激素缓释制剂诱导海水养殖鱼类性腺发育成熟与生殖行为的研究进展

综述促性腺素释放激素类似物（GnRH-a)缓释制剂（SRDS），人绒毛膜促性腺激素（HCG）SRDS，类固醇激素SRDS；雄烯二酮（ADSD）和17a-甲基睾丸酮（MT），以及鲤垂体匀浆（CPE）混合SRDS诱导海水养殖鱼类性腺发育成熟和生殖行为的效果，认为采用GnRH-a SRDS处理性腺发育良好的鲈形目鱼类和鲆鲽鱼类，可以显著提高血液促性腺激素（GtH)水平，且持续时间长，诱导排卵成功，HCG乳胶SRDS可诱导日本鳗鲡（Anguila japonicus)血液GtH持续 升高，性成熟系数明显升高并且性腺发育成熟；HCG和CPE水／油／水（W／O／W）复乳SRDS对日本鳗鲡的催熟效果显著，采用ADSD和MT SRDS SRDS可成功诱导日本鳗鲡性腺成熟与排卵。     

鲟鱼生殖内分泌学研究进展

目前所有鲟形目鱼类均处于不同程度濒危状态,物种保育形势非常紧迫。鲟鱼生殖内分泌生理学研究是研究鲟鱼类生殖特性和人工繁殖的理论基础,对于物种保护和水产养殖均具有重要价值。与硬骨鱼类比较,目前人们对鲟鱼生殖内分泌的研究相对较少,研究集中在下丘脑-脑垂体-性腺轴所调控的生殖生理特性,已经对生殖轴上关键内分泌激素(如促性腺激素释放激素、促性腺激素类和性类固醇激素等)和环境因素对鲟鱼生殖内分泌的影响开展初步研究,生殖内分泌学研究手段已经成为评估野生和养殖鲟鱼类的生殖发育状况的重要工具。对鲟鱼生殖内分泌学研究进展进行简要概述,为进一步深入研究鲟鱼的生殖特性提供有益的参考资料。     

星突江鲽苗种实现规模化生产

6月，中国水产科学研究院黄海水产研究所组织有关专家在日照市海洋水产资源增殖站对该所承担的国家鲆鲽类产业技术体系（CARS-50）研究任务“星突江鲽苗种规模化繁育技术”和国家“十二五”863计划项目“新养殖海水种类苗种繁育技术”子课题“星斑川鲽苗种繁育技术”进行了现场验收。课题组在集成鲆鲽类亲鱼生殖调控技术的基础上，于2012年春开展了星突江鲽苗种规模化繁育技术研究，通过亲鱼优选、温光等综合调控亲鱼产卵、受精卵孵化环境控制和苗种规模化培育等配套技术工艺研究，实现了苗种规模化生产。     

鱼类芳香化酶活性研究的进展

鱼类的生殖活动受外部环境因素和神经内分泌的双重调节。下丘脑、脑垂体和性腺通过相互调节 ,促进和制约着鱼类生殖细胞的发生、性别分化和性腺发育成熟及其繁殖活动。如下丘脑产生促性腺激素释放激素 (ＧｎＲＨ)可刺激脑垂体分泌促性腺激素 (ＧｔＨ)作用于性腺 ,促使性腺组织产生类固醇激素直接作用于生殖细胞 ,引起生殖细胞发育成熟和排卵。同时 ,类固醇激素也会反馈抑制ＧｎＲＨ和ＧｔＨ的分泌。在类固醇激素的代谢过程中 ,需要多种酶参与催化 ,其中一种酶称为芳香化酶 (ａｒｏｍａｔａｓｅ) ,在其中起着关键的作用。许多研究表明 ,芳香…     

我国海水养殖鱼类生殖调控机理研究的现状及其展望

本文综述了近10余年来我国海水养殖鱼类生殖调控机理研究的现状:生殖内分泌器官的组织学与免疫组织化学,外源激素对鱼类性腺发育的影响,血液中主要性类固醇激素含量及其与生殖的关系,性别决定与性别控制研究,部分激素的生物化学和分子生物学等.目前我国海水鱼类内分泌机理的系统研究主要以石斑鱼为主,今后研究的重点:在个体水平、细胞水平和分子水平上齐头并进,深入阐述生殖内分泌调控机理;在石斑鱼研究的基础上,加强比目鱼内分泌调控机理研究.     

鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展

促性腺激素抑制激素是2000年由日本学者首次从鹌鹑脑中分离出的一种新型下丘脑神经肽,通过其受体介导参与机体的生长、生殖以及摄食等生理过程。迄今,只在金鱼、斑马鱼、星点东方鲀、罗非鱼以及斜带石斑鱼等几种鱼中鉴定出促性腺激素抑制激素。目前,鱼类促性腺激素抑制激素的生理学功能研究相对较少,且存在争议。鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的表达调控以及其他生理学功能仍有待进一步研究。本研究简要总结鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展,并对促性腺激素抑制激素的生理学功能进行概括讨论,旨在加深对鱼类促性腺激素抑制激素的认识和了解,为进一步研究做铺垫。     

不同倍性鱼的gnih和gnihr3差异表达分析

为研究促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone, GnIH)及其受体GnIHR在不同倍性鲫鲤生殖发育过程中的作用,实验通过PCR和RACE技术获得了二倍体红鲫和异源三倍体鲫的gnih、gnihr3基因c DNA全长。结果显示,2种鱼gnih基因编码的蛋白序列均含有GnIH肽典型的LPXRF标志,gnihr3基因编码的蛋白为含有7个跨膜区的G蛋白偶联受体。采用实时荧光定量PCR分析了2种鱼的gnih、gnihr3基因mRNA在不同组织中的表达情况,结果显示gnih基因主要在下丘脑中高表达;gnihr3基因在下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴中都有不同程度的表达;此外,无论是非繁殖期或繁殖期,gnih基因在红鲫下丘脑中的表达量均高于异源三倍体鲫;同时,gnihr3基因在红鲫下丘脑和垂体中的表达量均高于异源三倍体鲫,但在卵巢中的表达则后者较高。利用组织原位杂交分析了gnih和gnihr3基因在2种鱼下丘脑和垂体的组织定位情况,结果发现,gnih基因在2种鱼脑中Npp、Npo、NLT区均有明显杂交信号;gnihr3基因主要定位在这2种鱼垂体的PPD、RPD区,NH和PI区杂交信号较弱;同时,gnih和gnihr3基因在异源三倍体鲫中的杂交信号比红鲫弱。研究表明,在下丘脑大量表达的GnIH,结合广泛分布于HPG轴的受体GnIHR,并通过多条途径参与调控性腺发育。gnih、 gnihr3mRNA在2鱼组织中的表达存在差异性,从分子水平提供了异源三倍体鱼不育的证据,在鱼类繁殖生物学和遗传育种方面具有重要意义。     

养殖鱼类生殖内分泌调控相关功能基因的研究和应用

新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitory hormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,kisspeptin刺激脑垂体促性腺激素(GtH,gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放。然而,在鱼类中,相关研究甚少。本研究室利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼(Danio rerio)、金鱼(Carassius auratus)中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH以及它们相关受体的基因cDNA序列。氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异。比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因。通过配体受体结合实验,证明2种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异。金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH以及它们相关受体在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控。通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH的核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,并且能诱导金鱼排卵,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌。然而,在离体实验中,2种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平。以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统。本文侧重对这项研究以及相关的研究成果进行归纳与分析,旨为深入探讨鱼类生殖内分泌调控相关功能基因提供参考。     

Nesfatin-1调控斜带石斑鱼生殖作用的研究

Nesfatin-1是核连蛋白-2(nucleobindin-2,NUCB2)裂解后产生的一种神经肽。本研究克隆得到斜带石斑鱼两种编码NUCB2(NUCB2a和NUCB2b)基因的c DNA序列(nesfatin-1a和nesfatin-1b),并对它们的表达模式进行了研究。结果表明nesfatin-1a和nesfatin-1b在脑组织中广泛表达。在下丘脑中,两种nesfatin-1在卵巢发育的Ⅰ-Ⅴ时期表达量都比较低,在Ⅵ时期卵巢(退化的卵黄生成阶段的卵母细胞)中的表达量显著升高,揭示nesfatin-1可能参与了卵巢成熟的调控。进一步采用腹腔注射实验研究了两种nesfatin-1对生殖轴的影响。注射nesfatin-1a和nesfatin-1b 15 min和60 min后,下丘脑中促性腺激素释放激素Ⅰ型(Gn RH-Ⅰ)和促性腺激素释放激素Ⅲ型(Gn RH-Ⅲ)的表达量都显著下降;此外,垂体中FSH-β的表达在注射nesfatin-1 60 min后显著下调。这些结果表明nesfatin-1a和nesfatin-1b参与了斜带石斑鱼下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)的调控。     

GnIH多肽对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)下丘脑生殖相关基因表达的影响

本研究首次通过下丘脑离体孵育的方法研究促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)多肽对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)下丘脑中生殖相关基因的表达调控.研究结果显示,tsGnIH-1促进了gnrh2和gnih的表达,对gnrh3和kiss2的表达无影响;tsGnIH-2抑制了gnrh3的表达,对gnrh2、kiss2和gnih的表达无影响.GnIH多肽对生殖相关基因的不同调控表明同一前体蛋白编码的不同GnIH多肽在生殖调控中的作用不尽相同.本研究结果增加了对GnIH参与鱼类生殖调控机制的认识,为深入研究奠定了基础.     

饲料中添加南极磷虾粉对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevi)雄性亲鱼繁殖性能及抗氧化功能的影响

饲料中添加0、10％、20％的南极磷虾粉,配制3组(对照组K-0、K-10、K-20)等氮等脂的实验饲料,在室内流水养殖系统进行为期90 d的养殖实验,探讨南极磷虾粉对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雄鱼繁殖性能和抗氧化能力的影响.结果显示,饲料中添加南极磷虾粉对半滑舌鳎雄鱼肝体比、性体比、精液浓度、睾酮含量均无显著性影响(P＞0.05);K-10组与K-20组精巢中超氧化物歧化酶(SOD)活性无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于对照组(P＜0.05),K-10组与K-20组精巢、血清和肝脏中的丙二醛(MDA)含量无显著性差异(P＞0.05),但均显著低于对照组(P＜0.05).在本实验条件下,饲料中添加南极磷虾粉不能显著提高半滑舌鳎雄鱼的繁殖性能(P＞0.05),但能显著提高雄鱼的抗氧化功能(P＜0.05).     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验室诊断技术的研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)是一种严重危害种公猪和繁殖母猪及其仔猪的一种接触性传染病,是我国重要猪病病原体之一。为了预防和控制该病,建立有效实用的诊断技术是一个重要环节,文章就其免疫学诊断和分子生物学诊断的进展情况做一综述。     

石斑鱼人工繁育技术研究进展

石斑鱼是我国南方海水养殖的主要种类之一，由于天然种苗不足，人工育苗技术日显关键和重要。文章根据国内外石斑鱼人工繁育技术的研究现状，对石斑鱼的繁殖生物学、人工繁殖、早期发育、人工育苗技术及种苗生产所面临的问题等方面进行了综述和展望。     

半滑舌鳎摄食机理及营养策略

目前半滑舌鳎苗种培育技术方面已经取得重大突破，然而，由于半滑舌鳎在人工养殖条件下投喂困难，产业化养殖规模仍受到限制。为了解决半滑舌鳎的投喂摄食难题，本文对其捕食特征、摄食机理等进行了深入研究，并综合分析了半滑舌鳎摄食机理的最新研究成果。认为半滑舌鳎摄食机制具有两种模式：（1）对运动状态饵料，利用机械感觉定位（侧线），利用化学感觉识别（口咽腔味蕾）；（2）对静止状态饵料，利用化学感觉定位（嗅觉），利用机械感觉识别（无眼侧乳头状突）。基于半滑舌鳎的摄食机理，作者认为，对半滑舌鳎营养策略问题，应从在饵料中添加诱食剂增强嗅觉刺激和强化侧线刺激两方面来进行研究。     

雌雄半滑舌鳎脑垂体基因表达差异研究

为研究半滑舌鳎雌雄个体大小和生长速度差异悬殊的分子机理,采集来自同一亲本、同一发育阶段的半滑舌鳎雄鱼和雌鱼脑垂体,分别与Affymetrix的斑马鱼基因芯片杂交,筛选差异表达基因。芯片杂交结果显示二者共有1 051个基因检测到明显的杂交信号,其中上调基因486个,下调基因561个。进一步比较雄鱼和雌鱼杂交信号的比值(Ratio值),有39个基因的Ratio值小于0.6或大于1.5,其中sh3gl1b、meis2.1、acta1、Noxa、slc25a5这5种上调基因和col1a2、klf7、acta2这3种下调基因可能与半滑舌鳎雌雄生长差异相关。这一结果为深入研究半滑舌鳎雌雄性别分化与生长调控机制提供了新思路。     

促性腺激素调控半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵母细胞孕酮受体膜组分1的表达特征

采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1 (PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P＜0.05);在发育Ⅴ期的卵巢,成熟期卵母细胞的PGRMC1mRNA表达量最高(P＜0.05).采用不同浓度促性腺激素(HCG)处理卵巢发育Ⅴ期半滑舌鳎不同时相的卵母细胞,并通过qRT-PCR和Western blotting技术对其表达量变化进行检测.结果显示,20IU/mlHCG对PGRMC1 mRNA和蛋白表达的调控作用比10 IU/ml HCG作用更明显,表明PGRMC1 mRNA和蛋白表达对HCG调控作用存在剂量依存关系.HCG对半滑舌鳎不同时相的卵母细胞的调控作用效果不同,对第Ⅴ时相卵母细胞作用最明显(P＜0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用.PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料.     

Characterization of <Emphasis Type="Italic">kiss2</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">kissr2</Emphasis> genes and the regulation of kisspeptin on the HPG axis in <Emphasis Type="Italic">Cynoglossus semilaevis</Emphasis>

Reproduction allows organisms to produce offspring. Animals shift from immature juveniles into mature adults and become capable of sexual reproduction during puberty, which culminates in the first spermiation and sperm hydration or ovulation. Reproduction is closely related to the precise control of the hypothalamic–pituitary–gonadal (HPG) axis. Kisspeptin peptides are considered as the important regulator of HPG axis in mammalian. However, the current understanding of kisspeptin in flatfish is not comprehensive. In this study, we cloned and analyzed the kiss2 and kissr2 genes in Cynoglossus semilaevis. Interesting alternative splicing in the 5′-untranslated regions (UTR) of the Cskissr2 gene was found. The expression profiles of Cskiss2 and Cskissr2 showed relative high messenger RNA (mRNA) levels at the late gastrula stage during embryonic development, at total length = 40 mm during early gonadal differentiation, and in the brains and gonads of all investigated tissues. These results suggested that the kisspeptin system participated in embryogenesis and in the regulation of gonadal differentiation and development. Considering that the control and regulatory mechanisms of kisspeptin in the central reproductive axis are still unclear, we documented that the intramuscular injection of kisspeptin caused different sGnRH and cGnRH mRNA levels in a dose- and tissue-dependent manner. The mRNA expressions of FSH and LH were stimulated in the ovary and were inhibited in the testis under the kisspeptin treatments. These results provided foundations for understanding the roles of kisspeptin in the neuroendocrine system in fish. The manipulation of the kisspeptin system may provide new opportunities to control the gonadal development and even reproduction in fish.     

花[鱼骨]人工繁殖技术的研究

本文主要研究了花[鱼骨]的繁殖生物学和人工繁殖技术。经过实验摸清了花的性成熟年龄和成熟最小型,性腺的发育状况,花的繁殖力、产卵时间和水温、雌雄鉴别等;比较了不同催产药物对花的催产效果,2008年催产率达100%,受精率95.3%,孵化率95%,获鱼苗14.12万尾。     

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)黑色素富集激素基因的克隆和表达

为研究黑色素富集激素基因(MCH)表达调控与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)无眼侧黑化性状的关系,通过分子克隆获得了半滑舌鳎pMCH2,通过NCBI获得了pMCH1 cDNA序列,分析了pMCH mRNA的组织表达特性,探索了脑垂体和皮肤中的pMCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系.结果显示,pMCHl cDNA序列长476 bp,编码134个氨基酸,与鲽形目、鲤形目和鲈形目鱼类的pMCH1氨基酸聚为1个进化分支.pMCH2 cDNA序列全长为626 bp,编码147个氨基酸,与鲽形目和鲍形目鱼类的pMCH2氨基酸聚为1个进化分支.2种MCH mRNA在垂体中表达量最高,同时,MCH1 mRNA在除肌肉外的其他组织中均可检测到表达;MCH2 mRNA在脑、有眼侧皮肤、无眼侧正常皮肤、性腺和鳃组织中也可检测到较高表达.MCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系分析显示,脑垂体和皮肤中MCH1 mRNA表现出相似的表达变化趋势,都是10％黑化组的表达量最高,而后随黑化程度加大显著降低.对于MCH2而言,无眼侧正常鱼和无眼侧50％黑化鱼的脑垂体中都具有较高的MCH2 mRNA表达水平,但在无眼侧10％黑化组和无眼侧80％黑化组,其表达水平显著降低.皮肤中MCH2表现出随黑化程度加大而显著升高的趋势.本研究结果可为认识MCH基因与半滑舌鳎无眼侧黑化性状的表达调控关系提供基础资料.