鳜鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆↑（*）

从感染鳜鱼病毒（ Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｃｈｕａｔｓｉ Ｖｉｒｕｓ，简称ＳＣＶ） 的鳜鱼体中分离病毒，提纯核酸作模板。通过ＲＡＰＤ 法，用带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增，获得扩增带谱。从带ＥｃｏＲⅠ酶切位点的引物扩增产物中，用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为０ ．４ 和０ ．５ Ｋｂｐ 的片段，经ＥｃｏＲⅠ酶切处理制备成带粘性末端的片段，分别插入质粒ｐＵＣ１９ 的ＥｃｏＲⅠ位点。ＥｃｏＲⅠ酶对重组子进行了酶切鉴定，获得２ 种带插入ＳＣＶ 核酸ＰＣＲ扩增产物的重组子。     

中国大陆沿海六水系绒螯蟹（中华绒螯蟹和日本绒螯蟹）群体亲缘关系：R …

用４８个具有丰富多态性的１０碱基随机引物对辽河、黄河、长江、瓯江、珠江和南流江的中华绒螯蟹和日本绒螯蟹的６个群体进行ＲＡＰＤ分析。结果发现：（１）两个引物具有群体特异性带，其中Ｚ２扩增的８８０ｂｐ片段为珠江蟹和南流江蟹群体中所特有，而７００ｂｐ片段为长江蟹、辽河蟹、黄河蟹和瓯江蟹所特有，可作为区别日本绒螯蟹和中华绒螯蟹的分子遗传标记；（２）Ｏｐｐ１７扩增的９４７ｂｐ片段的出现频率，在长江、黄河和辽     

镢鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆

从感染鳜鱼病毒（Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｃｈｕａｔｓｉ Ｖｉｒｕｓ，简称ＳＣＶ）的鳜鱼体中分离病毒，提纯核作模板。通过ＲＡＰＤ法，和带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增，获得扩增带谱。从带ＥｃｏＰＩ酶切位点的引物扩增产物中，用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为０．４和０．５Ｋｂｐ的片段，经ＥｃｏＲＩ酶切处理制备成带粘性未端的片段，分别插入质粒ｐＵＣ１９的ＥｃｏＰＩ位点。ＥｃｏＲＩ酶对重组子进行了酶切鉴定，     

中华绒螯蟹线粒体DNA 12S rRNA基因片段的序列研究

首次进行了中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体ＤＮＡ１２ＳｒＲＮＡ的序列分析。参考果蝇、蚤状序列对中华绒螯蟹线粒体ＤＮＡ１２ＳｒＲＮＡ基因片段做了引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定，结果得到４５７ｂｐ的碱基序列，其Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ含量分别为１５９ｂｐ（３４．７９％）、１７７ｂｐ（３８．７３％）、５１ｂｐ（１１．１６％）、７０ｂｐ（１５．３２％）、与果蝇、蚤状的相同基因片段的序列含量基     

中华绒螯蟹线粒体DNA l2S rRNA基因片段的序列研究

首次进行了中华绒螯蟹（ Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体 ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ的序列分析。参考果蝇、蚤状溞序列对中华绒螯蟹线粒体ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ基因片段做了引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定，结果得到 ４５７ ｂｐ的碱基序列，其Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ含量分别为 １５９ｂｐ（３４．７９％）、１７７ｂｐ（３８．７３％）、５１ｂｐ（１１．１６％）、７０ｂｐ（ １５． ３２％），与果蝇、蚤状溞的相同基因片段的序列含量基本相似。     

十种常见淡水鱼类的RAPD鉴定

用１４种１０ｂｐ长的随机引物对青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼、团头鲂、胭脂鱼、土鲶和黄颡十种鱼进行ＲＡＰＤＰＣＲ扩增。除引物ＯＰＫ０８外，其它的１３种引物都得到较清晰的ＤＮＡ带。１３种引物共产生６７２条带，平均每种鱼产生６７条带，每种引物产生５２条扩增带。鲤鱼扩增带最多，胭脂鱼扩增带最少。引物ＯＰＱ０１、ＯＰＱ０４、ＯＰＱ０６、ＯＰＱ１１、ＯＰＱ１２、ＯＰＫ０７、ＯＰＰ０１、ＯＰＰ１５、ＯＰＰ１７扩增的带谱可以作为种间鉴定的标记。本文结果显示ＲＡＰＤ是一种非常灵敏的种间鉴定技术，特别是对鱼卵和鱼苗的鉴定有重要意义。     

不同鲤鱼种间DNA遗传标记多态性

用８４个随机引物对黑龙江野鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ ｈａｅｍａｔｏｐｔｅｒｕｓ Ｔｅｍｍｉｎｃｋ ｅｔ Ｓｃｈｌｅｇｅｌ）和柏氏鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ Ｔｃｈａｎｇ）进行种间ＲＡＰＤ分析，结果共扩增出４８４个片段，二者共有扩增片段为１３个，黑龙江野鲤特有的为２３３个，柏氏鲤特有的为２２５个，这些特异片段可做为黑龙江野鲁和柏氏鲤的分子遗传标记。并对     

雅罗鱼亚科鱼类(鳡鱼、草鱼及赤眼鳟)的ISSR分子鉴定

用3个ISSR引物对同为雅罗鱼亚科鱼类的鳡鱼、草鱼及赤眼鳟进行简单重复序列区间扩增(ISSR)的遗传分析.试验发现:(1)3种鱼类的种间遗传相似度以鳡鱼与草鱼之间最高(0.7157),鳡鱼与赤眼鳟之间最低(0.3041);遗传分化系数(Gst)＞0.9,且鳡鱼与草鱼的遗传分化系数最大(0.9806);UPGMA系统树显示3种鱼类分为2支,鳡鱼与草鱼首先聚在一起,最后与赤眼鳟聚类.(2)3个引物均具有种的特异性扩增带.其中引物ISSR8扩增的1550 bp和760 bp带,引物ISSR62扩增的700 bp带,引物ISSR76扩增的790 bp带为赤眼鳟的特异性谱带;引物ISSR8扩增的2000 bp和1875 bp带,引物ISSR62扩增的1380 bp带,引物ISSR76扩增的1240 bp与520 bp带为鳡鱼与草鱼的共有特异性谱带;引物ISSR8扩增的1190 bp带为鳡鱼与赤眼鳟的共有特异性谱带;引物ISSR8扩增的1340 bp与1000 bp,引物ISSR76扩增的2000 bp带为草鱼与赤眼鳟的共有特异性谱带.结果表明,鳡鱼、草鱼及赤眼鳟的遗传差异显著,分类地位至少在种的水平上,这与3种鱼的形态分类在属的水平是一致的,同时揭示了鳡鱼与草鱼的亲缘关系较赤眼鳟与二者的亲缘关系近;找到了3个引物共17条ISSR种内特异性标记和种间共享标记,可用于分子辅助分类和种质鉴定.     

用RAPD技术识别中华绒螯蟹性别差异

中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）又称河蟹，是我国的名贵水产资源。本文用２００个随机引物对河蟹的雌雄群体和个体进行了ＲＡＰＤ（随机扩增的多态性ＤＮＡ）分析，发现１７个引物扩增出了群体水平的性别差异，其中的一个引物扩增出了个体水平的性别差...     

三疣梭子蟹抗乳化病相关基因的初步研究

在梭子蟹疾病高发季节，从宁波市梅山岛养殖场分别采集了三疣梭子蟹幼蟹得乳化病即将死亡个体１０只和健康个体８只，用ＲＡＰＤ技术对此１８个个体的进行了检测。从２０个随机引物中筛选出６个，对每只梭子蟹的ＤＮＡ进行扩增。结果表明，每个引物扩增出２～８条清晰可辨且重复性强的条带，并在引物Ｓ９６对２组蟹的检测结果中，从得病组里得到了１条分子量在８４７ｂｐ左右的特异性条带，进而推测此条带应与抗乳化病能力的强弱有关。     

方斑东风螺2个养殖群体遗传变异的RAPD分析

运用RAPD技术对方斑东风螺(Babylonia areolata Lamarck)泰国养殖群体和海南养殖群体的遗传多样性进行研究。选取21个10 bp随机引物对方斑东风螺2个群体各20个个体进行RAPD分析,21个引物共检测出222条带。泰国养殖群体的多态位点比例为70.27%,Shannon多样性信息指数为0.1858,Nei’s基因多样性指数为0.249 1,群体内个体间平均遗传相似率为0.7920,平均遗传距离为0.2080;海南养殖群体的多态位点比例为73.87%,Shannon信息指数为0.2044,Nei’s基因多样性指数为0.2615,群体内个体间平均遗传相似率为0.7620,平均遗传距离为0.2380。群体内遗传变异占种内遗传变异的76.81%,群体间遗传变异占23.19%。以上分析表明,方斑东风螺泰国养殖群体和海南养殖群体的遗传多样性水平仍较高,但海南群体的遗传多样性水平比泰国群体要高。     

罗非鱼雌、雄群体遗传差异的RAPD分析

从40个随机引物中分别筛选出15和18个,对奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼雌、雄群体进行RAPD分析,结果显示:奥利亚罗非鱼雌性群体的多态位点比例为56.25%,基因多样性指数为0.2358,Shannon氏指数为0.3417,群体内的遗传相似指数为0.8625;雄性群体的多态位点比例为57.50%,基因多样性指数为0.2356,Shannon氏指数为0.3418,群体内的遗传相似指数为0.8375。尼罗罗非鱼雌性群体的多态位点比例为47.44%,基因多样性指数为0.1788,Shannon氏指数为0.2637,群体内的遗传相似指数为0.7667;雄性群体的多态位点比例为64.10%,基因多样性指数为0.2347,Shannon氏指数为0.3486,群体内的遗传相似指数为0.6769。试验结果表明,奥利亚罗非鱼雌、雄性群体的遗传多样性程度接近,而尼罗罗非鱼雄性群体的遗传多样性要比雌性群体丰富,遗传变异比雌性群体大。     

长吻遗传多样性的RAPD分析

以洞庭湖和原种场长吻（Leiocassis longirostris）为研究对象,采用20个随机引物对10个野生个体进行了随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）群体遗传多样性分析。共检测到103条带,每个引物产生的条带数在2～9之间,片段大小在0.2～3.0kb之间,多态座位比例为41.75%,2群体内个体间遗传相似系数和遗传距离分别是,洞庭湖个体间遗传相似性系数（S）0.8795～0.9833,遗传距离（D）0.0167～0.1205;原种场个体间S为0.8794～0.9892,D为0.0319～0.1108;比较2群体S为0.7983～0.9994,D为0.0167～0.3017;Nei遗传多样性指数（He）0.3269。结果表明,长吻群体内遗传多样性较为丰富。     

不同地理群体星突江鲽养殖子一代群体遗传多样性分析

采用RAPD标记技术对取自韩国沿海和俄罗斯沿海的星突江鲽养殖子一代进行了遗传多样性分析。从40个10bp随机引物中筛选出11个效果稳定的引物,对每个群体40个个体进行扩增,各获得57个位点。韩国群体多态位点数为33个,其多态位点比例P为57.89%;俄罗斯群体多态位点数为32个,其多态位点比例P为56.14%。韩国群体和俄罗斯群体的Shannon遗传多样度分别为0.3384和0.2963,Nei的多样性指数h分别为0.2305和0.1947。星突江鲽两群体遗传多态度总量Hsp为0.4252。其中,群体内遗传多态度Hpop为0.3174,源于群体内的遗传多样性的比例为0.7465,而源于群体间的遗传多样性的比例为0.2535。     

青岛文昌鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD技术对青岛文昌鱼雌、雄各11条个体共22个样本进行遗传多样性检测。从40个寡聚核苷酸随机引物中筛选出17个扩增重复性好、条带清晰、特异性强的引物，对每个个体基因组DNA进行了扩增。得到RAPD产物的分子量在200～2200bp之间，产物总计127个位点，其中，多态位点60个(占47．24％)。计算个体间遗传相似系数平均为0．8656，个体间遗传距离平均为0．1344。用Shannon多样性指数量化的遗传多态度(Ho)，雄性群体(0．1912)高于雌性群体(0．1125)，平均遗传多态度(Hpop)为0．1519。文昌鱼遗传多态度所占的比例在群体内为0．2553，而雌、雄群体间为0．7447。在文昌鱼雌、雄个体RAPD产物中，两个电泳图谱上能读出明显的雄性特征带，估计可能与雄性文昌鱼具有异型性染色体有关，这与XY型性别决定机制相吻合。引物OPC12扩增产物250bp为雄性文昌鱼所特有，可能为区别性别的分子标记。用NJ法进行聚类分析，结果表明，22个个体明显按性剐聚成两类，文昌鱼雌、雄个体基因组间的差异较大。     

中国大陆沿海六水系绒螯蟹(中华绒螯蟹和日本绒螯蟹)群体亲缘关系:RAPD指纹标记

用 4 8个具有丰富多态性的 10碱基随机引物对辽河、黄河、长江、瓯江、珠江和南流江的中华绒螯蟹和日本绒螯蟹的 6个群体进行RAPD分析。结果发现 :(1)两个引物具有群体特异性带 ,其中Z2扩增的 880bp片段为珠江蟹和南流江蟹群体中所特有 ,而 70 0bp片段为长江蟹、辽河蟹、黄河蟹和瓯江蟹所特有 ,可作为区别日本绒螯蟹和中华绒螯蟹的分子遗传标记 ;(2 )Opp17扩增的 94 7bp片段的出现频率 ,在长江、黄河和辽河群体显著地从南到北递减 ,长江蟹 87.50 %、黄河蟹4 1.66%、辽河蟹 10 .83%。这一遗传渐变的度量可作为区别这三个水系的中华绒螯蟹种群的判据 ;(3) 6水系群体内的平均遗传相似度依次为 :辽河蟹 0 .90 8>南流江蟹 0 .897>瓯江蟹和珠江蟹 0 .895>黄河蟹 0 .890 >长江蟹 0 .850 ;6群体间遗传距离及其UPGMA、NJ聚类分析进一步表明 ,南流江蟹、珠江蟹同长江蟹、辽河蟹及黄河蟹在基因组之间存在明显的歧化。     

两种壳色虾夷扇贝的RAPD分析

采用RAPD技术对两种壳色虾夷扇贝Patinopecten yessoensis的遗传多样性和遗传结构及其分化进行研究。用筛选出的22个随机引物对白色贝和褐色贝各40个个体进行RAPD扩增，进行群体内及群体间的遗传学分析。白色贝共检测出128个多态位点，多态位点的比例为79．5％，Shannon遗传多样性指数为0．424；褐色贝共检测出127个多态位点，多态位点的比例为78．9％，Shannon遗传多样性指数为0．423。白色贝和褐色贝之间的遗传相似性指数和遗传距离为0．961和0．039，二者之间的遗传分化指数Gst为0．052，遗传分化的程度较低。结果表明，白色贝和褐色贝之间的等位基因频率、多态位点的比例和遗传多样性等的差别不明显，遗传变异主要来自于群体内。S285—1在褐色贝大部分个体中都能获得扩增片段，但在白色贝所有个体中均未见这个位点的扩增片段，推断S285—1为白色贝的特异阴性片段。     

漠斑牙鲆引进群体子一代遗传多样性的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对引进群体漠斑牙鲆Paralichthys lethostigma 子一代48个个体的遗传多样性进行了分析，筛选的40个10bp的随机引物中，25个引物产生了稳定性好，可重复性强的谱带。共检测到154个位点，其中多态位点有122个，多态位点的比例为79．22％，有效等位基因数为1．5629±0．3631，Nei＇s基因多样性指数为0．3184±0．1843，Shannon信息指数是0．4651±0．2574。结果表明，漠斑牙鲆处于较高的遗传多样性水平。     

ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体种质鉴定中的应用

ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体种质鉴定中的应用=Application of ISSR markers in germplasm identification of different color’s Porphyra haitanensis filament strains［刊，中］/谢潮添（集美大学水产学院，厦门361021）,纪德华,陈昌生,徐燕,张元//水产学报，—2007，31(1).-105～111 用ISSR分子标记技术对4个不同色泽坛紫菜（Porphyra haitanensis）丝状体品系（分别为桔黄色，褐绿色，棕红色和紫色）及1个野生型对照丝状体品系（褐红色）进行了遗传分析，共筛选出11条引物，PCR反应得到了129个扩增位点，多态位点比率达88.4％，有效等位基因数为1.6369，期望杂合度为0.3609，Shannon多样性指数为0.5265；根据Nei方法计算了这5个坛紫菜丝状体品系间的遗传相似性系数和遗传距离，结果发现4个不同色泽丝状体间的平均遗传距离为0.5727，它们同野生型对照的平均遗传距离为0.6564，同时应用UPMGA法对它们进行了聚类分析。最后应用引物812扩增的4个多态性位点构建了这5个不同坛紫菜丝状体的DNA指纹图谱，使每一品系都具有独特的DNA指纹，并将其转化成了计算机可以识别的数码指纹，可以方便地应用于坛紫菜丝状体的种质鉴定中。结果表明ISSR分子标记技术可以作为坛紫菜丝状体种质鉴定的有效技术手段，提供快捷、准确的鉴定结果。图3表5参24 关键词：坛紫菜; ISSR标记; 遗传分析; 种质鉴定 E-mail: cschen@jmu.edu.cn     

中华鳖五群体遗传变异的RAPD分析

从97个10碱基随机引物中筛选出30个多态性引物,对黄河鳖、淮河鳖、洞庭湖鳖、鄱阳湖鳖及太湖鳖5个群体共100只个体进行RAPD分析.结果表明,中华鳖的遗传多样性较丰富.表现在(1)在获得的341条RAPD扩增带中,有234条(68.6%)呈现多态性;2个引物有可明显地反映种群差异的扩增带,其中S105扩增的1408bp在黄河鳖的出现频率仅为20%,而在另外4个群体的出现频率达80%～90%;S37扩增的438bp在5个群体的出现频率大小为黄河鳖85% >淮河鳖65% >洞庭湖鳖55% >鄱阳湖鳖40% >太湖鳖20%,呈现出从黄河到淮河到长江、从长江的中游到下游逐步降低的遗传渐变现象;(2)多态位点比例(P)的大小顺序为太湖鳖59.25%>洞庭湖鳖56.52%>鄱阳湖鳖55.80%>淮河鳖55.03%>黄河鳖54.43%,但5个群体间的差异不显著(F=0.644<F0.05;4,145=2.45);5群体内的遗传多态度(π)在0.3644～0.3883间;(3)群体内遗传相似度大小顺序为淮河鳖0.782>黄河鳖0.771>鄱阳湖鳖0.768>洞庭湖鳖0.750>太湖鳖0.722,其中太湖鳖与黄河鳖、淮河鳖、鄱阳湖鳖3个群体间的差异显著(P <0.05);(4)分子方差分析(AMOVA)表明,黄河鳖与淮河鳖、洞庭湖鳖及鄱阳湖鳖3个群体间,太湖鳖与黄河鳖、淮河鳖2个群体间有极显著的遗传分化(P<0.001);(5)根据遗传距离,用UPGMA 和NJ法进行聚类分析表明黄河鳖与淮河鳖、洞庭湖鳖与鄱阳湖鳖分别先聚在一起,最后再与太湖鳖聚类,显示太湖鳖在基因组上与其它4个群体鳖存在明显歧化.