口服特异性卵黄抗体对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫保护效果

为探讨特异性卵黄抗体对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)的免疫保护机制及效果,本研究以添加不同剂量WSSV卵黄抗体制剂(0、0.2%和0.5%)的饲料投喂凡纳滨对虾幼虾,免疫28 d后使用WSSV进行人工感染,测定感染对虾的肝胰腺免疫酶活力和免疫基因表达水平,以及感染后14 d内对虾的存活率。结果显示,WSSV感染3 d后,与未添加卵黄抗体制剂的对照组相比,0.2%免疫组对虾肝胰腺的超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)活力显著升高,酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活力显著降低,热休克蛋白70基因(Hsp70)表达水平显著升高,凝集素基因(lectin)和β-1,3-葡聚糖结合蛋白–脂蛋白基因(β-GBP-HDL)表达水平显著降低;0.5%免疫组对虾肝胰腺的SOD活力显著升高,ACP和AKP活力显著降低,Hsp70基因表达水平显著升高,β-GBP-HDL基因表达水平显著降低。人工感染实验结果显示,WSSV感染14 d后,0.2%和0.5%免疫组对虾的存活率分别为48.89%和87.78%,均显著高于对照组(存活率为0),且0.5%免疫组对虾存活率显著高于0.2%免疫组。特异性卵黄抗体制剂能在一定程度上改变发病的进程,延迟对虾的发病和死亡时间,提高同期存活率。研究表明,口服特异性卵黄抗体制剂可以调节对虾肝胰腺免疫酶活力和免疫基因表达水平,显著提高凡纳滨对虾抗WSSV感染的能力。本研究为卵黄抗体抗WSSV感染机制的研究提供了参考,也为在生产上使用卵黄抗体防控WSSV感染提供了科学依据。     

氨氮胁迫下白斑综合征病毒对凡纳滨对虾的致病性

为了评价养殖水环境中氨氮(NH_4-N)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害性,开展了NH_4-N胁迫对凡纳滨对虾感染白斑综合征病毒(WSSV)后的死亡率、WSSV增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响的实验。在NH_4-N胁迫质量浓度为15.6 mg·L-1,分别注射2×105和2×106个WSSV粒子,结果显示,NH_4-N胁迫下注射2×105个WSSV粒子的凡纳滨对虾第144小时死亡率达到53.3%,显著高于无胁迫组(40.0%)。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,NH_4-N胁迫下凡纳滨对虾鳃组织内WSSV的增殖加快。此外,免疫相关酶活性结果显示,NH_4-N浓度突变会促使对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性短暂升高后持续降低。由此可见,NH_4-N胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内的增殖,导致更高死亡率,这可能是因为胁迫造成了对虾免疫相关酶活性降低和抗病原感染能力下降。     

WSSV＋斑节对虾的血清免疫相关酶对人工感染WSSV粗提液的反应

用含3×103拷贝·g^-1、6×1062拷贝·g^-1和2×10^2拷贝·g^-1的对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus，WSSV）粗提液和PBS液（对照）注射感染病毒携带量约1×10^5拷贝·g^-1的斑节对虾（Penaeusmonodon），分别于第15分钟、第30分钟、第1小时、第3小时、第6小时、第12小时、第24小时、第48小时、第72小时取样，研究了WSSV感染对斑节对虾血清内酸性磷酸酶（acidphosphatase，ACP）、碱性磷酸酶（alkalinephospha—tase，AKP）、酚氧化酶（phenoloxidase，PO）、过氧化物酶（peroxidase，POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性的影响。结果表明，在3种感染浓度下ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势，其中SOD活性后期水平显著高于初期；PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降最后上升的趋势，但PO后期活性水平与初期相当，而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系，除ACP外其余4种酶的活性变化均以6×10^2拷贝·mL^-1浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。     

感染白斑综合病毒（WSSV）对虾相关免疫因子的研究

129尾中国对虾（Penaeus chinensis)分别捕自未暴发白斑综合症（WSSV病毒所致）虾池、WSSV暴发虾池以及曾暴发WSSV虾池。用斑点杂交和组织病理学方法确定各尾对虾的染毒（WSSV）程度。用96孔酶标板法测量相应个体血淋巴上清液的抗菌活力（Ua)、溶菌活力（UL）、酚氧化酶（PO）活性以及过氧化酶（POD）相对活性；用硝酸纤维膜斑点法测定其碱性磷酸酶（ALP）相对活性；用血凝法测定其凝集效价（HAT）。通过对以上免疫指标进行统计分析，结果表明，WSSV感染与对血淋巴PO活性以及ALP相对活性变化有紧密联系；不同虾池各免疫因子差异显著，发病虾池虾样各免疫指标平均值均低于其他虾池；曾发病虾池的虾样PO活性较强；WSSV与HPV感染无统计学意义上的相关性；未发病虾池与曾发病虾池实验对虾的Ua与UL相关性极显著，发病虾池实验对虾Ua与UL呈负相关；发病虾池对虾PO与ALP活性相关性显著。不同性别中国对虾血淋巴上清液的免疫因子活性没有显著差异。     

2株消化道优势菌对凡纳滨对虾免疫酶活性和抗白斑综合征病毒感染力的影响

以凡纳滨对虾为研究对象,在基础饲料中分别添加从健康对虾消化道中分离纯化的优势菌菌株——美人鱼发光杆菌PC463和坚强芽孢杆菌PC465(菌含量≥1011CFU/g)的活菌和破碎菌各1 g/kg,观察其对凡纳滨对虾血淋巴免疫酶活性和抗WSSV感染保护率的影响。经过20 d养殖实验后发现,与对照组相比,饲料中添加坚强芽孢杆菌活菌的免疫组和添加美人鱼发光杆菌灭活菌的免疫实验,其凡纳滨对虾血淋巴中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性在不同程度上有所提高,并显著高于对照组(P<0.05)。WSSV感染后饲料中添加坚强芽孢杆菌活菌的免疫组存活率(53%±12%)和添加美人鱼发光杆菌灭活菌的免疫组存活率(49%±15%)显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:饲料中添加坚强芽孢杆菌活菌和美人鱼发光杆菌灭活菌可以在一定程度上提高凡纳滨对虾免疫酶活性和抗WSSV感染能力,上述有防病作用的益生菌株以饲料添加剂的方式应用于对虾养殖生产,可望成为对虾白斑病生物防治的有效途径之一。     

WSSV感染对克氏原螯虾血细胞吞噬和肝胰腺磷酸酶活性的影响

分析了克氏原螯虾Procambarus clarkia人工感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)后,其血细胞吞噬(Phagocytosis)活性,肝胰腺酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化规律,其目的是为WSSV感染与螯虾的免疫防御反应等研究提供依据.分析结果显示,随着WSSV感染克氏原螯虾时间的延长,血细胞吞噬活性、肝胰腺酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性也随之改变,其中血细胞吞噬活性的变化规律性比较明显,可作为WSSV感染的敏感指标,也可以用作间接指示克氏原螯虾健康状况的指标.而在不同的感染时间,克氏原螯虾肝胰腺ACP与AKP的活性波动较大,无明显的规律可循,难以作为WSSV感染的敏感指标.     

白斑综合征病毒感染与对虾的免疫防御反应

对虾白斑综合征病毒（WSSV）感染对虾后，最典型的免疫反应是对虾开放循环系统的血淋巴细胞数量急剧下降，血淋巴凝结功能下降，感染部位聚集了大量的血淋巴细胞，且以颗粒细胞为主。WSSV可感染对虾颗粒细胞和小颗粒细胞，其中小颗粒细胞感染率高、感染速率快，感染后大颗粒细胞占血细胞总数的比例可增加到50％；血淋巴中的总糖、总碳水化合物、总蛋白和游离氨基酸显著提高，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和诱导性一氧化氮合成酶的活性显著降低。自然状态下广泛存在WSSV潜伏感染，潜伏感染的存在会导致存在免疫反应情况下的感染复发，并且有助于病毒的传播；不同WSSV感染状态下过氧化物（POD）差异显著，其平均值由大到小依次为：潜伏感染虾样、中度感染虾样、严重感染虾样。而其抗菌活性（UA）、溶菌活性（UL）、酶氧化酶活性（PO）、碱性磷酸酶（ALP）和凝集效价（HAT）差异不显著；潜伏感染个体对再次接种WSSV有“类免疫应答”的抗性，这种抗性不是来源于发病期对虾的天然抗性，而是WSSV感染后的一种免疫系统增强。宿主细胞凋亡可能是感染对虾在高温时反而维持较高成活率的主要机制。免疫增强剂可对对虾防御WSSV感染产生影响，脂多糖、葡聚糖、肽聚糖、岩藻依聚糖和双链核糖核酸都已被证实可提高对虾抗病毒感染的免疫保护。WSSV主要囊膜蛋白VP28可诱导对虾对WSSV感染产生抗性降低累积死亡率，高效价的病毒抗血清具有良好的保护作用；对虾抗菌肽也可通过抑制病毒的复制而起保护作用。     

氨氮和亚硝基氮共同胁迫对凡纳滨对虾感染WSSV的影响

为了评价养殖水环境中氨氮和亚硝基氮对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害性,开展了氨氮和亚硝基氮共同胁迫对凡纳滨对虾感染WSSV后的死亡率、WSSV在患病对虾体内增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响的研究。实验设置氨氮(NH+4)和亚硝基氮(NO-2)的共同胁迫浓度均为20 mg·L-1,分别注射10-4和10-5稀释度的WSSV提取液。结果显示,胁迫下感染10-4WSSV的凡纳滨对虾144 h死亡率达到100%,显著高于无胁迫组(76.67%),相同实验条件下高浓度病毒感染组死亡率高于低浓度组。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,氨氮和亚硝基氮共同胁迫下凡纳滨对虾体内WSSV的增殖加快,感染48 h后胁迫组病毒量是无胁迫组的1.6倍,72 h时病毒量达到无胁迫组的2.0~3.7倍。此外,免疫相关酶活性结果显示,氨氮和亚硝基氮浓度突变会促使对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性先短暂升高然后降低。由此可见,氨氮和亚硝基氮共同胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内的增殖,导致更高死亡率,这可能是因为胁迫造成了对虾免疫相关酶活性的降低和抗病原感染能力下降所致。     

美人鱼发光杆菌对凡纳滨对虾非特异性 免疫功能及抗病力的影响

在基础饲料中分别添加0.1%和1%美人鱼发光杆菌灭活菌、0.1%美人鱼发光杆菌活菌配制成3种免疫实验饲料,以基础饲料为空白对照组饲料,每组设3个平行样。对个体质量为(4.83±0.36)g的凡纳滨对虾进行为期20 d的饲养实验,分别在0、5、10、15和20d进行取样,以血清中的酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶(UL)活性为免疫指标,探讨了美人鱼发光杆菌作为免疫制剂对凡纳滨对虾非特异性免疫效应的影响;在投喂免疫饲料后的第22天,按0.004 2 kg/kg体重的剂量,直接投喂对虾白斑综合征病毒(WSSV)病料,并记录累积死亡率。结果表明,美人鱼发光杆菌免疫实验组对凡纳滨对虾血清中PO、ACP、AKP、UL和SOD活性影响明显高于对照组,并且在饲料中添加美人鱼发光杆菌后,明显提高了对虾抵御WSSV感染的能力。其中0.1%美人鱼发光杆菌活菌实验组的抗病毒感染能力最强,WSSV感染14d内累计死亡率为63.3%±5.8%;而对照组为96.7%±3.3%。研究表明,美人鱼发光杆菌添加在对虾饲料中能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平,增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾免疫增强剂具有良好的应用前景。     

凡纳滨对虾抗WSSV选育家系的建立及其抗病特性

2002-2007年在人工感染白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)的基础上进行一代个体选育(G1)后,对凡纳滨对虾连续进行4代家系选育,共建立120个抗WSSV家系,感染实验结果显示,G2～G5选育家系对虾平均成活率分别为5.57％ ±9.83％,8.66％±11.52％,9.52％ ±8.84％和13.79％±12.86％；G2～G5选育家系对虾平均成活率的变异系数分别为1.77、1.40、0.97和0.87.根据每个家系对虾的成活情况每个世代可分为敏感、中等抗性和高抗性家系,G2～G5敏感家系在各代选育家系中的比例逐年下降,分别占76.5％、55.2％、51.4％和33.3％,抗病成活率分别为0.44％±1.09％、0.78％±1.70％、2.27％±2.76％和2.44％±3.09％,感染WSSV后2～3d出现1个急性死亡高峰；中等抗病家系在各代选育家系中的比例逐年上升,分别占0、20.7％、31.1％和38.5％,抗病成活率分别为0、9.08％±1.46％、10.7％±1.41％和11.36％ ±3.30％,感染WSSV后出现2个死亡高峰,第1死亡高峰值大于第2高峰；高抗家系在各代选育家系中的比例逐年上升(G4除外),分别占23.5％、24.1％、17.1％和28.2％,抗病成活率分别为22.23％±5.21％、22.70％±12.30％、24.45％ ±6.56％和28.98％ ±8.09％,感染WSSV后出现2个死亡高峰,第1死亡高峰值小于第2高峰.经连续的定向选育,对虾抗病性状一代比一代强,表现出明显的抗病性能,特别是高抗对虾不仅死亡率低且其死亡高峰推迟2～3d,延缓了对虾WSSV暴发的时间,但是每代每尾对虾平均产卵量逐年下降.     

Development of monoclonal antibodies against VP28 of WSSV and its application to detect WSSV using immunocomb

White spot disease (WSD) is an important viral disease of penaeid shrimp caused by white spot syndrome virus (WSSV). WSSV isolated from WSD outbreaks in commercial shrimp (Penaeus monodon) farms in India were propagated in the laboratory in healthy shrimp. The virus was purified from the infected tissues by sucrose gradient centrifugation. The VP28 was electroeluted from SDS-PAGE gels and was used to immunize Balb/c mice to produce hybridomas secreting monoclonal antibodies (MAb) against WSSV. A total of five hybridoma clones secreting MAbs to VP28 were produced. The MAbs were of the isotypes IgG1, IgG2b and IgM. The MAbs reacted with VP28 of WSSV and not with any other viral or shrimp protein in western blot. The MAbs were used to develop dot immunoblot assay using an immunocomb to detect WSSV from field samples. The test developed had an analytical sensitivity of 625 pg and a diagnostic sensitivity of 100% compared to single step polymerase chain reaction (PCR). The test can be used as an alternate for first step PCR to detect WSSV from field samples.     

微囊藻和小球藻携带WSSV量的变化及对水体游离WSSV的影响

研究了铜绿微囊藻（Microcystis aeruginosa）和蛋白核小球藻（Chlorellapyrenoidosa）携带白斑综合症病毒（whitespotsyndromevirus，WSSV）数量变化及对水体游离WSSV量的影响。试验设置微藻高、低密度组和不加微藻的对照组，分别加入等量的WSSV粗提液，于第2、第24、第72和第120小时以实时荧光定量PCR检测藻液上清和沉淀藻体的WSSV数量。结果表明，微囊藻和小球藻可携带少量WSSV，且随时间延长而减少；微囊藻携带WSSV量与其细胞数呈显著正相关（P〈0．05），小球藻携带WSSV量与其细胞数相关性不显著（P〉0．05）；2种微藻均有促进水体WSSV数量消减的效果，且小球藻的消减效果优于微囊藻，对养殖对虾白斑综合症（whitespotsyndrome，WSS）的生态防控更有积极意义。     

1种可用于检测WSSV蛋白酶的微量酶活测定技术

以酪蛋白为底物 ,对常规蛋白酶检测方法进行改进并与偶氮酪蛋白法进行比较 ,建立适应病毒微量蛋白酶的快速检测方法。结果表明 ,改进的微量蛋白酶检测方法具有微量、快速、灵敏度高的特点 ,适于病毒微量蛋白酶的检测。蛋白酶的最低检出量可达ng级。     

中国对虾雄性生殖系统感染WSSV在其垂直传播中的作用

通过人工感染实验,对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)雄性亲虾进行投喂感染。在确定其携带WSSV粒子后,将被WSSV感染的精荚人工移植到健康的雌虾纳精囊内。在无其他病源的情况下,促其产卵繁殖,统计各组子代的受精率、孵化率及无节幼体至溞状幼体的变态率贸?式PCR技术对亲虾及子代进行WSSV检测。结果表明,受WSSV感染的精荚能够把病毒传播给健康雌虾,雌虾能产出携带WSSV的卵子,培育出带毒幼体。各组子代的受精率、孵化率及变态率的统计结果表明,感染组和对照组在受精率上没有明显区别,受WSSV感染的精卵细胞可以正常结合。对照组受精卵的孵化率明显高于感染组,差异显著(P=0.045<0.05)。对照组无节幼体的变态率也高于感染组。说明WSSV的入侵对受精卵及幼体的发育有影响,WSSV感染导致部分受精卵及幼体不能正常发育或死亡。     

对虾白斑综合征病毒(WSSV)高分子量结构蛋白的分离

采用蔗糖密度梯度离心从患病对虾组织中提取WSSV，应用SDS-PAGE对WSSV结构蛋白进行了分析。采用12％分离胶，将WSSV样品煮沸5min，应用SDS-PAGE分离了WSSV的中低分子量结构蛋白，并将该结果与其他学者已发表的结果进行了比较。首次通过延长样品煮沸时间，采用8％分离胶，应用SDS-PAGE分离到了WSSV100kD以上的13条高分子量结构蛋白，计算出了每条蛋白带的分子量及其在总蛋白中的百分含量。其中WSSV高分子量结构蛋白的分离丰富了WSSV的研究范围，对今后深入的研究工作具有重要意义。     

WSSV 3个编码蛋白的基因密码子偏爱性分析

运用EMBOSS（The European Molecular Biology Open Software Suite）的CHIPS（Condon Heterozygosity in a Protein Coding Sequence）和CUSP（Create a condon usage table）程序对WSSV3个编码蛋白的基因密码子偏爱性分析，分析结果与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示，WSSV—vp37、WSSV—vp39及WSSV—vp19的Nc（Effective number of condons）值为49．897、48．640、46．868。3种蛋白的编码密码子使用频率有较大的差异，其在大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性也有不同，分析结果表明，WSSVvp37和WSSV—vp39的密码子与原核生物及人的相差较大，其表达系统选择在酵母较为合适，而WSSV—vp19的密码子与原核和真核生物酵母相差较大。     

桡足类浮游动物细胞膜与白斑综合症病毒的结合研究

通过差速离心法提取桡足类组织细胞膜，依照本实验室确立的细胞膜与WSSV特异性的结合关系，进行了桡足类细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)结合实验。结果表明，桡足类细胞膜与WSSV之间存在着特异性的结合，二者的结合说明了桡足类细胞膜上存在有WSSV的受体蛋白，其为确定桡足类属于WSSV感染宿主提供了重要证据。同时，比较了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃细胞膜对桡足类细胞膜与WSSV结合的影响作用，证实了凡纳滨对虾鳃细胞膜对二者的结合具有明显的封闭作用，侧面说明了WSSV在二者细胞膜上存在有相同的受体蛋白或结合位点。桡足类细胞膜经表面活性剂Triton x-100处理后，与WSSV的结合活性没有受到影响，而经Tween-20处理能显著提高与WSSV的结合活性，提示受体蛋白在细胞膜上可能占有一段较小的跨膜区域。经SDS-PAGE分析确定了桡足类细胞膜由分子量为18～207kD范围的约33条蛋白条带组成。     

感染白斑综合症病毒中国对虾雄性生殖系统的PCR检测与电镜观察

通过人工投喂携带WSSV的毒饵，对性腺发育成熟的中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）雄虾（♂）进行感染实验。采用nest-PCR（巢式PCR）技术，检测感染后的中国对虾雄性生殖系统受WSSV感染情况，同时选取感染严重的虾样进行电镜观察。巢式PCR检测结果表明，感染组中国对虾的精巢、输精管和精囊均被WSSV感染，其中精囊呈阳性的最多，输精管次之，精巢最少。通过电镜进一步观察发现，WSSV粒子只存在于精巢、输精管和精囊的结缔组织中，而在其他组织和生殖细胞中均未发现病毒粒子。其中，精巢中WSSV粒子存在于精巢内两个生精小管之间的结缔组织；输精管中WSSV粒子存在于管壁的结缔组织；精囊中WSSV粒子也只存在于精囊内膜的结缔组织和精荚膜的结缔组织中。PCR检测和电镜观察结果均表明，WSSV粒子能感染中国对虾的雄性生殖系统且对性腺感染存在着一定的组织特异性。     

WSSV蛋白酶性质的研究

从感染白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)的对虾中提取和纯化WSSV,对其蛋白酶活力进行分析。结果表明,WSSV蛋白酶具广泛的pH稳定性,当pH达7.5时,蛋白酶活性最大;pH高于10 0时,酶活力很低,其蛋白酶偏碱性。丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性有抑制作用。Ca2 、Mn2 、Fe2 和Cu2 可降低WSSV蛋白酶活性,但Mg2 有轻微的激活作用。胰蛋白酶抑制剂在浓度为12.5～25.0mg/L时,对WSSV蛋白酶活性无影响。Leupeptin使蛋白酶活性降低12.29%。Chymostatin在质量浓度为12.5～25.0mg/L时,对WSSV蛋白酶活性有强烈的抑制作用,表明WSSV蛋白酶类属胰凝乳蛋白酶。蛋白质修饰剂对WSSV蛋白酶活性影响的研究结果表明,组氨酸残基为WSSV蛋白酶活性基团,而巯基为非必需基团,说明WSSV蛋白酶为非巯基依赖型的蛋白酶。     

对虾白斑病围栏封闭预防技术

“对虾白斑病的围栏封闭预防技术”是一项针对沿海低位池塘、以切断传染病源为主旨、以设置防蟹围栏为特色的对虾白斑病综合预防技术。其主要措施为：首先在贮水(兼水处理)池和养殖池周围设置防蟹围栏，将该等池塘封闭起来，使杂蟹不会从陆地侵入池内；然后通过60目滤网进水，并用敌百虫或敌杀死处理上述两种池塘，杀灭以蟹类为主的一切甲壳动物；解毒后，放养经检测不带白斑症病毒的虾苗；采取封闭式养殖，养殖期中只向养殖池加水以补充渗漏和蒸发的水损失；加水时，先将海水在贮水池中用药物处理，杀灭其中的传染该病的媒介生物(主要是桡足类)，药物解毒后再注入养殖池。此外，作为辅助措施，在养殖期中从多方面尽量保证虾池中有一个良好的生态环境。该技术已经过预备研究、实验研究和扩大试验等阶段，均证明效果良好。已扩大试验了近33．33hm^2(其中实际养虾池约17．33hm^2)，成功率达96％左右。