6—二甲在氨基嘌呤诱导太平洋牡蛎三倍体—抑制受精卵第一极体释放

于１９９６－１９９７年，用６－二甲基氨基嘌呤抑制受精卵第一体体的释放，诱导太平洋牡蛎产生三倍体。选用Ｌ１６（４＾５）设计，进行三因素四水平的正交试验，６－ＤＭＡＰ肖度，设１５０，３００，４５０和６００μｍｏｌ／Ｌ；诱导时机，设１０，１５，２０和２５ｍｉｎ诱导持续时间，设１０，１５，２０和２５ｍｉｎ。试验平行重复二次。     

6_二甲基氨基嘌呤诱导栉孔扇贝三倍体

用６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤＭＡＰ）处理以抑制栉孔扇贝第二极体释放产生三倍体的适宜诱导参数进行了试验研究，结合ＤＡＰＩ染色和荧光显微镜观察，分析了开始处理前和处理结束时的受精卵染色体核相组成与三倍体诱导率和幼虫成活率的关系，对三倍体处理组和对照组幼虫的生长进行了观察，结果表明，获得充分成熟的卵子，起始处理时间以第一极体占４０％，药物浓度６０ｍｇ／Ｌ，持续处理时间１５ｍｉｎ及产卵至处理结束保持水温２     

6-甲氨基嘌呤诱导栉孔扇贝三倍体的细胞学机理

以６０ｍｇ／Ｌ的６－甲氨基嘌呤（简称６－ＤＭＡＰ）诱发栉孔扇贝三倍体时，在荧光显微镜下观察受精卵的染色体行为以及核相组成，对照三倍体率和孵化率，探讨了不同减数分裂期６－ＤＭＡＰ处理对染色体倍数性的影响。结果表明，处理５￣１５ｍｉｎ可见３种类型图像，第１种图像可见第一极体和一个雌性原核及雄性原核；第２种图像可见第一极体和两雌性原核及一个雄性原核；第３种图像可见两个雌性原核和一个雄性原枋，随着处理时间     

僧帽牡蛎三倍体和二倍体的生长比较↑（*）

１９９３ 年采用高温（３７ ℃） 休克处理受精卵１５ ｍｉｎ ，抑制第一极体排放诱导出僧帽牡蛎三倍体，在早期幼虫阶段，处理组幼虫平均壳长显著较对照组大，经过１ 年的养殖，三倍体壳长、壳高、软体部湿重和干重分别比二倍体增加１３ ．２ ％ 、８ ．９ ％ 、１２４ ．６ ％ 和８７ ．１ ％ 。１９９７ 年采用０ ．５ ｍｇ／Ｌ 细胞松弛素Ｂ 在５０ ％ 受精卵出现第一极体时处理受精卵１５ ｍｉｎ 诱导出僧帽牡蛎三倍体，经过１４ 个月养殖，三倍体壳长、壳高、体重和软体部湿重分别比二倍体增加３９ ．２６ ％ 、１７ ．２５ ％ 、７２ ．５０ ％ 和１１８ ．４２ ％ ，除个别月份外，三倍体和二倍体的生长差异显著（ Ｐ＜ ０ ．０５） ，僧帽牡蛎三倍体较二倍体具有明显的生长优势。     

6_二甲基氨基嘌呤诱导太平洋牡蛎三倍体_抑制受精卵第一极体释放

于 1996～ 1997年 ,用 6-二甲基氨基嘌呤 ( 6-DMAP)抑制受精卵第一极体的释放 ,诱导太平洋牡蛎产生三倍体。选用L16( 45)设计 ,进行三因素四水平的正交试验 :6-DMAP浓度 ,设15 0、30 0、45 0和 60 0μmol/L ;诱导时机 (即精卵混合后的时间 ) ,设 10、15、2 0和 2 5min ;诱导持续时间 ,设 10、15、2 0和 2 5min。试验平行重复二次。结果为最高三倍体诱导率为 ( 71.3± 1.2 ) % ,该实验组胚胎孵化率为 ( 5 5 .5± 3.1) % ,D形幼虫畸形率为 ( 10 .7± 1.6) %。根据直观分析结果 ,得出诱导太平洋牡蛎三倍体各因素的最优水平组合 :水温 2 5～ 2 5 .5℃ ,精卵混合 10min时 ,将受精卵浸泡在含 6-DMAP 60 0μmol/L的海水中 15min ;决定三倍体产生的三因素的主次顺序 :6-DMAP浓度→诱导时机→诱导持续时间。 6-DMAP浓度对三倍体诱导率影响显著 ,但诱导时机和诱导持续时间不显著。     

6-二甲基氨基嘌呤诱导泥蚶三倍体实验

于2001年5月,用6-DMAP抑制泥蚶受精卵第二极体的释放诱导三倍体的产生。实验设三个6-DMAP浓度梯度,分别为300μmol/L、450μmol/L、600μmol/L,处理时机为受精卵第一极排放体30％,处理持续时间为10min。结果:三倍体诱导率300μmol/L时为35.5％,450μmol/L时为48.6％,600μmol/L时约为58.5％,另外本实验还就6-DMAP浓度对D形幼虫孵化率和畸形率的影响以及在染色体制片过程中的有关问题进行了初步探讨。     

太平洋牡蛎三倍体的繁殖潜力和遗传学研究

在太平洋牡蛎三倍体的繁殖潜力和遗传学研究工作，三倍体精子所含ＤＮＡ经流式细胞光度术测定，在１．５℃存在一个单一峰值，尽管染色体联会程度在雌体内和雌体间存在很大不同，三倍体卵内联会染色体中，三价染色体占优势（为显性）一些卵经完全联合形成１０个三价染色体，大部则由１１－１３个三价染色体，二价染色体及单价染色体组成，用双倍体（Ｄ）和三倍体（Ｔ）亲本牡蛎交配，形成四种杂交体：ＤＤ，ＤＴ，ＴＤ及ＴＴ（雌性在     

6-DMAP诱导太平洋牡蛎三倍体--诱导因素对孵化率和D幼畸形率的影响

太平洋牡蛎 (Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａｇｉｇａｓ)三倍体Ｄ形幼虫及其后阶段的生长和存活方面的研究已有较多报道[1～ 4 ] ,但有关牡蛎三倍体各诱导因素对孵化率和Ｄ形幼虫畸形率的研究尚少见报道。我们于 1 996～ 1 997年度 ,在进行 6 -ＤＭＡＰ诱导太平洋牡蛎三倍体的同时 ,开展了这方面的研究 ,旨在为三倍体诱导的技术储备提供必要补充1　材料与方法1 .1　实验材料太平洋牡蛎取自荣城市桑沟湾海区 ;壳长 (9.6± 1 .3)ｃｍ ;肉眼观察 ,性腺发育良好。6 -二甲基氨基嘌呤 (6 -Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ,本文简称6 -ＤＭＡＰ)的…     

中华绒螯蟹RAPD扩增条件及个体间遗传差异

该项研究优化了河蟹ＲＡＰＤ反应体系，初步确定：Ｔａｑ酶用量为ＩＵ，引物浓度０．３５μｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰｓ浓度１００μｍｏｌ／Ｌ模板量５０－１００ｎｇ，ＭｇＣｌ２浓度２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，退火温度３８℃，得出同一养殖群中不同个体河蟹遗传差异在２０％以下。     

三倍体大连湾牡蛎的初步研究

三倍体大连湾牡蛎的初步研究梁英，王如才，田传远，于瑞海，曲学存（青岛海洋大学水产学院，２６６００３）关键词大连湾牡蛎，低温休克，三倍体ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＴＲＩＰＬＯＩＤＯＹＳＴＥＲＣＲＡＳＳＯＳＴＲＥＡＴＡＬＩＥＮＷＨＡＮＥ...     

Optimization of triploid induction by the use of 6-DMAP for the oyster Crassostrea gigas (Thunberg)

Abstract. A novel method using 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) has recently been demonstrated to be a good triploid inductor for bivalve molluscs. The effects of 6-DMAP concentration, timing of treatment after fertilization, and treatment duration on survival and triploid induction of Crassostrea gigas (Thunberg) embryos were examined. An influence of sperm concentration was also detected and discussed. Survival to D-stage was inversely related to 6-DMAP concentration and the percentage of triploids was shown to be 6-DMAP dose dependent. Two optimal moments for treatment application were determined, corresponding to extrusions of the first and second polar bodies. Optimal treatment of 450μmol/1 6-DMAP beginning 15min after fertilization over a 10min period yielded mean survival to D-stage of 64% with a mean of 85% triploid production. As a comparison, a sample treated with 1 mg/1 of cytochalasin B (CB), 20 min after fertilization over a 15 min period, yielded a mean survival to D-stage of only 36% with a mean of 95% triploid production. The advantages of 6-DMAP over CB are clearly identified: this chemical is not carcinogenic, cheaper than cytochalasin B and much easier to use as it is water soluble.     

6-DMAP诱导栉孔扇贝异源雌核发育二倍体

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎精子激活栉孔扇贝卵子，运用L9（3^4）设计不同6-DMAP的处理条件来诱导染色体加倍，获得第二极体抑制型栉孔扇贝雌核发育二倍体早期胚胎。以雌核发育担轮幼虫为材料，滴片法制备染色体并采用计数法统计倍性，分析不同6-DMAP浓度、诱导时机和诱导持续时间对雌核发育二倍体诱导率的影响，并统计早期胚胎畸形率。结果表明，不同6-DMAP浓度、诱导时机和诱导持续时间对异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体的诱导率均有显著影响；早期胚胎畸形率与二倍体的诱导率呈负相关，y=46.632-0.891x（r=-0.813，P〈0.01）。6-DMAP诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体的最佳处理条件为：20%～25%受精卵排放出第1极体时，60μg/ml的6-DMAP持续处理25min可得到最高的诱导率为29.5±5.36%。研究结果为6-DMAP诱导栉孔扇贝雌核发育染色体加倍提供了一定的细胞学依据和技术参数。     

三倍体九孔鲍的育种和养成技术研究

当 5 0 %九孔鲍受精卵出现第一极体后 ,以 6 -DMAP为诱导剂 ,用不同的浓度和不同的持续时间抑制第二极体的释放诱导三倍体 ;并进行了生产性苗种培育和养成试验。结果表明 ,6 -DMAP的诱导浓度为30 0μmol·dm-3 、诱导持续时间为 10min时 ,其胚胎的三倍体率为 90 %以上 ,并且胚胎的孵化率高达 85 % ,幼体的畸形率较低 ,为 5 0 %～ 5 5 % ;经过 7个月培育 ,试验组养成鲍的三倍体率为 6 5 %以上 ;试验组养成鲍的平均壳长比对照组增长 10 % ,平均体重比对照组增重 30 %。与二倍体鲍相比较 ,三倍体鲍在壳长增长和体重增重等方面 ,显示了显著的优势 [t>t0 .0 1( 58) ]。     

Triploidy induction in Australian greenlip abalone Haliotis laevigata (Donovan) with cytochalasin B

Triploid induction in Australian greenlip abalone, Haliotis laevigata (Donovan), was conducted by blocking the formation of the second polar body using cytochalasin B (CB). Twenty minutes after fertilization, the zygotes of greenlip abalone were treated with four CB concentrations (0, 0.25, 0.5 and 0.75 mg L⁻¹) for 10, 15 and 20 min. The ploidy of resultant larvae was determined using flow cytometry at 72-h post fertilization. Our study showed that fertilization, hatching, survival and induced triploidy of abalone larvae were significantly affected by the CB concentration and treatment duration. The effective range of CB concentration for triploid induction on greenlip abalone was 0.5–0.75 mg L⁻¹ with an induction duration of 10–15 min. The results indicate that the most effective treatment combination for triploid induction in greenlip abalone is 0.5 mg CB L⁻¹ for 15 min starting at 20-min post fertilization.     

诱导异源三倍体鲍的初步研究

用细胞松弛素B（CB）处理九孔鲍♂×盘鲍♀受精卵,分别抑制其第一极体和第二极体、以及第二极体释放诱导异源三倍体。水温24℃,九孔鲍♂×盘鲍♀授精后10min,用浓度0.6～1.0mg/L的CB持续处理受精卵20～25min,抑制其第一极体的排放。而九孔鲍♂×盘鲍♀在受精后27min,当40%～50%受精卵排出第一极体时,用浓度0.6～1.0mg/L的CB持续处理受精卵10～15min,分别统计对照组和药物处理组的担轮幼虫率,并用倍体分析仪检测各组稚鲍的倍性。结果表明：对照组和药物处理组担轮幼虫的倍性较复杂,起始处理时间为10min,CB药物处理浓度为0.6mg/L,持续处理时间为25min,其三倍体率可达40.67%,担轮幼虫的孵化率为26.44%。起始处理时间为27min,CB药物处理浓度0.6mg/L,处理持续时间为10min,其三倍体率可达48.11%,担轮幼虫率的孵化率为29.86%。     

Optimal chemical triploid induction in geoduck clams, Panopea abrupta, by 6-dimethylaminopurine

The development of geoduck culture techniques coupled with increased market demand during the past decade led to cultured intertidal geoduck beds, over which concerns have arisen regarding the potential genetic risk posed by the reproductive contribution of hatchery outplants to wild stocks. Although an ongoing study to determine the genetic stock structure of Puget Sound geoducks has yet to yield definitive results, sterile triploids would enable geoduck culture to proceed irrespective of any genetic differences found, and may increase rate of growth. At 15 °C and salinity of 30‰, we evaluated the suitability of cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) for triploid induction in geoducks. Parallel tests of induction agent, start time, duration, and concentration were conducted on the same gamete pool. We found optimal triploid induction (92%) and suitable survivorship (30%) resulted from a 600 μM 6-DMAP treatment. This work enables the future examination of the efficacy of triploid induction for conferring sterility and increasing growth rate in this commercially valuable species.     

Studies on triploid oysters in Australia: Evaluation of cytochalasin B and 6-dimethylaminopurine for triploidy induction in Sydney rock oysters Saccostrea commercialis (Iredale and Roughley)

Naturally spawned Sydney rock oysters Saccostrea commercialis (Iredale and Roughley),were used to determine the appropriate stage of development for inducing triploidy and to compare the effectiveness of cytochalasin B (CB) and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) in dose-optimization trials. Induction should commence at 50% first polar body (PB1) extrusion in eggs (approximately 17-19 min post-fertilization at 25^oC). By day 5 the highest triploidy percentage and yield (number of triploid larvae per 100 fertilized eggs) were achieved in the ranges of 0.75-1.5 mg CB 1^-1 (1.6-3.1 μm CB)or 200-400 μm 6-DMAP (32.6-65.3 mg 6-DMAP l^-1). However, CB treatment resulted in greater survival and triploidy percentage than 6-DMAP in Sydney rock oysters.     

低渗诱导太平洋牡蛎三倍体以及与其他诱导方法的比较

通过低渗方法抑制受精卵第二极体(PB2)的释放,诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)三倍体.在水温为23～25℃的条件下,分别采用不同低渗海水(盐度分别为4、6、8、10、12、14、16),在不同处理时机,即第1个第一极体(PB1)出现、30%的PB1出现、40%的PB1出现、50%的PB1出现以及第1个第二极体(PB2)出现时,对太平洋牡蛎受精卵进行10 min、15 min、20 min、25 min持续处理.处理后,于正常盐度海水中孵化,收集D形幼虫,通过流式细胞仪进行倍性测定,确定最佳诱导条件.结果表明,当太平洋牡蛎受精卵PB1出现40%时,在盐度为8的低渗海水中,持续处理15 min,得到最高三倍体诱导率为(89.16±1.39)%.与对照组相比,低渗诱导获得的三倍体幼虫表现出明显的生长优势.将低渗方法同高温(32℃)、低温(2℃)和6-DMAP(450μmo1/L)处理等多倍体诱导方法进行比较,结果显示,低渗组的卵裂率和孵化率显著高于高温、低温和6-DMAP诱导的太平洋牡蛎三倍体(P＜0.05).6-DMAP诱导的三倍体率虽略高于低渗诱导,但差异不显著(P＞0.05).通过综合评价指数(Ie)比较,认为低渗诱导多倍体的方法比高温、低温和6-DMAP诱导具有明显的优势.     

CB诱导熊本牡蛎三倍体及其存活率与倍化率的变化关系

为诱导熊本牡蛎三倍体，研究了细胞松弛素B (CB)浓度、诱导起始时间、诱导持续时间等因素对卵裂率、D幼率、三倍体率的影响，并分析了幼虫、稚贝及成贝的存活率和三倍体率的变化特征。结果显示，CB浓度为0.5~0.6 mg/L，诱导起始时间为40%受精卵释放第一极体，诱导持续时间为20 min时可获得87%的三倍体率。卵裂率、D幼率、三倍体率的最大影响因素分别为CB浓度、诱导持续时间、诱导起始时间与诱导持续时间。三倍体率与卵裂率无显著负相关性，而与D幼率呈显著正相关。因此，减小CB浓度或诱导持续时间，可同时获得较高的三倍体率与幼虫产量。3~15日龄三倍体组与对照组的存活率分别由71.27%与96.09%降低至34.14%与58.80%，成贝期450日龄(9月)三倍体组与对照组的存活率分别为53.62%与44.67%。3~9日龄三倍体率从87%降低至77%，而90~450日龄三倍体率平均值为59.21%±4.99%，表明幼贝与成贝期三倍体率变化较小，三倍体率的维持与存活率无显著相关性。