠脂肪酶活性差异不明显（Ｐ＞０．０５）。六种鱼肝脏中脂肪酶活性由高到低依次为鳜鱼＞鲢＞鲫＞草鱼＞青鱼＞鲤；肠脂肪酶活性顺序为鳜鱼＞鲢＞青鱼＞鲤＞草鱼＞鲫。脂肪酶活性与鱼类食性无明显相关性。不同组织间淀粉酶活性存在差异。鳜鱼的肝脏和肠均有较高淀粉酶活性，青鱼和鲫肝脏中淀粉酶活性低于肠中的；草鱼、鲤和鲢肝脏中淀粉酶活性高于肠中的，但差异不显著。六种鱼中鳜鱼的肝脏淀粉酶活性明显高于其它五种无胃鱼，它们的淀粉酶活性顺序依次为鳜鱼＞鲢＞鲤＞草鱼＞青鱼＞鲫；肠淀粉酶活性顺序为鳜鱼＞鲫＞鲤＞青鱼＞鲢＞草鱼。     

长江鲢、鳙、草鱼和青鱼原种亲鱼标准与检测的研究

主要报导长江原种亲鱼鲢、鳙、草鱼和青鱼的形态特征、年龄生长和繁殖特性。通过可数可量参数的测定，年龄生长、性成熟年龄、繁殖力、成熟系数及卵比重等单项的相对关系的研究，讨论并提出了原种亲鱼鲢、鳙、草鱼、青鱼的标准参数，可供原种场生产管理、原种检测及种质资源保护的依据。     

鱼类特异性代谢物对草鱼、鳙和尼罗非鲫耗氧率的影响

以草鱼、鳙和尼罗非鲫互为供体和受体,研究其特异性代谢物对耗氧率的影响。结果表明：①在草鱼“代谢水”中,草鱼耗氧率显著下降（P＜0．001）,鳙和尼罗非鲫耗氧率均显著上升（P＜0．001）;②鳙“代谢水”中,鳙耗氧率显著下降（P＜0．001）,草鱼耗氧率无显著变动（P＞0．05）;③在尼罗非鲫“代谢水”中,3种鱼的耗氧率均无显著变动（P＞0.05）。实验揭示了鱼类特异性代谢物对代谢影响的存在,且这种影响因种而异。     

鲤、鲢、鳙精子低温短期保存研究

本文对鲤(Cygrinus carpio)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙(Aristichthys nobilis)精液在2—4℃的短期保存进行了实验研究。筛选出了几种较为理想的稀释保护液配方;确定了精液与稀释液的适宜稀释比例为1:1;研究了抗冻剂二甲亚砜(DMSO)对低温保存条件下精于活力的影响,确定了DMSO的适宜添加浓度为6％左右。鲤精在2—4℃保存10天,活力仍高达70％,少数精子存活时间长达12天;鲢和鳙精子在2—4℃保存7天后活力仍高达60％,达到了生产应用的水平。为水产养殖和鱼类育种研究提供了一种简便易行的精液短期保存技术。     

长江鲢、草鱼原种——人繁群体生长差异与生化遗传变化↑（*）

用完全随机区组设计的方法在三个池塘中进行了源于长江的鲢，草鱼原种与封闭人繁群体子三代１龄鱼种阶段的生长比较试验。结果表明；原种鲢，草鱼的体长绝对增长高出封闭人繁子三代群体１７－２１％，相对增长快１３－１８％；体重绝对增重高出２５－２６％，相对增重快１５－２０％。但这些差异均未达数理统计上差异显著的标准。     

鲢、鳙、草鱼摄食节律和日摄食率的初步研究

本文报道了鲢、鳙和草鱼的昼夜摄食节律和日摄食率，并对影响摄食节律和摄食强度的环境因子进行了初步探讨。试验的结果表明，这三种鱼都有明显的摄食节律。鲢、鳙鱼的饱满指数在每天4时最低，天亮前后开始升高，8时起明显升高，12时至20时是一天中的最高阶段，20时以后逐渐下降，午夜24时后，大约有6小时停食。草鱼的饱满指数也是以每天4时最低，12时和20时分别出现两个摄食高峰，两个高峰之间，即16时左右摄食强度有一个低落的阶段。试验也揭示了这三种鱼的日摄食率，即每天按单位体重的进食量。按日平均饱满指数法测计，鲢鱼日摄食率的最低值为5．6％，最高值为16．8％，平均为11．4％；鳙鱼的日摄食率最低值为2．5％，最高值为16．4％，平均值为6．7％；草鱼的日摄食率的最低值为26．3％，最高值为49．9％，平均值为38．6％。在全年中三种鱼的日摄食率都以在7、8月份为最高，这就是鲢、鳙、草鱼一年中摄食的最旺盛期。     

主养草鱼池塘三种混养模式鱼类生长和效益的比较

为进一步提高我国广大池塘养鱼的产品质量、经济效益和改善其生态环境。本试验在武汉新洲973项目实验基地9个陆基鱼池中进行了三种不同混养模式鱼类生长和效益的比较研究,每种模式设3个重复。模式Ⅰ中放养草鱼、鲢、鳙和高背鲫;模式Ⅱ中放养草鱼、鲢、鳙、匙吻鲟和高背鲫;模式Ⅲ中放养草鱼、鲢和高背鲫。 结果表明：通过122d的养殖试验,模式Ⅱ中草鱼的生长不仅显著高于模式Ⅰ和模式Ⅲ（P<0.05）,而且其经济效益模式Ⅱ同样高于模式Ⅰ和模式Ⅲ。     

湖泊围养鱼类血液学指标的初步研究

本试验测定了185尾在湖泊围养区和池塘内体质健壮的草鱼、青鱼、团头鲂、鲢鱼、鳙鱼的血液,共取得红血球、血红蛋白、血糖、总蛋白、白蛋白、尿素氮、胆固醇、甘油三酯八项指标的1367个数据。经可靠性分析,除血糖指标的相对误差值略高于5％外,其余各项血液指标均值的相对误差,均达到生物调查实验要求。     

鲢微卫星标记研制及其在鲢和鳙遗传多样性研究中的应用

鲢(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙(Aristichys nobilis)是中国特有的四大家鱼中2个重要成员,主要分布于黑龙江、长江和珠江水系.传统人工养殖依靠天然鱼苗.但是,人口增长和人类经济活动加剧使其天然产卵和孵化场消失或遭到破坏.人工育苗技术虽然解决了鱼苗供应问题,但由于遗传资源管理和使用方法的不完善,使两种鱼的生长表现、抗病抗逆性和遗传多样性等都有明显的降低.另外,因洪水导致的养殖个体逃逸也使天然群体的遗传多样性受到干扰.近年来,比较大规模的人工鱼苗放流实践也加剧了对天然群体遗传多样性的扰动.对这些问题的深入研究迫切需要一套适用的分子标记.为评价鲢和鳙的遗传多样性、确定它们的遗传分化和地理分化、科学合理地管理和开发利用遗传资源,本研究构建了富集GT微卫星序列的基因组短片段文库.随机选择并测序的97个克隆中有87个含有微卫星序列.根据其中的21条序列,设计了22对微卫星标记引物并用来分析了在长江荆州段捕获的32尾野生鲢和7尾野生鳙的遗传多样性.所有标记引物在两种鱼中通用.在全部样品中共发现129个等位基因.每位点等位基因数在3～10个,平均5.9个.不同标记揭示的遗传多样性指数在0.33～2.00,平均1.22.由于使用的鱼个体数少,如鳙,只有7个个体,样品也只来源于长江荆州江段.本研究无法基于两种鱼的天然分布,对两种鱼的遗传分化、地理种群多样性比较、养殖群体和天然群体差异等问题进行深入分析.但是,这组标记的研制将有助于这2个中国特有经济鱼种的遗传多样性分析、遗传资源的管理及开发利用等相关研究.本研究中,微卫星DNA标记的研制使用了固定有微卫星核心序列的磁珠.这样的磁珠与两端接有已知序列的DNA片段杂交能富集出含有微卫星核心序列的片段.通过扩增和连接转化,可方便地获得大量含微卫星核心序列的片段.与已有的方法不同的是,本研究用AFLP方法的某些步骤使片段两端加上已知引物序列,方便易行.迄今,这两种鱼还没有微卫星标记连锁图谱.构建这样的图谱是本项目研究的长远目标.