对虾一种杆状病毒多角体蛋白基因的PCR扩增

根据已发表的几种杆状病毒的多角体基因的序列比较与分析，设计并合成两对ＰＣＲ简并引物Ｐ—６０／Ｐ７４０和Ｐ１６４／Ｐ６４０，从纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒提取ＤＮＡ并进行ＰＣＲ扩增，Ｐ—６０／Ｐ７４０的扩增片段较为复杂，基中１条的长度为８００ｂｐ的主带与设计的ＤＮＡ片段长度相近。Ｐ１６４／Ｐ６４０经优化ＰＣＲ的反应条件后，成功地扩增出与设计相同的约４８０ｂｐＤＮＡ片段。进一步的实验表明，Ｐ—６０／Ｐ７４０扩增的分子量为８００ｂｐ的片段可被Ｐ１６４／Ｐ６４０引物对扩增，分子量与预期的相同，初步研究结果显示，Ｐ—６０／Ｐ７４０可用于杆状病毒多角体蛋白全基因的克隆，Ｐ１６４／Ｐ６４０对于对虾杆状病毒的调查和研究有实际应用价值。     

海捕中国对虾杆状病毒的检测

以海捕中国对虾为材料,利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术和核酸探针技术,对从中国对虾杆状病毒核酸随机文库中筛选的４个片段（大小分别为８００,１１００,１５００,２５００ｂｐ）用地高辛标记作为探针,进行斑点杂交,检测对虾杆状病毒。结果表明海捕中国对虾的鳃、中肠、肝胰腺、卵巢等组织检测为阳性,肌肉组织为阴性。实验表明中国对虾村状病毒存在垂直传播的可能性。     

中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（HHNBV）DNA探针的制备及应用

ＨＨＮＢＶ是１９９３年中国对虾暴发性流行病的主要病原之一。从纯化的病毒中提取ＤＮＡ，用ＥｃｏＲｌ限制性内切酶酶切成ＤＮＡ片段，与ＰＵＣ１８体外重组，建立ＨＨＮＢＶＤＮＡ文库。从中筛选出三个重组质粒（５＃、８＃、９＃），它们所插入的片段大小分别为：２．８Ｋｂ、０．８Ｋｂ、１．６Ｋｂ，它们分别用光敏生物素标记成探针，与感染ＨＨＮＢＶ的病虾ＤＮＡ呈阳性反应，以此利用制备的ＨＨＮＢＶＤＮＡ探针的高敏感性和特异性来检测虾病。     

中国对虾一种杆状病毒的ELISA检测方法

从患暴发性传染病的中国对虾的组织中分离一种病毒，经差速离心、密度梯度离心及Ｓｈｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱层析纯化了一种形状为杆状的病毒。提纯病毒核酸电泳为一条带，分子量为２０ｋｂ。将提纯病毒免疫新西兰获得较高抗血清并初步建立了酶联免疫中附测定检测方法。     

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的初步探讨

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的研究对切断病毒的传播途径,培育健康的对虾种质资源,具有重要的理论和实践意义。本文利用电镜技术,对中国对虾亲虾的卵巢,卵细胞和无节幼体,溲状幼体,糠虾,仔虾,幼成虾进行病毒检测,结果发现卵巢和卵细胞中有似病毒粒子,无节幼体,糠虾,仔虾,幼成虾有杆状病毒感染,并初步探讨了中国对虾杆状病毒垂直传播的可能性。     

肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的PCR复合检测

肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒是常见的2种DNA对虾病毒,在虾类养殖业中经常会出现混合感染。因此,建立这2种病毒的复合检测方法显得尤为重要。根据基因库中肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的保守序列,设计了肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的特异性引物,对这2种病毒PCR复合检测的反应条件和试剂浓度进行优化,退火温度55℃,主要试剂Mg2+终浓度为3mmol/L,dNTP终浓度为0.4 mmol/L,引物终浓度为0.8μmol/L。进一步比较了在优化后的PCR反应体系下,检测单种病毒和同时检测这2种病毒的灵敏度差异。     

鱼类基因组DNA提取方法的优化及PCR扩增

以海水鱼军曹鱼为材料,分别采用4种不同处理方法———经典蛋白酶K法、CTAB法、改良SDS法及优化的一步法(ROSE)等提取基因组DNA,通过紫外分光光度计测定OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示这4种方法均可以获得较高质量的基因组DNA,该基因组DNA用于目的基因的PCR扩增,均能得到PCR扩增的特异条带。改良SDS法及优化的一步法更加方便、快捷,而且成本低廉。     

用于PCR检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)的一种快速提取DNA方法

使用采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存人工感染ＨＨＮＢＶ（ＷＳＳＶ的一个分离株）的中国对虾组织,然后分别用酚抽提法、玻璃乳（Ｇｌａｓｓ Ｍｉｌｋ）回收法、硝酸纤维素膜结合法和煮沸－乙醇沉淀法提取ＤＮＡ。应用ＨＨＮＢＶ引物对提取的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定和检测。通过比较表明,煮沸－乙醇沉淀法是一种最快速、简便的从采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存的病虾组织中制备ＰＣＲ模板的方法     

斑节对虾杆状病毒的检测及感染率调查

本文报告了进境斑节对虾亲虾及其仔虾，成虾中的斑节对虾杆状病毒的包涵体和病毒颗粒的检测方法和病毒的感染率，检测结果显示，亲虾和虾苗的病毒感染率分别为２３．１％和６２．５％。     

皮下及造血组织坏死杆状病毒对中国对虾亲虾的人工感染

皮下及造血组织坏死杆状病毒对中国对虾亲虾的人工感染宋晓玲，黄倢，王崇明，于佳，陈碧鹃，杨丛海（黄海水产研究所，青岛２６６０７１）关键词中国对虾，亲虾，皮下及造血组织坏死杆状病毒，人工感染，温度效应ＡＲＴＩＦＩＣＩＡＬＩＮＦＥＣＴＩＯＮＯＦＢＲＯＯＤＳ...     

中国对虾（Penaeus chinensis）杆状病毒病的研究↑（*）

１９９３年养殖的中国对虾（ＰｅｎａｅｕｓＣｈｉｎｅｎｓｉｓ）发生了暴发性流行，经人工感染和电镜观察，证实是由杆状病毒引起的。病虾活力差。体色暗淡或微红，头胸甲上有浅黄色至白色的斑点，头胸甲与表皮下粘连，容易剥离，血淋巴混浊，淋巴器官和肝胰腺肿大，糜烂，在肝胰腺，淋巴器官，中肠，皮下组织和鳃等组织细胞的核内均发现有大量病毒粒子，病毒粒子杆状，无包涵体，具囊膜，平均长３５０ｎｍ，宽１５０ｎｍ，核衣壳体     

中国对虾的组织培养

目前组织细胞培养研究迅速发展，已被应用于无脊椎动物和脊椎动物生物学的各个领域中．在鱼类组织培养方面的研究已逾三十余载，据Wolf和Mann统计，国外从冷水性鱼和温水性鱼获得细胞株(系)共61个。无脊椎动物组织培养研究工作进展则较为缓慢，自Grace从鳞翅目昆虫Antheraea eucalypti建立首株细胞后，昆虫组织培养才进一步活跃起来。     

中国对虾染色体的核型分析

对中国对虾的染色体进行了较深入的观察和研究。实验材料采用精巢、胚胎,无节幼体等,以气干法和压片法制片,吉姆萨染色,然后进行显微镜检查,选择分散良好的分裂相摄影。结果表明:中国对虾染色体数目为n=44,2n=88。并发现一对具有次缢痕的染色体。通过测量和计算,确定它的核型为2n=88=66M+16SM+6St。     

对虾暴发性流行病病原对中国对虾幼体及仔虾的人工感染研究

用对虾暴发性流行病病原（ＨＨＮＢＶ）作为人工感染实验的毒种来源,对中国对虾幼体及仔虾进行了人工感染研究,结果表明ＨＨＮＢＶ通过水体浸浴不能感染健康的中国对虾卵,幼体及仔虾;但可通过投喂感染健康的中国对虾仔虾,使其发病死亡,死亡的进程随着体长的增加而缩短。     

中国对虾淋巴组织培养中的病毒及病理观察

通过对中国对虾的淋巴器官和经过培养的养殖、海捕中国对虾的淋巴组织细胞进行电镜观察 ,均发现在细胞内存在一种形状为球形 ,有囊膜 ,平均直径为 136nm的病毒 ,病毒分布于细胞质内 ,或成团存在 ,似为一种虹彩病毒 ;在养殖对虾淋巴器官及培养过的组织细胞中还发现另一种病毒 ,病毒粒子为正二十面体 ,无囊膜 ,平均直径为 33nm ,分布于细胞质中 ,似为一种小RNA病毒。在体外培养淋巴组织过程中 ,病毒在细胞内没有明显增殖迹象。感染病毒的细胞呈现细胞核固缩 ,细胞质空泡化 ,线粒体内嵴模糊 ,粗面内质网水肿等一系列病理变化。对淋巴组织切片进行光镜观察 ,发现淋巴器官组织部分坏死 ,有些细胞核肿大 ,苏木精深染 ,严重的细胞核结构已经被破坏。     

中国对虾受精过程的细胞学研究

通过光镜和电镜切片技术,对中国对虾的受挤过程进行了观察。结果表明,中国对虾成熟卵子处于第1次成熟分裂前期,卵子激活后产生胶质层,精子在卵子的诱导下产生顶体反应后进入卵子。中国对虾为多精入卵、单精受精。精子入卵后,卵子完成成熟分裂并举起围卵膜,但精子的存在并非此过程所必需。在卵子进行第1次成熟分裂时,其纺锤体旋转90°。卵子完成成熟分裂后,精卵原核原核化并向卵子中央移动,最后,精卵原核结合形成合子核,卵子完成受挤过程。     

中国对虾上皮样细胞培养研究

１９８９年８月起进行了中国对虾上皮细胞的原代和传代细胞培养。对取自甲壳，步足等部位的对虾上皮组织培养研究，共培养６批，获得传代细胞１１株，其中１株传至２５代，传代细胞形态为梭形和下沉上皮细胞形态相似。生长率测定结果，第４天细胞增殖达高峰，倍增时间为４８．７２ｈ。     

一种新的对虾病原菌——雷氏普罗威登斯菌

本文从患败血病的中国对虾体内分离到多株细菌，其中三株经人工感染证实为病原菌，又经４０多项形态、生理、生化特性测试，鉴定为雷氏普罗威登斯菌（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａｒｅｔｇｅｒｉ），其主要特性为杆状，革兰氏阴性，周生鞭毛，运动，无自然游动现象，兼性厌氧，苯丙氨酸脱氨酶、柠檬酸盐利用、吲哚、甲基红反应均阳性，发酵甘露醇、肌醇、甘露糖产酸。赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、ＶＰ反应均阴性。生长最适温度、ＮａＣｌ、ｐＨ范围分别为２５℃—３０℃、０５％—１５％、７０—９０。对羧苄青霉素、先锋霉素５号、氯霉素、ＳＭＺ＋ＴＭＰ、氟哌酸、链霉素等极为敏感。雷氏普罗威登斯菌引起对虾败血病在国内外尚属首次报道。