虾夷扇贝F1自交衰退及其遗传调控机理

近交导致的种质退化严重影响虾夷扇贝养殖产业。为探明虾夷扇贝近交衰退的现象及遗传调控机理,在表型水平上,构建近交系数分别为0.5、0.25和0的自交组、近交组与自然群体对照组,追踪不同近交系数下虾夷扇贝幼虫期到成体期530日龄的性状差异,同时选取7个适合度性状,利用主成分分析法构建基于近交衰退的适合度指标评价方法;在基因组水平上,利用1个自交家系的亲本及其21个子代进行全基因组重测序,开展标记偏分离分析。试验结果显示：针对存活率性状,在幼虫期,自交组近交衰退率是近交组的1.31～3.05倍;在成体期,自交组近交衰退率是近交组的0.97～7.29倍。而生长性状,在幼虫期,仅有自交组保持较低的近交衰退率(1.65%～2.56%);在成体期,自交组与近交组几乎未发生衰退。基于重测序分型得到1 253 519个单核苷酸多态性用于偏分离统计,约99%在子代中发生了显著的偏分离,其中23%属于配子偏分离、77%属于合子偏分离,合子偏分离中有89%为杂合子过剩,即超显性效应起作用,仅10%受显性效应影响为纯合子缺失。试验结果表明,超显性效应及偏分离作用在虾夷扇贝F₁子代存活率性状...     

海湾扇贝南部亚种自交家系选育及其Kung育种值评价

从1991年引进、并于2005—2007经过3代大壳高群体继代选育的海湾扇贝南部亚种(Argopecten irradiansconcentricus Say)选育系F3养殖群体中,以5%的选择压力选取最大壳高个体(高值亲本)作为育种群体,从中随机挑选12个性腺成熟的个体作为亲本,利用其雌雄同体的特性建立12个自交家系,并与F3群体随机混交后代作对照,考察各家系后代的生长、存活等指标并采用Kung育种值及综合评定值对其进行评价,以期选育优秀自交家系,为该品种遗传改良提供物质基础。结果显示,各自交家系与对照组间受精率没有显著差异,但孵化率则存在显著差异(P<0.05),以B3、C2家系最高,其次为对照组(L0);在幼虫生长阶段,B3、C2家系幼虫壳长日增长显著(P<0.05)高于对照组,其他家系则显著(P<0.05)低于对照组;在养成期的4月龄,各组别的存活率以B3、C2家系显著(P<0.05)高于对照组,对照组显著(P<0.05)高于其他家系;4月龄个体的壳高、壳宽和体质量等生长指标,以B3、C2家系显著(P<0.05)高于对照组,对照组又显著(P<0.05)高于其他家系;各家系各指标的Kung育种值(Z)及综合评定值(Pi)的大小排序均呈现B3>C2>L0>A3>B4>A1>C4>B1>A2>B2>C3>C1。研究表明,12个自交家系中,9个产生了一定程度的自交衰退,1个败育,2个(B3、C2)表现出显著的存活和生长优势,成为超越L0的两个优秀家系。研究证明,利用高值亲本可提高优秀自交家系命中概率,提高选育效率,缩短选育周期。     

海湾扇贝“中科红”品种与普通养殖群体不同温度下早期性状的比较

采用自交、杂交和混交等不同的交配方式分别获得海湾扇贝“中科红”品种和普通养殖群体（对照组）的受精卵和幼虫，在20 ℃、23 ℃和26 ℃三个温度条件下培养，比较了两个群体在不同温度下的孵化率、10日龄幼虫存活率、1日龄和10日龄幼虫壳长。实验结果表明：“中科红”海湾扇贝自交系、杂交系和混交系的孵化率均大于对照组。自交系10日龄幼虫存活率显著高于对照组（P＜0.05），而杂交系和混交系的10日龄幼虫存活率小于对照组，但差异不显著（P＞0.05）。“中科红”海湾扇贝自交系（P＜0.05）和混交系幼虫的1日龄壳长大于对照组，杂交系的显著小于对照组（P＜0.05）。幼虫生长10日后，“中科红”海湾扇贝自交系、杂交系（P＜0.05）和混交系幼虫壳长均比对照组大，表现了较强的生长优势。温度对4个性状均有显著影响（P＜0.05）。“中科红”海湾扇贝对低温（20 ℃）和高温（26 ℃）的耐受性均高于对照组。     

墨西哥湾扇贝与华贵栉孔扇贝的远缘杂交

为进一步研究扇贝属间远缘杂交的可行性,以墨西哥湾扇贝(Argopecten irradians concentricus)与华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)作为亲本,建立了两种扇贝的正交组MH、反交组HM、墨西哥湾扇贝自交组MM和华贵栉孔扇贝自交组HH。对各实验组的胚胎发育速度、受精率、孵化率、D形幼虫发生率和幼虫生长速度进行比较,分析了不同温度、盐度和精子浓度对各实验组配子亲和力及合子育性的影响,并尝试运用BP神经网络模型预测杂交组浮游幼虫的生长趋势。结果表明,两种扇贝的正反杂交均可获得早期杂交子代(F_1)。从胚胎发育情况看,正反杂交组幼虫发育到D形幼虫的时间均少于两个自交对照组;其受精率、孵化率、D形幼虫发生率也低于两个自交对照组;即使在不同温度、盐度和不同精子浓度下正反交组的受精率和孵化率也均低于两个自交组。从浮游幼虫生长情况看,正反交组D形幼虫的壳长和壳高均高于两个自交组,具有显著的差异性(P0.01),表现出较明显的杂种优势。运用BP神经网络模型对正反交组的浮游幼虫进行预测,其预测值与实测值的误差率均小于4%。     

近交对长牡蛎幼虫和稚贝生长与存活的影响

分别以2010年通过2个野生个体进行交配获得的A01全同胞家系和2011年通过A01家系子代进行交配获得A02全同胞家系为亲本,在2013年6月采用同时建立全同胞交配子一代F1(F=0.250)、全同胞交配子二代F2(F=0.375)及设置对照组(F=0)的方法,研究在相同环境条件下,不同实验组的受精率与孵化率以及近交对长牡蛎幼虫期、稚贝期生长和存活的影响,并初步探讨近交代数与近交衰退的关系。结果发现,各组的受精率均在90%以上,除F2组外其余2组的孵化率也在90%以上;幼虫阶段,F1组和F2组的壳高与壳长均从12日龄出现衰退(近交衰退系数,inbreeding depression coefficient,IDC0),且F2组壳高的近交衰退系数均小于同日龄F1组壳高的近交衰退系数;F1组和F2组的存活率在整个幼虫期间均出现衰退,且F1组和F2组存活率的近交衰退系数均随着幼虫日龄的增加而逐渐减小。稚贝阶段,F1组和F2组的平均壳高在各日龄均表现出近交衰退(IDC0),且F2组壳高的近交衰退系数均小于相同日龄F1组壳高的近交衰退系数;3个实验组的平均壳长在整个稚贝阶段无显著性差异;F1组和F2组存活率的衰退在不同日龄始终存在(IDC0),且随着稚贝日龄的增加其衰退程度逐渐加大。研究结果为长牡蛎选择育种和遗传改良提供了基础资料。     

海湾扇贝杂交家系与自交家系生长和存活的比较

2002年春季,利用国内现有的海湾扇贝两个不同遗传背景的养殖群体A和B的种贝为材料,采用自体受精和异体受精两种交配策略,建立了海湾扇贝的自交系和杂交系。实验由AA(A♀×A♂)、BB(B♀×B♂)、AB(A♀×B♂)、BA(B♀×A♂)四个组组成。杂交使两个表型性状———生长和存活都得到了改良。就生长而言,杂交组比自交组快,杂种优势在幼虫期为35.34%、养成阶段为21.17%;杂交组AB的生长速度比自交组AA的提高了35.53%(幼虫期)和43.32%(养成阶段),杂交组BA的生长速度比自交组BB的提高了35.13%(幼虫期)和12.34%(养成阶段)。就存活而言,两个杂交组的存活率都高于相应的自交组,杂种优势的平均值在幼虫期为19.93%,养成阶段为31.46%;杂交组AB的存活率比自交组AA的提高了25.23%(幼虫期)和49.44%(养成阶段),杂交组BA的存活率比自交组BB的提高了12.36%(幼虫期)和21.29%(养成阶段)。A、B两个群体间存在的遗传差异是它们能够获得杂种优势和性状得到改良的基础。     

虾夷扇贝三倍体诱导与培育技术的研究

取繁殖期虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis)亲体，采用阴干、流水和升温海水催产以及小水体、高密度、雌雄分池排放、人工授精的方法，可获得批重受精卵。分别使用浓度为0．05，0．10，0．15，20，0．30，0．50和0．70mmol/L的6－DMAP诱导虾夷扇贝三倍体，实验水温分别为12℃和14℃。结果表明，水温12℃，6－DMAP0．05mmol/L时，在授精后67min处理胚胎45min诱导三倍体效果较好，三倍体率达83．3％，面盘幼虫相对孵化率达69．5％；水温12℃和14℃时，6－DMAP可诱导17．3％－100．0％的三倍体面盘幼虫；6－DMAP处理组胚胎发育至面盘幼虫的时间比对照组慢，故应推迟1d选优；处理组幼虫初始壳长、壳高及日生长速度皆高于对照组；6－DMAP的残留人影响处理幼虫的成活率，用0．2ml/L的DMSO海水浸洗处理可减轻6－DMAP的副作用。     

不同壳色虾夷扇贝家系F1幼虫生长及遗传结构的比较分析

虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)群体存在2种壳色个体,简称白贝和褐贝。本研究通过近交和杂交方法建立了褐贝(♀)×褐贝(♂)、白贝(♀)×褐贝(♂)、褐贝(♀)×白贝(♂)和白贝(♀)×白贝(♂)4个家系,分别用1F、2F、3F和4F代表,每家系设3个平行,共12个家系。对各家系的卵径、幼虫的孵化率、成活率和生长性状等生物学参数进行了比较,建立了各个家系幼虫壳长、壳高的生长方程,并利用微卫星标记比较4个家系的遗传差异。结果表明,不同壳色家系间卵径大小、幼虫的孵化率、成活率差异不显著(P0.05),家系4F幼虫期壳长和壳高日生长速率均高于1F、2F和3F,且差异显著(P0.05),家系2F、3F和4F间幼虫期壳长和壳高日增长速率差异不显著(P0.05)。家系1F的遗传多样性最低;遗传相似性系数(0.6351～0.9772)和遗传距离(0.0231～0.4540)分析表明,1F和4F之间遗传相似性(0.6351)最低,遗传距离(0.4540)最远;不同家系间存在着遗传差异,1F和4F差异最大。本研究结果初步说明虾夷扇贝群体内白贝个体和褐贝个体之间产生了遗传分化,这种遗传结构的差异造成了不同壳色家系在幼虫阶段生长性状上的不同。     

不同pH对海湾扇贝胚胎发育及幼虫生长发育的影响

为探究pH对海湾扇贝(Argopecten irradia)胚胎发育及幼虫生长发育的影响，本研究以pH 8.0~8.2为对照组，分析不同pH (分别为7.6~7.7、7.3~7.4、7.0~7.1和6.7~6.8)对海湾扇贝胚胎及幼虫的影响。结果显示，随着pH的降低，各实验组孵化率降低，畸形率增高，孵化时间延长，且幼虫个体明显小于对照组(P<0.05)。D形幼虫期与壳顶幼虫期幼虫存活率与生长速率均显著低于对照组(P<0.05)。幼虫发育至第8天时，pH 7.0~7.1与pH 6.7~6.8实验组的存活率分别为6.1%和5.6%，而对照组为75.2%，除pH 7.6~7.7组外，各实验组生长速率均在3.4 μm/d及以下，基本呈现生长停滞状态。眼点幼虫附着率与对照组差异显著(P<0.05)，第7天时，pH 6.7~6.8实验组附着率仅为31.7%。研究表明，海水pH变化对海湾扇贝早期胚胎及幼虫生长发育具有显著影响，该研究为评估pH变化对海湾扇贝等经济贝类资源和养殖产业的影响提供了参考资料。     

皱纹盘鲍幼虫流水孵化培育技术的研究

采用紫外线海水培育、充气海水培育、流水孵化培育、流水孵化培育中试4种不同方法进行皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）幼虫孵化培育，并与常规孵化技术对照，结果表明：紫外线海水孵化培育组幼虫48h面盘与壳分离死亡；充气流水培育组幼虫发育畸形；48h下沉死亡；流水培育组幼早孵化率为69.7%，流水培育中试组幼虫孵化率达75.8%。而对照组孵化率仅为23.5%。流水孵化培育不仅提高了孵化率，而且稳定性较高，同时节省大量劳动力。     

Ca~(2+)对鱼类EOG的影响及其解毒作用的探讨

研究四种浓度Ca~(2+)溶液对罗非鱼嗅电图(electro-olfactogram,简称EOG)的影响,探讨Ca~(2+)对重金属中毒鱼的解毒效应,并讨论其可能机制。结果表明,①Ca~(2+)对罗非鱼EOG具双重效应;②Ca~(2+)能使重金属中毒鱼的EOG幅值增高,反映其具有一定的解毒作用,效果顺序为Hg~(2+)>Cu~(2+)>Zn~(2+)>Cd~(2+);③Ca~(2+)对Cu~(2+)+Zn~(2+)混合液也具一定解毒作用。     

溴氰菊酯对克氏原螯虾的氧化胁迫效应

为了解溴氰菊酯对克氏原螯虾的毒性及致毒机理,采用24h换水式生物试验研究了溴氰菊酯对克氏原螯虾的96h急性毒性,分光光度法检测了6、12、24和48h后0.01、0.02和0.04μg/L溴氰菊酯对肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)的含量等氧化胁迫相关指标的影响。结果表明,24、48和96h的半致死浓度分别为0.1560、0.0993和0.0562μg/L,安全浓度为5.62ng/L;在整个暴露过程中,溴氰菊酯各个处理组都引起了氧化胁迫相关指标的变化。SOD和CAT活力的变化趋势相同,都呈抑制-诱导-抑制的变化规律,MDA含量则一直高于对照组。暴露6h后,0.01μg/L浓度组MDA含量极显著高于对照组(P<0.01),0.04μg/L浓度组MDA含量约为对照组的1.98倍(P<0.05);暴露12h后,MDA仍保持较高水平,0.02μg/L浓度组MDA含量约为对照组的1.76倍(P<0.05);暴露24h后,各浓度组CAT活力分别比对照组上升了70.98%、73.05%和66.67%(P<0.01);暴露48h后,0.01、0.02μg/L浓度组的SOD活力分别下降了...     

菲和苯并（b）荧蒽曝露对翡翠贻贝外套膜的氧化胁迫及损伤

实验室条件下研究了不同质量浓度（2.0μg.L-1、10.0μg.L-1和50.0μg.L-1）的菲（PHE）和苯并（b）荧蒽（BbF）胁迫15 d和清洁海水恢复7 d中翡翠贻贝（Perna viridis）外套膜组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）质量摩尔浓度的变化。结果表明,PHE胁迫下翡翠贻贝外套膜SOD活力呈先升高后降低的变化规律;BbF胁迫下的翡翠贻贝外套膜SOD活力在胁迫第15天时被显著诱导（P〈0.05）。从b（MDA）的变化来看,PHE和BbF均可导致翡翠贻贝外套膜明显的氧化损伤,之后在清洁海水的净化过程中,这种损伤逐渐降低并恢复至正常水平。鉴于2种PAHs胁迫下翡翠贻贝外套膜SOD活力和b（MDA）均发生明显变化并表现出一定的差异性,翡翠贻贝体内的生化指标适合指示PAHs对海洋环境的污染。     

高温胁迫对棘胸蛙蝌蚪抗氧化酶活力的影响

实验利用水温从18~30℃骤升和缓升两种模式,高温胁迫处理棘胸蛙(Quasipaa spinosa)蝌蚪后,提取其尾部肌肉和内脏团的组织液,进行乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)等酶活力和丙二醛(MDA)含量测定。结果表明,棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉提取液的LDH活力显著高于内脏团(P0.01);高温胁迫下棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉和内脏团提取液的LDH活力显著提高(P0.01)。高温胁迫下棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉和内脏团的GSH-Px活力均显著降低(P0.01,P0.05),且水温骤升模式下的内脏团GSH-Px活力显著高于缓升模式(P0.01)。在30℃高温胁迫时,棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉和内脏团SOD活力均显著降低(P0.05,P0.01),且水温骤升模式的棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉和内脏团SOD活力均高于缓升模式(P0.05,P0.01)。高温胁迫下CAT活力均显著下降(P0.01),且缓升模式下的棘胸蛙蝌蚪CAT活力显著高于骤升模式(P0.05,P0.01)。在两种升温模式下,高温胁迫对尾部肌肉的AKP活力均无显著影响;而在骤升模式下,高温胁迫的棘胸蛙蝌蚪内脏团的AKP活力显著提高(P0.05)。高温胁迫下的棘胸蛙蝌蚪尾部肌肉和内脏团MDA含量均显著升高(P0.01),骤升模式下高温胁迫的棘胸蛙蝌蚪内脏团的MDA含量显著高于尾部肌肉(P0.01)。     

应用Beverton-Holt单位补充量产量模型估算东海区带鱼生物学参考点F_(0.1)和F_(MSY)

应用Beverton-Holt单位补充量产量模型,估算东海区带鱼生物学参考点F0.1、FMSY及其对应的MSY、Y0.1,并探讨了开捕年龄tc与上述生物学参考点的关系。结果表明,在当前的开捕年龄条件下,带鱼的F0.1比FMSY降低了31.71%,而单位补充量产量Yw/R只下降了4.46%;F0.1、FMSY随tc的提高而不断增大;若以MSY/R为管理目标,当tc为3.08龄时,Yw/R取得最大值329.41 g,可承受较大的捕捞强度;若以Y0.1/R为管理目标,当tc为2.50龄时,Yw/R取得最大值281.32 g,而F0.1仅为0.66。     

邻苯二甲酸二丁酯对汉氏棱鳀生化指标的影响

采用海洋中上层鱼类汉氏棱鳀（Thryssa ham iltonii）为试验生物,研究了邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对海洋鱼类的毒性。结果显示,DBP对汉氏棱鳀的24 h、48 h和96 h的半致死质量浓度（LC50）分别为3.75 mg.L-1、1.52 m.gL-1和0.94 m.gL-1,安全质量浓度为0.07 m.gL-1。DBP对汉氏棱鳀内脏团中的超氧化物歧化酶（SOD）活性在第24小时表现为0.07 m.gL-1浓度组受诱导而0.55 m.gL-1浓度组被抑制,而第72小时0.07 m.gL-1浓度组被抑制而0.14 m.gL-1组被诱导升高,其他浓度组无显著变化;脑中各浓度组则表现为第24小时受到明显的诱导而到第72小时被抑制。DBP胁迫下仅第24小时引起了2组织细胞氧化损伤,细胞脂质过氧化物（MDA）的质量摩尔浓度都明显升高。内脏团中的乙酰胆碱酯酶（AChE）活性表现为0.07 m.gL-1浓度组受诱导升高而其他浓度组被抑制;而脑中0.55 m.gL-1浓度组为先受诱导升高后被抑制降低,其他浓度组则一直表现为受诱导升高。结果表明,DBP在此试验质量浓度下对汉氏棱鳀产生了明显的毒性作用,对海洋生物存在危害,应对其海洋环境生态风险加以关注。     

双重PCR检测携带有t1和tdh基因的副溶血弧菌毒力菌株

在常规PCR技术的基础上优化条件 ,建立并完善双重PCR技术 ,并通过检测阳性对照和待检样品 ,进一步确定其检测的可行性。结果表明在常规PCR方法中为阳性的样品 ,包括阳性对照以及待检样品 ,在双重PCR方法中也呈现阳性 ,为阴性的样品在本方法中则也呈现阴性 ;能在血平板中出现溶血圈的在本法中也被印证含有tdh基因。由此证实本方法确实能对tl和tdh两种基因同时进行检测 ,成功地证明了同时检测tl和tdh两种基因的双重PCR方法的可行性。该法不但具有常规PCR的优点 ,而且还能节省耗材和时间 ,可用于检测水产食品以及临床样品中的副溶血弧菌的毒力菌株     

Fatty acid composition of New Zealand green-lipped mussels, Perna canaliculus: Implications for harvesting for n-3 extracts

Marine bivalves offer a potentially important source of long-chained polyunsaturated fatty acids (PUFA) for human health supplements. Lipid extracts from individual New Zealand green-lipped mussels (NZGLM) were analyzed as fatty acid methyl esters (FAME) by gas chromatography to assess geographical and seasonal differences between large (86 ± 1 mm) male and female and small (44 ± 1 mm) mussels. PUFAs dominated in spring and summer, comprising ∼ 50% of total fatty acids. Moreover, the commercially important n-3 fatty acids, 20:5n-3 (eicosapentaenoic acid, EPA) and 22:6n-3 (docosahexaenoic acid, DHA) together accounted for 70-79% of total PUFAs in spring and summer. During winter there was a marked decrease in condition and total n-3 PUFAs and a concomitant increase in saturated fatty acids in mussels, suggesting they had already spawned, had increased metabolic demands and limited PUFA-rich phytoplankton as food. While total n-3 content was not significantly different, there were geographical differences in individual n-3 fatty acids. Mussels collected from the cooler waters of Stewart Island had greater levels of 20:5n-3 (EPA), while those collected in Marlborough had greater concentrations of 22:6n-3 (DHA), which was attributed mainly to differences in phytoplankton composition. Total n-3 content and the condition index varied seasonally with greater concentrations of n-3 PUFAs, especially EPA, recorded in large mussels in spring, coincident with spring diatom blooms. Total PUFA levels and condition indices remained high in summer. There was no significant difference in condition indices, total n-3 content, DHA or EPA levels between large male and female mussels. Conversely, large mussels had significantly greater amounts of n-3 PUFAs than small mussels at Marlborough Sounds, while small mussels had marginally greater total n-3 concentrations than large mussels at Stewart Island. Taken together, these results suggest that the NZGLM offers a potentially important source of n-3 PUFAs for human health supplements. Our findings suggest that optimal harvesting conditions occur in spring when mussel condition and n-3 content peak for large mussels. Although DHA and EPA levels varied geographically, total n-3 content was not significantly different between sites, which implies that harvesting mussels for n-3 extracts would be driven more by logistical considerations.     

养殖用水中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的测定

建立了用高效液相色谱紫外、荧光检测器同时检测养殖用水中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的分析方法。孔雀石绿和结晶紫用紫外检测器588 nm波长检测;隐色孔雀石绿和隐色结晶紫用荧光检测器检测,激发波长:265 nm,发射波长:360 nm。孔雀石绿和结晶紫的线性范围5.0~2500μg/L;隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的线性范围1.0~1 000μg/L,四种物质的检出限均为0.5μg/L,回收率均在70%以上,RSD15%,此方法也可用于地下饮用水中孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的检测。