美国金鳟的同工酶分析

本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对养殖型美国金鳟眼(E)、心(H)、肾(K)、肝(L)、肌肉(M)五种组织的乙醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6- PDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和过氧化物酶(POD)等7种同工酶进行电泳研究。结果显示：美国金鳟中ADH、EST、G-6-PDH、GDH、LDH、MDH、POD、SOD 7种同工酶都有不同程度的组织特异性;美国金鳟群体同工酶分析共记录18个基因座位,其中有8个基因座位为多态,等位基因总数为26个,从而得出多态座位百分数P为44．44％,位点有效等位基因数Ne=1．4444,表明美国金鳟群体遗传多样性偏高。     

金乌贼胚胎发育的研究

对人工孵化条件下金乌贼的胚胎发育进行了观察。刚产出的卵子,均重0.99g/粒(n=100),长轴为11～24mm,短轴为8～15mm,卵黄如鸡蛋状,梨形,长径5～6mm,短径3～4mm,外包三级卵膜。三级卵膜在胚胎发育过程中经历一个柔软-定形-缩小-膨大的变化过程。受精卵在20～25℃水温下孵化,经过26d幼体陆续脱膜孵出。根据胚胎发育的外部形态及典型特征将金乌贼胚胎发育过程划分为细胞分裂期、囊胚期、原肠期、器官发育期、出膜期5个典型时期。在胚胎发育过程中,眼的形态变化比较大,且经历一个无色、红色再到黑色的变化过程。     

山东近海石鲽的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术研究山东半岛南岸海阳近海石鲽同工酶的组织特异性及群体遗传结构。结果表明，石鲽的眼、鳃、肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脾脏和鳍条共8种组织的17种同工酶表达有明显的组织特异性。对肝脏和肌肉两种组织的AAT、ADH、EST、GPI、G3PDH、IDHP、LAP、LDH、MDH、MPI、PGDH、PGM、SDH和SOD等14种同工酶进行了遗传学分析，共记录了21个基因座位，其中，GPI-2^*、JDHP-2^*、MDH-1^*、MPI-1^*、PGM-3^*、SDH^*共6个基因座位呈多态，其多态座位比例为0．2857(P0.99)，平均观测杂合度和预期杂合度分别为0．0321和0．0283，平均有效等位基因数为1．3650，遗传偏离指数均大于零。石鲽和圆斑星鲽同工酶比较分析表明，二者在AAT^*、ADH^*、GPI-1^*、IDHP^*、LDH^*、MDH-1^*、MDH-2^*、MDH-3^*、MPI-1^*、PGM-1^*、PGM-2^*、SOD^*和SDH^*存在基因置换或近于基因置换，两种间的遗传距离为1．3117。     

金乌贼精子的超微结构

应用扫描电镜和透射电镜观察了金乌贼精子的超微结构.结果表明,精子全长为191.84μm(n-10),由头部和尾部组成.其中,头部主要由顶体和细胞核组成,尾部分为中段、主段和末段3个部分.头部顸体为呈倒"U"字形的囊状体,亚顶体腔呈形.细胞核细长,呈圆柱状,稍弯曲,为高电子密度的均质结构.核后窝偏离细胞核中心位置.尾部中...     

芬兰虹鳟鱼同工酶分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对芬兰虹鳟肌肉(M)、心(H)、肝(L)、肾(K)、眼(E)等5种组织中的乳酸脱氢酶(LDH)、乙醇脱氢酶(ADH)、苹果酸酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)、过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)进行了初步研究,并对各种酶的同工酶位点及酶谱表型进行分析。结果表明,除酯酶外,其他5种同工酶均表现出不同程度的组织特异性。同工酶表型种群遗传学研究发现,6种同工酶共记录15个基因座位,多态座位比例(P=40%)略高,位点有效等位基因数(Ne=1.4)较大,表明芬兰虹鳟种群遗传多样性偏高。     

金乌贼腕式研究

对金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)的腕式及其在分类学中的应用进行了探讨。研究结果表明：金乌贼不同时期的不同个体出现了不同的腕式。Duncan多重比较分析表明，腕式依个体、大小、左右和性别不同而有差异。当一个种雌性及雄性样本左、右腕的腕式都一致时，可以认为是该种的腕式。否则，需指出性别、大小、左右等前提。建议在金乌贼研究中慎重使用腕式。     

金乌贼精子的超微结构

应用扫描电镜和透射电镜观察了金乌贼精子的超微结构。结果表明,精子全长为191.84μm(n=10),由头部和尾部组成。其中,头部主要由顶体和细胞核组成,尾部分为中段、主段和末段3个部分。头部顶体为呈倒U字形的囊状体,亚顶体腔呈∩形。细胞核细长,呈圆柱状,稍弯曲,为高电子密度的均质结构。核后窝偏离细胞核中心位置。尾部中段较长,由线粒体距及其不完全包围的鞭毛组成。线粒体距分为上段和下段,上段含较多线粒体,下段无线粒体。尾部鞭毛主段细长,由9+2结构的轴丝及外围9束粗纤维组成,构成典型的9+9+2结构。     

蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)进行同工酶分析。结果表明:在蓝色鳞鲤的眼睛、肌肉、肝脏、心脏、肾脏5种组织中,14种酶(LDH、ADH、GDH、MDH、G-6-PDH、EST、POD、SDH、FDH、SOD、α-AMY、CAT、COX、ME)的同工酶谱均存在明显的组织特异性。14种酶共记录出33个基因位点,其中α-Amy-2、Cox-2、Est-1、Ldh-1、Mdh-1、Mdh-2和Sod-1为多态位点。蓝色鳞鲤群体的多态位点百分数为21.21%(P0.99),平均预期杂合度和平均实际杂合度分别为0.1079和0.2121,遗传偏离指数(d)值为正。平均有效等位基因数(Ne)为1.24。实验表明,目前蓝色鳞鲤群体的种质资源状况尚好,表现出明显的杂交优势。     

金乌贼人工越冬养殖技术

利用工厂化养殖设施,人工调控水温在8～22℃范围内,通过冬季153天的人工养殖,金乌贼越冬养殖成活率达到86．8％。越冬期间,金乌贼仍保持较高的生长速度,胴长总增长率达到151．5％,体重总增重率达到1137．3％。研究认为金乌贼偏爱摄食虾类,养殖饵料系数为2．91。在人工调控下,金乌贼生长不足10个月即达到性成熟,3月份即开始交配产卵繁殖。     

兰州鲇不同组织同工酶及群体遗传结构初步分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了兰州鲇(Silurus lanzhouensis)肌肉、心脏、肝脏、脑、脾脏、肾脏和眼睛等7种组织中乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、醇脱氢酶(ADH)、山梨醇脱氢酶(SDH)和谷氨酸脱氢酶(GDH)等6种同工酶的表达模式,并对各同工酶的酶谱进行了分析。结果表明:这6种同工酶在兰州鲇7种组织中的分布均存在明显的组织特异性;6种酶共记录出17个基因位点,其中EST-2、EST-3、MDH-3和SDH-2为多态位点;兰州鲇群体的多态位点比例P为23.53%,位点平均有效等位基因数Ne为1.24;平均观测杂合度和平均期望杂合度分别为0.137 2和0.105 1,Hardy-Weinberg遗传偏离指数D为0.305 4,杂合子处于过剩状态。从以上数据中可以看出,兰州鲇野生群体遗传变异程度较大,但是有效等位基因数偏低,有必要对兰州鲇野生种质资源及时加以保护。     

金乌贼荧光标志方法的研究

建立一种简单实用的标志方法,对更好地评价金乌贼增殖放流效果和渔业资源现状非常重要.以金乌贼为实验对象,利用荧光物质茜素络合指示剂(Alizarin Complexone,ALC)浸泡金乌贼幼体,对其内壳进行标志,所用荧光染色剂浓度为(6.0～8.0)×10-3%,浸孢染色时间24 h.将标志组和对照组的金乌贼幼体分别暂养于1.5 m×1.5 m×1.5 m水泥池30 d,后将暂养的幼体放养于面积为2 667 m2的室外土池,并在60 d后,将平均胴背长达91.4mm(对照组)、87.6 mm(标志组)金乌贼幼体移入室内水泥池越冬,整个实验历时210 d.实验期间,分别在标志后15、30、45、60、90、210 d对金乌贼进行随机取样,解剖出内壳观察标志色保留状况并对金乌贼生长发育及存活率进行测量.结果显示,标志金乌贼的成活率为100%;方差分析显示,标志组和对照组金乌贼的生长发育差异不显著(P0.05);210 d后内壳骨针部仍清晰保留初染时的半椭圆形淡紫色圆圈;实验所采用的ALC内壳标志方法操作容易,可一次性大量进行标志处理,鉴别简单,无需借助其它仪器,肉眼便可直接观察到标志色,并且标志色保持率高,保留时间长,是一种理想的标志金乌贼的方法.     

金乌贼的早期生长发育特征

收集金乌贼(Sepia esculenta)受精卵, 对孵化后1~56日龄金乌贼幼体的胴背长、胴宽、体质量、骨板壳长、壳宽及骨板层数进行了测量, 分析了金乌贼幼体早期发育特征和功能器官的异速生长特征。结果表明, 金乌贼幼体早期发育过程中, 胴背长、体质量和骨板层数分别与日龄呈指数关系, 但由于器官发育的逐步完善和饵料生物种类的转变, 早期发育过程可分为两个不同阶段。两个发育阶段骨板层数的增长率均显著小于1(P<0.05), 因此骨板层数不能成为判定其日龄的指标。胴体和骨板的生长均出现异速生长的特点, 表明金乌贼有关运动的重要器官具有优先发育的特征。研究结果验证了在头足类早期发育过程中功能器官亦存在异速生长的假设, 并为金乌贼种苗的人工培育提供了参考依据。

     

金乌贼新型产卵附着基的实验研究

2015年6—7月和2016年6—7月在青岛金沙滩水产有限公司室内产卵池中开展了不同材料、不同颜色、不同水深金乌贼(Sepia esculenta)产卵附着基附卵效果对比实验,以及柽柳附卵器对附卵效果的影响实验。实验用产卵附着基为0.33 m×0.33 m×0.33 m的十字形可折叠钢丝框架,上覆黑白2种聚乙烯网衣材料;每个产卵池中金乌贼亲体数量约35只,雌雄比约为1∶1,胴长(139.2±1.1)mm,体重(435.9±8.5)g。同时选用等比例放大的1.0 m×1.0 m×1.0 m钢筋框架与不同颜色网衣制作的十字形可折叠附着基,于2015年6—7月在青岛斋堂岛附近海域(35?36?6?N,119?54?8?E)和杨家洼湾前附近海域(35?36'6?N,119?50'50?E),以及2016年6—7月在青岛薛家岛近海(35?57?24?N,120?16?22?E)和杨家洼湾前附近海域(35?35?45?N,119?50?38?E)开展了海区附卵验证实验。结果表明:室内同一水体环境中柽柳附卵效果最佳,其次是十字形附着基,海参框附卵效果最差;白色十字形附着基的附卵效果显著优于黑色(P0.05);柽柳附卵器对附卵效果有积极影响,加装柽柳附卵器的十字形附着基附卵效果明显提高;产卵池底层摆放的十字形附着基的附卵效果显著优于表层悬挂的十字形附着基(P0.01)。海区附卵验证结果表明:2015年和2016年海区投放的十字形附着基附卵效果良好,最高附卵率分别为82.14%和56.72%;海区投放的黑色和白色十字形附着基的附卵效果差异不显著(P0.05);海底悬挂的十字形附着基的附卵效果显著优于近底层悬挂的十字形附着基(P0.05)。综合分析认为,在金乌贼产卵繁殖季节,选择其重要产卵场和主要增殖放流海区水深15~20 m的缓流区,底层设置十字形可折叠产卵附着基,可有效进行资源增殖与产卵场修复。     

金乌贼成体副缠卵腺的超显微结构

采用组织学和电镜技术对金乌贼(Sepia esculenta)成体副缠卵腺的结构进行了研究。结果显示,(1)解剖结构显示,副缠卵腺呈耳状,下端呈‘M’型与缠卵腺紧密连接,颜色为白色并夹杂着橙黄色;(2)显微结构显示,副缠卵腺由腺壁、腺体小管和结缔组织构成,腺壁由外向内依次为外膜层和肌肉层,其中,外膜层由单层柱状上皮细胞组成;腺体小管数量较多,平均直径为70μm,内腔表面可见微绒毛层,管腔内含有大量的分泌物质;结缔组织具有集中分布的血管和肌肉纤维;(3)超微结构显示,上皮细胞细胞质中含有数量较多且分布集中的囊泡,部分囊泡中含有分泌球状体;微绒毛分布面积较广且排列密集,而纤毛一部分集中分布,另一部分呈单行排列,着生不连续;腺体小管管腔内具有大量的共生菌,绝大部分为球菌,且在管腔中具有较多的分泌球状体。研究表明,金乌贼副缠卵腺是一种起分泌作用的腺体,存在的共生菌据认为在胚胎发育阶段的病害防治方面具有一定作用。     

基于全长转录组测序的金乌贼微卫星位点筛选与特征分析

以金乌贼(Sepia esculenta)转录组测序获得的177,951条Unigene为对象,采用Micro Satellite (MISA)软件检测及分析其中的简单重复序列(Simple sequence repeat, SSR)的位点信息。结果显示,在金乌贼转录组中共检测出161,327个SSR位点,分布在64,933条Unigene中,SSR位点发生频率为36.49%,出现频率为90.66%。其中,最主要的重复类型为单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸,分别占SSR总数的46.00%、39.93%和9.48%。SSR包含的重复基元中,A/T是单核苷酸的优势重复基元,AT/AT和AC/GT是二核苷酸的优势重复基元类型。66,004个重复基元长度≥20 bp,占SSR总数的40.91%,且其中含有低级重复基元(二、三核苷酸重复)的SSR位点数量占优。以上结果表明,金乌贼转录组中SSR位点出现频率较高且类型丰富、多态性潜能较高,研究结果可为更好地开发金乌贼SSR分子标记、种质资源保护利用、遗传多样性评价和分子标记辅助育种等提供参考。     

金乌贼(Sepia esculenta)早期发育阶段相关酶活性的变化

采用生化方法测定了金乌贼(Sepia esculenta)不同发育阶段的受精卵以及0-10日龄幼体的胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性磷酸酶、脂肪酶和谷丙转氨酶5种酶比活力的变化.结果显示,可溶性蛋白浓度总体呈先上升后下降再上升的变化趋势,其中,在囊胚和原肠期(Ⅱ)最高,在初孵幼体(Ⅶ)中最低,含量分别为81.50 mg/g和4.24 mg/g.胰蛋白酶、胃蛋白酶和谷丙转氨酶比活力的变化趋势相近,总体呈先上升后下降再上升的变化趋势,其中,在胚胎发育阶段均能检测出这3种酶的活性,说明主要自母体获得,但活力相对较低;在初孵幼体中,这3种酶活性均显著升高,比活力分别为0.51 U/g、1.68 U/mg和37.84 U/g;5日龄幼体(Ⅷ)中,3种酶比活力均显著下降至出膜前水平;10日龄幼体(Ⅸ)中,3种酶比活力均有小幅度上升.碱性磷酸酶和脂肪酶比活力的变化趋势相近,总体呈上升趋势,其中,在胚胎发育阶段仅检测到这2种酶的极低活性,幼体孵出后2种酶的比活力才显著上升,标志着器官发育的逐步完善和消化能力的逐步增强.     

金乌贼(Sepia esculenta)早期发育阶段内壳形态学指标的主成分分析

为揭示金乌贼(Sepia esculenta)早期发育阶段内壳生长发育规律和形态学特征,本研究采集其红珠与黑珠期、心跳期、出膜期、初孵化幼体、5日龄、10日龄6个时期的金乌贼,分别测量其胴腹长(DML)、胴宽(MB)、体重(BW)、壳长(CL)、壳宽(CB),壳重(CW)、生长纹数(LN)7项指标,进行内壳形态学的主成分分析.结果显示,红珠与黑珠期、出膜期和10日龄时期各生长指标间均呈显著性正相关,心跳期、初孵化幼体期和5日龄时期部分生长指标间相关性不显著.主成分分析显示,红珠与黑珠期、心跳期的第1主成分为质量因子(体重和壳重),出膜期、初孵化幼体、5日龄、10日龄等4个时期的第1主成分为长度因子(胴腹长和壳长),这表明金乌贼不同时期内壳形态学各性状的生长速率存在一定差异,出膜前(红珠与黑珠期和心跳期)质量因子的增长优于长度因子的增长,而出膜后(出膜期至10日龄时期)长度因子的增长优于质量因子的增长.     

低盐胁迫下金乌贼转录组学分析

为探讨低盐胁迫对金乌贼影响的分子机制,通过转录组测序技术,测定了正常盐度(30)培养和低盐胁迫(15)6 h的孵出30 d、体质量(1.3±0.3)g金乌贼幼体的转录组数据。测序共获得87326026条序列,经过质量剪切和从头拼接得到575171条转录本和513053条Unigenes。分别在NR、Swiss-Prot、KEGG、String和Pfam数据库对Unigenes进行功能注释,共获得62485条注释结果。Unigenes包含数目较多的KEGG通路有嘌呤、嘧啶和碳代谢,PI3K-AKT、cAMP和Rap1信号通路,内吞作用,RNA转运,局灶性黏附,赖氨酸降解和泛素介导的蛋白水解等。低盐胁迫产生1923条差异表达基因,GO功能富集分析显示,一些可能与低盐胁迫相关的生物学过程如α-氨基酸、羧酸、氧乙酸、有机酸和RNA等代谢过程得到了显著富集。GO可视化分析发现,低盐胁迫对金属离子、阴离子及核苷酸结合,α-氨基酸代谢和水解酶活性等过程影响显著。KEGG通路富集分析显示,低盐胁迫6 h后差异表达基因主要富集到雌激素和心肌细胞肾上腺素信号通路,类固醇生物合成,抗原加工与表达,脂肪和蛋白质消化与吸收,甘油脂质、花生四烯酸和酪氨酸代谢等信号通路上。本研究中获得的通路及基因信息可为今后开展金乌贼低盐胁迫生理机制的探讨、分子标记的挖掘和关键基因的克隆等提供技术支撑。