海参营养口服液制备工艺研究

为了综合利用海参的活性功能成分,充分发挥其协同保健作用,对海参酶解工艺条件进行优化,提取液经超滤、调配获得海参营养口服液,并测定了其提高免疫力的效果。结果显示,采用复合风味蛋白酶酶解制备海参口服液效果最好,最佳酶解条件为:加酶量1 500 U/g,温度50 ℃,pH值7.0,酶解时间3 h。经蝶式离心机过滤的海参酶解液,其调配的最佳工艺配方为:绵白糖12 %,pH=4,蒸煮时间30 min。     

海参多肽的研究进展

1海参多肽的制备 1．1 酶解工艺目前用于海参多肽提取的酶解蛋白种类很多,按其来源大致可分为动物来源、植物来源和微生物来源三类。不同的蛋白酶对同一种底物的水解效率是不同的,而且不同的蛋白酶由于酶切位点及酶切作用方式的不同,其酶解产物中营养成分多肽的肽段分子量大小和游离氨基酸的组成上存在非常大差异。     

海参水煮液酶解多肽的抗氧化活性

以海参水煮液的冻干粉为原料,选取中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶分别酶解制备多肽,测定其对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力,并与合成抗氧化剂TBHQ对比.结果表明,3种蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力均随样品质量浓度的升高而增强;其中,中性蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽清除·OH、O2-·和DPPH·自由基的IC50值依次为8.565、6.658和2.015mg/ml,其对O2·的清除能力优于TBHQ.经液相色谱法测定,中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽分子量分别分布在＜2 500、＜3 500和＜1 000 D的小分子肽中.     

饲用植酸酶和纤维素酶最佳酶解条件的研究

采取正交试验的方法，研究植酸酶和纤维素酶对配合饲料的酶解效果以及酶解的最适条件。结果表明：饲料经植酸酶酶解后，无机磷含量增加了6．1％～47．2％，平均增加了25．9％；植酸酶酶解的最适条件为：55℃，pH4．6，作用时间为80分钟。饲料经纤维素酶作用后，葡萄糖含量增加了36．7％-80．7％，平均增加了54．8％；在50℃，pH5．0，作用时间为80分钟时，纤维素酶的酶解效果最好。     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料，选用6种不同蛋白酶对其进行酶解，通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力，筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验，确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示，DPPH自由基清除率为61.1%，与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现，酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力，同时，具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化，结果显示，体外模拟消化产物水解度有增加，对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降，其可能原因为，经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化，导致了抗氧化活性的变化。     

鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺

为有效提高鲣鳔蛋白的附加值,研究以DPPH自由基清除率为抗氧化活性评价指标,采用蛋白酶酶解制备活性多肽的工艺,选用菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶7种酶在各自最适的条件下酶解,筛选出复合蛋白酶为最适用酶,通过单因素实验分别研究加酶量、溶液初始p H、酶解温度和时间对酶解物抗氧化活性的影响,在此基础上,根据响应面法优化鲣鳔抗氧化酶解物的制备工艺。结果显示,最佳酶解工艺条件为加酶量8.53 U/mg,p H 5.54,温度50.03°C,时间5.07 h。此外,利用超滤法对最佳条件下制备的酶解物进行初步分级,得到分子质量分别为大于10 000 u、3000~10 000 u和小于3000 u的3段组分,且这3段组分对DPPH自由基的半抑制浓度IC50值分别为0.64、0.52和0.37 mg/m L。研究表明,最优条件下制备的酶解物的DPPH清除率达72.00%,与模型预测值71.60%接近,且其中小于3000 u的组分具有较强的DPPH自由基清除活性。     

鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究

文章探讨了以鲢（Hypophthalmichthysmolitrix）鱼骨为原料,采用风味蛋白酶酶解制备骨胶原多肽水解液,剩余骨渣经乳酸提取制备骨粉酸解液（钙液）,研究其通过螯合制备鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺条件。分析了酶解时间对鲢鱼骨蛋白酶解产物产品品质和功能特性（溶解性和热稳定性）的影响以及采用乳酸提取鲢鱼骨中钙时提取温度对钙溶出率的影响,并以螯合率为指标,考察pH、时间、温度和多肽液与钙液体积比对螯合反应的影响。结果表明,在温度50℃,按原料鱼排质量0．09％加入风味蛋白酶酶解30min制备出的鲢鱼骨胶原多肽具有良好的产品品质和功能特性;乳酸提钙时提取温度对钙溶出率没有显著性影响（P〉0．05）;在pH8、温度25℃条件下,多肽液与钙液体积比1：1反应40min得到的鲢鱼骨胶原蛋白螯合钙螯合率最高（85．24％）。     

海参肽果汁复合饮料的研制

以诺维信复合蛋白酶酶解海参获得的海参肽为原料,研制一种海参肽果汁复合饮料。对海参肽制备工艺和海参肽果汁复合饮料制备工艺进行了详细研究。结果表明,海参肽的最佳制备工艺条件为:在pH为6、酶解5h、温度为40℃以及加入重量百分比为0.5%诺维信复合蛋白酶条件下进行酶解溶于40mL水的2g海参粉。由感官评价得到的海参肽果汁复合饮料的最佳配比为:蜂蜜4.5g,柠檬汁3.0mL,海参肽粉0.03g,蓝莓果汁:红提果汁比例为1∶3。制得的海参肽果汁复合饮料呈深蓝色、酸甜适中、有浓郁的水果清香。     

酶法从鳕鱼皮中提取胶原多肽的研究

胶原多肽具有多种生理活性。鳕鱼皮中含有丰富的胶原蛋白。本实验以鳕鱼皮为研究对象，采用酶法从鱼皮中提取胶原多肽，以氨基含量和水解度为指标，通过单因素和正交实验确定酶解的最佳条件。实验结果表明，采用碱性蛋白酶，加酶量4．5％、酶解温度50℃、pH8．5、酶解时间5小时，蛋白质水解度可达到13．87％。     

鲢鱼鱼皮蛋白肽的制备与抗氧化活性评价

为制备抗氧化活性良好的鲢鱼鱼皮蛋白肽,采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等4种常见的商业酶对鲢鱼鱼皮进行酶解,测定酶解物的ABTS自由基清除力和Fe2+螯合力来评价其抗氧化活性,并用超滤及凝胶层析对酶解物进行分离,以期得到活性更好的酶解物分离组分。酶解后产物的抗氧化活性均有所提高,其中碱性蛋白酶酶解2 h产物活性较强。对此酶解物用截留分子量为10 k Da、5 k Da和3 k Da的中空纤维超滤膜进行超滤,得到的4个组分中,分子量越小的组分抗氧化活性越强。分子量小于3 k Da的组分经Sephadex G-15凝胶层析得到3个组分,其中分子量最大的组分活性较好,在0.51 mg/m L质量浓度下测定其ABTS自由基清除率和Fe~(2+)螯合力分别为(79.65±0.87)%和(93.40±0.20)%。该研究成果对鲢鱼鱼皮抗氧化肽的开发具有较好的指导作用。     

罗非鱼碎肉酶法制备蛋白胨的工艺研究

为探讨罗非鱼碎鱼肉酶法制备蛋白胨的加工工艺,采用正交试验的方法,分别研究了木瓜蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、复合蛋白酶水解罗非鱼碎肉制备蛋白胨的工艺条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳水解工艺条件为pH6.5,温度65℃,水解时间4h,加酶量1250 U/g,蛋白胨得率达12.63%;AS.1398中性蛋白酶最佳水解工艺条件为pH 7.5,温度55℃,水解时间4 h,加酶量750 U/g,蛋白胨得率达13.25%;复合蛋白酶的最佳水解工艺条件为pH 7.0,温度50℃,水解时间4.5 h,加酶量850 U/g,蛋白胨得率达11.43%。     

样品处理对罗非鱼和银鲫肠道消化酶活性测定的影响

近年来,有关鱼类消化酶的研究报告不断增多,为鱼类消化生理的研究提供了大量有价值的实验资料。在鱼类消化酶的研究中,众多研究者采用了基本相近的研究方法[1-5],但有时却得出相矛盾的结果,这种现象似乎不能简单的归结为鱼类消化酶特性的多样性,而由实验方法和手段的差异导     

饲料蛋白水平对方格星虫稚虫日增重和消化酶活性的影响

为探讨饲料蛋白水平对方格星虫稚虫日增重和消化酶活性的影响,以9种蛋白水平(25.21%、29.87%、35.03%、40.67%、45.47%、50.12%、55.29%、60.38%、64.85%)的等能微颗粒饲料(以D1-D9表示)饲喂稚星虫8周。结果表明,饲料蛋白水平对稚星虫的日增重有显著影响(P<0.05)。随着饲料蛋白水平的提高,稚星虫的日增重呈先增后降的趋势,在D5组达到最大值。对稚星虫消化酶活性的分析表明,稚星虫蛋白酶活性随着饲料蛋白水平的上升呈先增后降的趋势,在D6组达到最大值,且显著高于D1-D5组(P<0.05);淀粉酶和脂肪酶活性随着饲料蛋白水平的上升有显著降低的趋势(P<0.05),D9组稚星虫的淀粉酶活性显著低于D1-D4组(P<0.05);D9组稚星虫脂肪酶活性显著低于除D8组外的其他各蛋白水平组(P<0.05)。以日增重为评价指标,稚星虫对饲料蛋白的适宜需求量为46.69%。     

大鲵肉酶解产物的制备及其抗氧化性的研究

以大鲵肉为原料,利用Aspergillus sp.酸性蛋白酶进行酶解,研究其最佳的酶解条件以及酶解产物的抗氧化作用。结果表明,大鲵肉酶解的最佳工艺条件为Aspergillus sp.酸性蛋白酶加酶量为0.4%(质量比)及底物浓度为0.1g/mL时,酶解时间5.5h,pH 2.0,温度45℃。时间飞行质谱表明酶解产物的分子量小于2 000,苯酚硫酸法测定糖含量为2%,Folin-酚试剂法测蛋白含量为93%。大鲵酶解产物清除羟基自由基(.OH)和DPPH自由基的能力随浓度升高而增强。     

近江牡蛎养殖水体中细菌产酶能力的研究

为了解近江牡蛎养殖水体中细菌的产酶特性 ,筛选出有应用潜力的有益菌 ,本实验从近江牡蛎养殖水体中分离到 32株菌。革兰氏染色表明 ,10株为革兰氏阳性菌 ,2 2株革兰氏阴性菌。在此基础上研究了它们蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的产酶能力。结果表明 ,6 1.9% ( 17株 )的菌株能分泌蛋白酶 ,71.9% ( 2 3株 )菌株能分泌脂肪酶或淀粉酶 ,34.4 % ( 11株 )的菌株产纤维素酶。这些产酶菌株均以革兰氏阴性菌为主。在这 32株菌中 ,产四种酶的有 5株菌 ,产三种酶的有 9株菌 ,产两种酶的有 9株菌 ,产一种酶的有 9株菌 ,也就是说 ,所有的菌株都能产酶。由此表明近江牡蛎养殖水体中细菌在该环境物质循环中的重要地位。     

酶解扇贝裙边制备复合氨基酸螯合钙的研究

扇贝裙边富含蛋白质、脂质等营养成分。为了高值化利用扇贝裙边，本研究选用中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶5种酶，以酶解液中游离氨基酸态氮为考察指标，对扇贝裙边进行酶解工艺条件探讨。首先，将5种酶制成复合蛋白酶进行正交实验，确定最佳酶解时间、温度、pH及加酶量，经检验，氨基酸转化率为77%；然后，通过实验确定CaCl2为最适钙源，以贝壳为原料，通过水飞法和酸法转化可制得贝壳源CaCl2。将扇贝裙边酶解液中复合氨基酸与来源于贝壳的钙螯合制备复合氨基酸螯合钙，以正交实验筛选出最佳螯合条件。经检验，该螯合反应螯合率达92%。     

温度和pH值对斜带髭鲷蛋白酶、淀粉酶活性的影响

研究了温度和pH值对斜带髭鲷Hapalogenys nitens蛋白酶、淀粉酶活力的影响。结果表明，斜带髭鲷胃内pH值范围为4.9～5.4；肝胰脏pH值为5.8～6.2；肠道pH值为6.5～6.9。蛋白酶活性随温度的上升而增加，在40℃达最大，40℃以上酶活性随温度的上升而下降。在不同消化器官中，蛋白酶活性大小顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在15～50℃范围内，斜带髭鲷消化道不同部位淀粉酶活性的最适温度均为35℃，淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在pH值为2.2～7.6范围内，胃蛋白酶活性的最适pH值为2.8；在pH值为4.8～8.0范围内，其他消化器官蛋白酶的最适pH值均为7.2；在最适pH值下，各消化器官中的蛋白酶活性由高到低顺序为：前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在pH值为4.8～8.0范围内，胃淀粉酶活性的最适pH值为6.0，肠、肝胰脏与幽门盲囊淀粉酶的最适pH值均为6.8，活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在最适温度和pH值下，蛋白酶活性由高到低顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏；淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。     

驼海燕内脏中蛋白酶的提取及其酶学性质的研究

以驼海燕为原料,用丙酮沉淀法制备蛋白酶粗酶,并对其酶学性质进行研究。试验结果表明,提取蛋白粗酶的最佳条件为:原酶液与丙酮的体积比为1∶1.6;蛋白酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.1;pH为7～9时可保持较高的酶活力;蛋白酶的酶活力在20～50℃基本稳定。酶促反应结果表明,Na+、K+、Li+、Mg2+对蛋白酶活力具有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Hg2+能抑制蛋白酶的活力,EDTA对蛋白酶活力的影响甚微。酶动力学方程表明,最大反应速度vmax=5.99U/mL,米氏常数Km=0.69g/mL。     

Effects of dietary protein levels on the activity of the digestive enzyme of albino and normal Apostichopus japonicus (Selenka)

We evaluated the effects of different proportions of dietary protein (5%, 10%, 15%, 20%, 25% and 30% protein) on the activity of digestive enzymes of normal and albino Apostichopus japonicus. The experimental diets were fed for 60 days, the optimal conditions for digestive enzyme activity in sea cucumbers were studied. The optimal temperature for protease was 29.3°C and the optimal pH was 1.8. The optimal temperature for amylase was 34.3°C and the optimal pH was 6.7. The optimal temperature for cellulase was 56°C and the optimal pH was 5.9. The activity of intestinal protease increased at first and then decreased as the proportion of dietary protein increased, reaching the maximum when the proportion of protein was 19.7%. The activity of protease in the intestine of normal sea cucumber was significantly lower than that of albino sea cucumber, and the activity of amylase was significantly higher than that of albino sea cucumber. This study is expected to provide a basis for further explaining the ecological difference of albino and normal A. japonicus.     

Study of digestive enzyme activities and partial characterization of digestive proteases in a freshwater teleost, Labeo rohita, during early ontogeny

Digestive enzymes of freshwater fish Labeo rohita (family Cyprinidae; class Actinopterygii; infraclass Teleostei; order Cypriniformes) were studied during ontogenic development. Amylase, protease and lipase activities showed a polynomial relationship with age of rohu, whereas trypsin, chymotrypsin and lipase activities exhibited exponential trends with the age of rohu larvae. SDS‐PAGE of crude enzyme extract revealed that the proteases of higher molecular weight (MW) appeared during early ontogeny, whereas low MW proteases were observed at a later stage. Substrate SDS‐PAGE supported the quantitative study of protease activities as evidenced with the increasing number and intensity of activity bands with the age of fish. The number of protease activity bands observed in 4, 10, 12 and 24 DAH (days after hatching) larvae were 5, 7, 8 and 9, respectively. Inhibition of protease activities with soybean trypsin inhibitor (SBTI) (58.6–81.2%), phenyl methyl sulphonyl fluoride (PMSF) (55.6–70%), N‐α‐p‐tosyl‐l ‐lysine chloromethyl ketone (TLCK) (41.1–52.3%) and N‐tosyl‐l ‐phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) (27.9–44.5%) indicated the presence of serine proteases, trypsin‐ and chymotrypsin‐like enzymes in rohu larvae. Inhibition with SBTI and TPCK showed power, TLCK and ethylenediaminetetraacetic acid showed exponential, whereas PMSF showed polynomial relationships during the study period.