肌注和口服氟苯尼考在中华鳖体内残留分析及药代动力学

研究不同给药条件下，氟苯尼考在中华鳖体内的残留及药代动力学特征。健康中华鳖160只，随机分为2组，按30 mg·kg^-1剂量分别单次肌注或口服氟苯尼考，高效液相色谱法测定中华鳖血浆和肌肉药物残留浓度，利用3P87药代动力学软件分析数据。肌注和口服时均符合一室开放模型；肌注给药的动力学方程C=16.72(e^-0.15t-e^0.52t) ，主要药代动力学参数：AUC=76.45 μg·mL^-1·h^-1，吸收半衰期（T_1/2Ka）=1.31 h，半衰期(T_1/2Ke)=4.48 h，最高血药浓度C_max=7.09 μg·L^-1；口服给药的动力学 方程为C=39.99(e^-0.19t-e^0.4t)，主要药代动力学参数：AUC=109.42 μg·mL^-1·h^-1，吸收半衰期（T_1/2Ka）=1.73 h，半衰期(T_1/2Ke)=3.63 h，最高血药浓度C_max=10.64 〗μg·L^-1。实验结果表明，氟苯尼考口服情况下，在中华鳖体内吸收快，血药浓度高，维持时间长，生物利用度高；药物在肌肉中消除缓慢。     

达氟沙星对史氏鲟红细胞抗氧化功能及微核形成的影响

2004年5月至7月间，用20 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1和100 mg·kg^-1剂量对史氏鲟经口灌服达氟沙星20 d，分别于第5、10、15 和20天定红细胞SOD、CAT、Na⁺、K⁺ATP酶、GST、GSHPX等抗氧化酶活性及丙二醛（MDA）含量，以评价达氟沙星对史氏鲟抗氧化防御功能的影响，同时进行红细胞微核率和总核异常率的测定。结果表明实验第5天各实验组红细胞SOD活性均显著高于对照组；各实验组红细胞中CAT的活性明显高于对照组；红细胞Na⁺、K⁺ATP酶活性没有明显的改变。实验第20天时100 mg·kg^-1剂量组GSHPX活性明显高于对照组及其他剂量组（P<0.05）；GST活性及MDA含量没有明显的影响。达氟沙星在实验剂量内对史氏鲟红细胞核微核率没有明显的影响，但核异常率呈明显升高。     

鳗弧菌感染牙鲆药物代谢动力学模型的初步建立

用鳗弧菌腹腔注射牙鲆进行人工感染实验,对感染牙鲆进行血液生理生化指标的测定,并观察描述患病牙鲆的外观症状及有关组织器官的病理变化,以高效液相色谱(HPLC)法为定量手段研究达氟沙星在健康和感染牙鲆体内的药动学特征。结果表明,(1)每公斤体重腹腔注射鳗弧菌2.0×107~3.0×107cells可复制出疾病模型;(2)与健康鱼相比,患病鱼的红细胞数、血红蛋白、血小板数、Cl-、Na 等显著下降,而白细胞数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌苷(Cr)、K 极显著增加,说明经鳗弧菌感染后,牙鲆在药物吸收、代谢等方面的生理功能受到严重损害;(3)患病鱼的肝、肾、脾等组织细胞均发生实质性病变,而对照组外观正常,组织器官未见病理变化;(4)达氟沙星在感染牙鲆体内的吸收、分布和消除均减慢,生物利用度降低。鳗弧菌感染必将影响药物在体内的分布和血浆蛋白结合率,改变药物及其代谢物从体内消除的速度和程度,进而影响药物的疗效。该模型复制的方法可靠且具有可重复性,它对探讨药物在患病鱼体内的动力学规律,揭示疾病对药动学的影响机理和指导临床合理用药等具有理论和实践意义。     

我国赤潮频发现象分析与海藻栽培生物修复作用

In this paper, the history, main events and present status of red tide (HAB, harmful algal blooms) along China coast in recent years were reviewed and presented. It showed that the HAB's frequency and scale, number of HAB spec ies, percentage of toxic HAB events and the degree of damages to marine environment and economy have sharply increased in China since 1960's. Eutrophication was key factor for high occurrence of red tide. In this paper, main causes of frequent HAB occurrence along China coast was discussed. Many factors might influence the occurrence of red tide, which included weather, climate, coastal current, tidal current, water temperature, salinity, hydrodynamic and nutrient conditions, trace metals and the variation of biological environment. Numerous evidences from all over the world revealed the linkage between the increases in nutrient loading and the occurrences of high biomass blooms. Eutrophication was one of the important causes that involved in high occurrence of HAB. The main sources of nutrients potentially stimulating HABs included terrestrial runoff, aquaculture selfpollution, atmospheric deposition, sea projects and other pollution events in the ocean. Studies showed that the input from land contaminations and the selfpollution of marine aquaculture accelerated eutrophication in coastal waters and were also important impact factors on red tide. Researches suggested that nutrient composition could affect the species composition of phytoplankton as well as the development of some HABs. The changes in nutrient supply ratios, primarily N∶P, often resulted in shifts in red tide species composition. The correlation between cysts and formation of HAB was discussed from the viewpoi nt of transformation of cyst and vegetative cell, the effects of trace elements and other organic substances on the occurrence of HAB were presented also. It indicated that the nutrient control could be an effective way to reduce the risk of red tide occurrence. Seaweed would play an important role for decreasing marine eutrophication. Among the different methods of red tide controlling studied, seaweed biomass has received much attention due to the cost saving, low sensitivity to environmental and impurity factors, the possible contaminant recovery from the biomaterial and its elevated adsorption capacity. Cultivated seaweeds have very high rates of productivity higher than that of seaweed in its natural habits and grow well in water bodies with higher nitrogen and other nutrients. Seaweeds are able to absorb large quantities of nitrogen, phosphorus and carbon dioxide, produce large quanti ties of oxygen, and have excellent effect on decreasing eutrophication. Large amounts of C, N and P are accumulated into seaweed tissues as they accumulate considerable biomass over a period of months or years depending on the cultivation season. When seaweeds are harvested, nutrients are removed from the sea area. An investigation was carried out for inorganic nitrogen and inorganic phosphorus concentration at Lusi Coast, Qidong County, Jiangsu Province in China, where there were about 270 hm2 for Porphyra yezoensis cultivation with eutrophic sea water in recent years. While during Porphyra yezoensis cultivation, from Sep 2003 to May 2004, the concentration of ammonium nitrogen declined form 0.511-0.778 mg·L^-1 to 0.006-0.057 mg·L^-1, nitrite nitrogen concentration declined from 0.010-0.040 mg·L^-1 to 0.001-0.009 mg·L^-1, and nitrate nitrogen concentration declined from 0.466-0.549 mg·L^-1 to 0.286-0.0568 mg·L^-1, the average concentration of inorganic phosphorus declined from 0.024 mg·L^-1 to 0.019 mg·L^-1. Furthermore, during five hours, the concentration of ammonium nitrogen in the seawater declined form 220.88 μmol·L^-1 to 8.59 μmol·L^-1 by cultivated Gracilaria lemanaiformis, and the concentration of ammonium nitrogen declined form 213.84 μmol·L^-1 to zero by cultivated Enteromorpha clathrata. Other bioremediation mechanisms of seaweed inhibiting the red tide microalgae such as nutrients competition and allelopathic effects were also discussed.     

酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留

运用酶联免疫法对水产品中呋喃唑酮代谢物残留测定的方法进行研究。结果表明，稀释倍数对回收率影响显著，而乙酸乙酯提取次数、光照条件和放置时间对测定结果无显著影响。向样品中分别添加0.60、2.00、6.00 μg·kg^-1 3个浓度水平的呋喃唑酮代谢物时，平均回收率分别为99.2%、96.0%和100.0%；批内变异系数为1.76%～12.57%，批间变异系数为5.43%～8.58%，最低检测限为0.3 μg·kg^-1。该方法灵敏度高，重复性较好, 适用于水产品中呋喃唑酮代谢物残留的筛选。     

杀鱼假交替单胞菌2515的抗弧菌效果及在对虾养殖中的应用

为探讨一株杀鱼假交替单胞菌 2515 Pseudoalteromonas piscicida (简称菌株 2515)在对虾养殖中的抗弧菌效果, 以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)为指示菌, 以鳗弧菌的敏感抗生素新霉素为参比, 采用牛津杯打孔法, 比较了菌株 2515 与抗生素抗菌等效关系。设置浓度分别为 10⁴ CFU/mL、10⁵ CFU/mL、10⁶ CFU/mL、10⁷ CFU/mL 的菌株 2515 与鳗弧菌共培养, 评价了该菌对鳗弧菌的拮抗效果。将含量 10³ CFU/g、10⁵ CFU/g、10⁷ CFU/g, 及 10³ CFU/mL、 10⁵ CFU/mL、10⁷ CFU/mL 的菌株 2515 分别添加到对虾饲料和养殖水体中, 养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei), 分析了菌株 2515 对水体和对虾肠道细菌总数、弧菌数及对抗副溶血弧菌效果的影响。结果显示, 相同抗鳗弧菌效果条件下菌株 2515 数量与新霉素质量存在对应关系, 与鳗弧菌混合培养时, 浓度 10⁶ CFU/mL 及 10⁷ CFU/mL 的菌株 2515 对鳗弧菌表现出强的抑菌作用。饲料中添加菌株 2515 浓度 10⁵ CFU/g 及 10⁷ CFU/g 时能够显著降低对虾肠道中的弧菌数量(P < 0.05), 提高对虾养殖的存活率。采用副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)攻毒, 显示在饲料中添加菌株 2515 浓度为 10⁵ CFU/g 一组对虾死亡率最低, 为(43.3±5.8)%, 对副溶血弧菌的相对保护率达(53.7±6.2)%。结果表明, 在饲料和养殖水体中添加适宜浓度的菌株 2515 均能够提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌的能力, 降低对虾肠道内的弧菌数量。本研究结果为对虾养殖弧菌病生物防控提供了一种技术支撑。     

低盐度养殖的凡纳滨对虾体长和体重的增长规律

通过池塘陆基围隔实验，研究了凡纳滨对虾在最适水温、溶氧、pH及低盐度(2～6)养殖环境的生长特性及规律。实验结果，低盐度养殖健康对虾体长和体重平均生长率分别为1.398 mm·d^-1和0.169 g·d^-1，对虾前期体长呈线性生长，中后期体重呈加速增长。非线性拟合结果，对虾体长生长为二次曲线，符合Quadratic模型，体重增长为S型曲线，符合Boltzmann模型，生长观测值与模型拟合相关系数R²均达到0.99；凡纳滨对虾低盐度养殖典型体长和体重生长模型为L=7.843+2.297t-0.0105t²和W=16.541+(-0.621-16.541)/(1+e^{(t-54.809)/15.456})。低盐度养殖，对虾体长与体重呈立方关系，符合幂指数模型W=aL^b，a值范围4.9～9.0×10^-6，b值范围2.9495～3.0716，相关系数R²在0.99以上，典型幂指数模型为W=4.9×10^-6L^3.0716。     

几种化学物质对西施舌幼虫附着和变态的诱导技术

采用添加不同化学诱导物的方法，研究了肾上腺素（EPI）、氨基丁酸(GABA)、L-多巴（L-DOPA）、Ca²⁺对西施舌眼点幼虫附着和变态的诱导作用，确定了化学诱导物 最佳诱导浓度。结果表明,EPI对西施舌附着和变态的诱导效果最为显著，当EPI浓度为10^-4 mol·L^-1时，附着率及变态率分别为88.3％及92.8％，同时成活率也高达98.14％；GABA亦有较好的诱导效果，当GABA浓度为10^-5 mol·L^-1，附着率及变态率分别为86.9％及87.6％；L-DOPA能诱导西施舌眼点幼虫变态，当L-DOPA浓度为10^-6 mol·L^-1时，变态率达73.3％，附着率达84.9%. Ca²⁺最适宜浓度为20 mmol·L^-1时，附着率、变态率及成活率分别为86.1％、42.8％和87.4％。以上4种化合物最适宜浓度诱导作用时，西施舌幼虫的附着率和变态率均显著高于对照组。实验还对Ca²⁺在西施舌大规模人工育苗中的诱导作用进行探讨。     

强壮箭虫摄食生态的实验研究

实验研究了强壮箭虫对几种食物的摄食选择性和几种生态因子对其摄食率的影响，以及摄食的昼夜节律。结果表明，强壮箭虫首先选食蒙古裸腹，其次哲水蚤，再其次猛水蚤，不摄食褶皱臂尾轮虫。食物密度、温度和盐度对其摄食率均有极显著的影响，其关系式分别 为（1）Y =-0.0394X^{2+1.5861X-4.0500(R2=0.9235)，（2）Y=-0.0514X2+1.3238X+7.3833(R2=0.9510) ，（3）Y=-0.0275X2+1.3992X-6.3571(R2=0.9041)。摄食的最适食物密度为每升100个裸腹（生物量15～20 mg·L-1），摄食率为11.9 ind·d-1；摄食的最适水温为12.9 ℃，摄食率15.9 ind·d-1；摄食的最适盐度为25.4，摄食率为11.4 ind·d-1。强壮箭虫在夜间或弱光条件下，摄食较为强烈，早晨8点到12点摄食率最低，午后4点到8点达到摄食高峰。}     

海湾扇贝对海水中镉的富集规律研究

本文利用原子吸收分光光度法研究镉暴露实验中海湾扇贝不同器官组织富集、排放镉的过程及影响因素。水体中镉通过被动扩散进入海湾扇贝鳃，根据吸附等温线并结合直线拟合结果得海湾扇贝鳃对镉的单层饱和结合量为2.12 μmol·g^-1 干重。鳃对镉的富集量和富集速率与水相中镉浓度成正相关关系，最高浓度组（2 μmol·L^-）的镉富集量和富集速率分别为(1.5±0.52) μmol·g^-1 干重和(0.375±0.13) μmol·（g·d）^-1。随着养殖时间的延长，海湾扇贝鳃、内脏和肌肉镉富集量逐渐增加，14 d（336 h）后，内脏和鳃中镉富集达到平衡，但肌肉中镉富集是否达到平衡，尚需进一步研究。盐度对海湾扇贝鳃、内脏和肌肉镉富集速率无显著影响（P>0.05）。富集在海湾扇贝体内的镉不断被排出，其中鳃的排放率最大，达到了38.3％，其次是内脏、肌肉。     

sodA、sodB和KatG在嗜水气单胞菌抗氧化胁迫中的协同作用

以嗜水气单胞菌野生株B11和基因稳定沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatGRNAi为研究对象,比较野生株和沉默株在不同氧化胁迫条件下sodA,sodB和KatG表达的相关性及与细菌生长和存活的相关性,以探讨抗氧化胁迫基因在细菌抵御氧化胁迫过程中的作用和机制。结果显示,无氧化胁迫条件下sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其余两个基因的表达均受到显著抑制,说明这些抗氧化胁迫基因在表达上密切相关。在外源H2O2胁迫下,sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其他两个抗氧化胁迫基因的表达均表现为显著上调;在甲基紫晶(MV)诱导的内源性活性氧(ROS)胁迫下,各沉默株中sodA或sodB的表达水平总体表达为上调,但是在KatG的表达却呈现下调,说明sods的表达在细菌抵御内源性ROS的损伤中更具重要性。在H_2O_2胁迫下,随着H_2O_2浓度的增加,野生株B11的存活率仍然保持在较高的水平,而沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatG-RNAi的存活率则显著降低;此外,菌株生长曲线显示,sodA、sodB和KatG的表达可影响嗜水气单胞菌生长曲线延滞期的长短。在不同浓度MV诱导的ROS胁迫下,野生株B11和沉默株KatG-RNAi的存活率仍然保持在较高的水平,沉默株sodA-RNAi和sodB-RNAi的存活率则显著降低,但4株菌仍然能保持一定的生长能力。研究表明,在不同氧化胁迫条件下,细菌可通过不同抗氧化胁迫基因的协同作用,共同抵御ROS的损伤,在H_2O_2的胁迫下,KatG对嗜水气单胞菌的生存更为重要,而在MV诱导的内源性ROS胁迫下,sod的表达对嗜水气单胞菌生存的贡献更为突出。     

团头鲂tf和tfr1a基因启动子克隆及转录调控分析

为探索鱼类转铁蛋白基因tf和转铁蛋白受体基因tfr1a的转录调控机制,本实验以团头鲂为研究对象,在其全基因组数据库中获取tf和tfr1a基因序列,对2个基因候选启动子区转录因子结合位点及CpG岛进行预测,通过PCR方法克隆得到tf和tfr1a基因近端启动子区不同长度片段,连接至pGL3-Basic/pEGFP-1载体,瞬时转染入Hela细胞,并采用双荧光素酶报告基因检测系统进行检测。结果发现,团头鲂tf基因启动子区无CpG岛位点,而tfr1a基因启动子区有2个CpG岛位点。成功构建9个tf和10个tfr1a不同长度启动子片段的重组质粒,经双荧光素酶报告基因系统检测发现,tf启动子核心区域为-268^+56 bp,且-1 308^-1 102 bp片段可能存在正调控该基因表达的转录因子结合位点;tfr1a启动子核心区域为-224^+48 bp,且+48^+92 bp可能存在抑制该基因转录的负调控元件,而-1 229^-1 219 bp区域可能存在促进tfr1a基因表达的正调控转录因子结合位点。     

凡纳滨对虾JAK和STAT基因在苏云金芽孢杆菌侵染过程中的表达变化分析

为了分析凡纳滨对虾JAK(Lv-JAK)和STAT(Lv-STAT)基因应答病原菌侵染的表达变化特征,本实验利用半定量PCR技术分析了Lv-JAK和Lv-STAT基因的组织表达特征,并利用实时荧光定量PCR技术分析了其在苏云金芽孢杆菌侵染过程中的表达变化特征。结果显示,Lv-JAK和Lv-STAT基因在凡纳滨对虾的9种组织中有不同程度的表达,均在鳃、肠道和心脏中表达量较高。苏云金芽孢杆菌感染后,在鳃组织中,Lv-JAK和Lv-STAT基因的相对表达量在感染的中晚期(24~72 h)显著上调表达;在肠道组织中,Lv-JAK基因的相对表达量在感染后的6和24 h显著上调,Lv-STAT基因的相对表达量在感染后的24和72 h显著上调。综上表明,JAK和STAT基因在一定程度上参与了凡纳滨对虾体内由苏云金芽孢杆菌引发的天然免疫应答过程,探讨凡纳滨对虾JAK和STAT基因应答苏云金芽孢杆菌感染的表达变化特征,有助于研究对虾JAK/STAT通路在应答病原菌侵染过程中的功能和作用机制。     

南移仿刺参美人鱼发光杆菌病病原分离鉴定与药敏分析

2020 年 11 月, 福建霞浦海域养殖仿刺参(Apostichopus japonicus)出现较大面积发病情况, 为确定其病原并筛选可用药物, 本研究分离了南移仿刺参腐皮综合征病原并对其理化因子、毒力因子和药敏特性进行了分析。结果显示, 从体表病灶部位分离得到 1 株优势菌株 XP-11, 经人工感染试验结果显示, 菌株 XP-11 对仿刺参有明显的致病作用, 感染后也出现体表溃疡等与自然发病相同症状。基于形态观察、Biolog 自动微生物鉴定, 以及 16S rRNA、 看家基因 gyrB 基因和尿素酶 C (ure C)基因序列分析结果, 确定菌株 XP-11 为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp. damselae)。毒力基因检测结果显示, 菌株 XP-11 含有溶血素相关基因 hlyAch 和磷脂酶活性相关基因 plpV 两种美人鱼发光杆菌典型毒力基因。药敏分析结果显示, 菌株 XP-11 对四环素、恩诺沙星、复方新诺明等 8 种抗生素敏感, 进一步采用微量法进行 MIC 值测定结果显示, 恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹、磺胺间甲嘧啶钠、磺胺甲 唑+甲氧苄啶等水产可用药对菌株 XP-11 的最小抑菌浓度(MIC)分别为 0.08、2、1、1、0.06、0.125、4、1.2/0.06 μg/mL。研究结果表明, 美人鱼发光杆菌美人鱼亚种是仿刺参腐皮综合征的病原菌, 其对仿刺参的半致死浓度(LD₅₀)为 1.08×10⁵ CFU/g 体重。     

大黄鱼sox9a/b基因的克隆与表达分析

为探究sox9基因在大黄鱼性别决定与分化过程中的作用,利用RACE方法克隆得到大黄鱼sox9a和sox9b 2个基因,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析其在雌雄个体不同组织和不同发育阶段的表达规律,并检测了其在17β-雌二醇处理后的遗传雄性和17α-甲基睾酮诱导处理后遗传雌性幼鱼中的表达变化。结果显示,大黄鱼sox9a c DNA全长2 442 bp(NCBI登录号:MH996431),包含476 bp 5′UTR、466 bp 3′UTR、1 500 bp ORF,编码499个氨基酸。大黄鱼sox9b cDNA全长为2 199 bp (NCBI登录号:MH996432),包含335 bp5′UTR、415 bp 3′UTR、1 449 bp ORF,编码482个氨基酸。qRT-PCR分析显示,sox9a基因主要在性腺、眼、脑、肝脏中表达,精巢中的表达量显著高于卵巢;sox9b在大黄鱼各组织中广泛表达,但以精巢中表达量最高,而卵巢中只有痕量表达。在鱼苗性腺发育初期,sox9a/b的表达量都维持在较低水平;随着鱼苗长大,sox9a/b的表达量在84 dph、123 dph 2次达到高峰,随后开始下降,10 mph后又逐渐上升。17β-雌二醇处理能够显著下调遗传雄性大黄鱼sox9a和sox9b基因在性腺中的表达,17α-甲基睾酮处理则显著上调遗传雌性大黄鱼sox9a和sox9b基因在性腺中的表达。研究表明,sox9a/b基因与大黄鱼性别发育和分化过程密切相关,对大黄鱼精巢的发育与维持起重要的调控作用,而且两个基因的功能可能具有一定程度的分化。     

近江牡蛎等3种贝类的脂类成分分析

分析3种贝类的脂类成分，以期为贝类的高值化加工利用提供基础数据。采用氯仿甲醇法提取近江牡蛎、波纹巴菲蛤和马氏珠母贝中的脂质成分，分析脂质中的胆固醇和磷脂含量，采用液液萃取技术分离中性脂和极性脂，并用GC-MS分析其脂肪酸组成。研究结果表明，3种贝类的粗脂肪含量基本在1%左右；脂质成分中胆固醇含量在0.07~0.12 mg/g；脂质中磷脂含量在14%~34%，极性脂含量在27%~45%；脂质中EPA和DHA总含量在12%~22%，近江牡蛎和波纹巴菲蛤脂质中EPA含量高于DHA，而马氏珠母贝脂质中DHA含量高于EPA。     

脊尾白虾Strawberry Notch1基因的克隆及免疫功能

为探究strawberry Notch1基因(SBNO1)在甲壳动物中的免疫功能,本文对脊尾白虾SBNO1的cDNA序列全长、系统进化、组织分布以及副溶血弧菌感染后SBNO1和Notch信号通路中相关基因表征进行了研究。结果显示,脊尾白虾SBNO1 cDNA序列全长4353 bp,共编码1380个氨基酸,预测相对分子量158.91 kDa,理论等电点4.81。qPCR分析显示,脊尾白虾SBNO1在各组织中均有表达,其中在肝胰腺里表达量最高,性腺次之。利用RNAi干扰SBNO1显示,脊尾白虾在感染副溶血弧菌后,干扰组死亡率显著高于未干扰组。副溶血弧菌感染脊尾白虾后显著影响了Notch信号通路中SBNO1、Numb与Delta在肝胰腺中的转录情况,而Jagged表达差异不显著。SBNO1和Numb的表达量随时间变化都呈现出先上升后下降的趋势,Delta的表达量呈现出先下降后上升的趋势。结果表明,Notch信号通路参与了脊尾白虾副溶血弧菌感染后的免疫。本研究有助于阐明无脊椎动物先天免疫的机制,为抗病脊尾白虾的分子育种提供理论依据。     

橘色双冠丽鱼黑素皮质素受体1基因(MC1R)整胚原位杂交

为探究黑素皮质素受体1基因(MC1R)在橘色双冠丽鱼胚胎发育和体色形成过程中的表达定位及功能,本研究首先制备了MC1R基因的RNA正反义探针,T7方向转录的正义RNA探针质量浓度为447.529 ng/μL,SP6方向转录的反义RNA探针质量浓度为342.698 ng/μL。经10～20倍稀释后的探针用于原位杂交,MC1R基因探针表达定位显示,随橘色双冠丽鱼胚胎的发育杂交信号总体呈逐渐减弱趋势,原肠期和视泡期其卵黄和胚体侧卧部分有杂交信号分布;出膜期其脊柱、卵黄囊及其内容物和色素细胞内出现杂交信号;出膜期第1天,卵黄表面有信号分布。总体来看,杂交信号在脊索、卵黄囊、卵黄囊内容物质及色素细胞有特异表达,而以正义探针作为阴性对照组在5个胚胎阶段均无任何信号,杂交信号显现的MC1R表达定位说明其在橘色双冠丽鱼色素细胞的分化、迁移中起到重要调控作用,也与神经、营养、免疫功能相关,初步建立了鱼类体色相关基因功能和定位研究的整胚原位杂交方法。     

马氏珠母贝磺基转移酶基因的克隆及功能

硫酸角质素具有丰富的携带大量负电荷的磺酸基团,参与生物矿化的成核过程。磺基转移酶催化磺酸基团的转移,对硫酸角质素的生物合成起决定性作用。本研究利用RACE技术克隆马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST1a全长,并通过RNA干扰技术检测PmCHST1a对硫酸角质素合成及贝壳珍珠层形成的影响。结果显示,PmCHST1a基因全长1385 bp,编码366个氨基酸;含有磺基转移酶结构域,具有跨膜结构和信号肽,定位于高尔基体上。组织差异表达分析发现,PmCHST1a在中央膜显著高表达。注射PmCHST1a的RNAi探针后,PmCHST1a在中央膜的表达量显著下调,并且外套膜外液中硫酸角质素的浓度显著降低;SEM检测发现珍珠层结构紊乱。综上所述,PmCHST1a可能通过影响外套膜外液中硫酸角质素的合成,参与珍珠层的形成。本研究为进一步探讨磺基转移酶及其参与合成的糖胺聚糖硫酸角质素在马氏珠母贝生物矿化中的作用提供依据。     

核糖体DNA在厦门白姑鱼和大黄鱼染色体上的比较定位

为了探究石首鱼核型微观结构上的变化,实验利用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)比较定位了厦门白姑鱼和大黄鱼18S rDNA和5S rDNA的分布特征。结果表明,厦门白姑鱼与大黄鱼在宏观核型以及18S rDNA和5S rDNA染色体分布等3个方面均存在较大差异。厦门白姑鱼的核型公式为2n=48t,臂数FN=48;单对18S rDNA信号分布于1号染色体臂间;单对5S rDNA信号分布于3号染色体近着丝粒区域。大黄鱼的核型公式为2n=2sm+4st+42t,臂数FN=50;单对18S rDNA信号分布于18号染色体短臂端部;5S rDNA信号9~11对,除一对分布于臂间外,其余全部分布于着丝粒端或短臂端部。综合其他石首鱼核型数据可以推断:厦门白姑鱼呈现原始核型特征,而大黄鱼核型是原始核型经染色体重排和/或转座衍生的特化核型;石首鱼宏观核型和18S rDNA分布模式总体保守,仅少数物种存在变化,而5S rDNA位点的分布模式存在高度的种间变化。本研究首次揭示了石首鱼物种间核型微观结构的变化,为进一步开展石首鱼分子细胞遗传学研究奠定了基础。