草鱼出血病细胞培养灭活疫苗及病毒株冷冻干燥保存法的研究

草鱼出血病是我国淡水渔业中危害严重的疾病之一，已研究出疫苗免疫防治的有效方法，而且疫苗制备已进入工厂化规模生产。但是以往的生产工艺中病毒株采用低温冷冻或磷酸甘油缓冲液4℃保存法，疫苗成品为水剂，这样病毒株的毒力稳定性较差，疫苗保存期较短，而且不能长途运输。为了保证疫苗质量和便于运输、使用，参考人、畜用疫苗制备方法，很有必要建立疫苗、病毒株冷冻干燥保存浩。本文就草鱼出血病细胞疫苗和病毒株冷冻干燥的方法进行研究，结果报告如下。1材料和方法1.1材料及主要设备草鱼出血病细胞培养灭活疫苗：按“草鱼出血病灭活…     

应用疫苗浸泡草鱼受精卵的免疫效果

应用疫苗浸泡草鱼受精卵的方法，防治草鱼种出血病效果明显，保护率达７８％     

草鱼注射疫苗防病技术

如何有效地防治“草鱼三病”和“出血病”,历来是草鱼养殖上的一大难题。近年来,福建省古田县推广注射疫苗的办法取得了很好的预防效果。草鱼种注射疫苗后其免疫保护力可达14个月以上,在整个养殖期间一般不发病,成活率可达95％以上。现就草鱼种注射疫苗具体技术介绍如下。     

草鱼多联佐剂疫苗的研究

本研究应用ANAE染色法检测了免疫草鱼外周血淋巴细胞，阳性率结果表明：草鱼在免疫后的第一天淋巴细胞的阳性率明显升高，至第180天时仍远远超过正常草鱼的阳性率；细胞免疫在草鱼的免疫中具有重要作用，从而揭示了多联佐剂疫苗之所以具有显著抗病力的免疫机制。这一结果为国内首次报道。     

不同疫苗对草鱼夏花免疫效果对比试验研究

草鱼养殖期间易暴发出血、烂鳃、肠炎和赤皮等疾病,以草鱼免疫防疫为切入点,在南昌神龙渔业开发有限公司进行试验研究,探讨不同疫苗(分别来自南海水产研究所、汕头某公司、珠江水产研究所)对草鱼的免疫效果。结果表明:南海水产研究所和珠江水产研究所疫苗免疫效果要好于汕头某公司疫苗免疫效果,成活率分别为80%、80%、65%,而空白对照组成活率仅为50%;注射疫苗可以提高草鱼免疫保护力,不同地区的疫苗在制备时所使用的菌株存在差异。需结合本地区草鱼发病情况,开发适合本地区草鱼致病菌株的疫苗。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的研究——疫苗的最小免疫量，免疫期和保存期

草鱼是我国传统的优质养殖鱼类。它肉质鲜嫩，群众喜食，养殖面积广。但其鱼种阶段易患出血病，致使成活率低。草鱼出血病是病毒性疾病，免疫预防是目前最有效的防治方法。有关细胞培养弱毒疫苗的制备技术，安全性和免疫原性均已有报道。在此基础上我们对弱毒疫苗的最小免疫量，     

草鱼免疫注射十注意

为有效预防草鱼“四病”，即烂鳃、赤皮、肠炎、出血病，尤其是防止草鱼出血病的发生和蔓延，提高冬片及成鱼成活率，确保免疫效果，在实施草鱼免疫注射过程中，必须注意以下 10个问题。 1注意疫苗保管 注射用的草鱼多联疫苗，应保存在 2～ 8℃的冰箱中，尽量使其不冻结，否则会影响免疫效果。使用疫苗其保存期应是不超过一年的没有霉变的疫苗，要随配随用，当日稀释当日用完。 2注意疫苗稀释 稀释疫苗的用水，必须是灭菌的生理盐水，若使用 5％葡萄糖注射液来稀释更好，在稀释过程中应在无菌条件下操作。经稀释的疫苗，按 1毫升加青霉素、…     

草鱼对CFRV疫苗免疫应答的研究

本文研究了草鱼对ＣＦＲＶ疫苗的免疫应答水平，规律性，免疫效应期及免疫持久性。用该疫苗免疫后的草鱼能产生很强的应答反应，免疫保护力可达８０％以上，血清中和抗体效价非常明显地高于对照组。它的免疫效应期在５天以内，第１０天血清中和抗体达到较高水平，第２０天处于峰值，并可维持２０余天，以后在第１０天的水平上波动。草鱼对ＣＦＲＶ疫苗的免疫持久性在１３个月以上。     

草鱼出血病基因疫苗的免疫效果

为探讨含有草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP6基因的重组基因疫苗对草鱼出血病的免疫效果，将重组基因疫苗分别配制为10、30和60μg三个梯度，同时设30μg pFastBacTMDual空载体组，均以等体积的氢氧化铝佐剂为免疫增强剂，对草鱼进行注射，以未经处理的草鱼作为对照组。定期采血测定抗体效价，最后对各组草鱼进行攻毒试验并计算死亡率和免疫保护力。结果显示：注射疫苗的三组草鱼均产生抗体，10μg组效价为1：6～1：11；30μg组为1：9-1：13；60μg组为1：11-1：17，且各组效价均在第28天测定最高，免疫保护率依次为100％、100％和95％，而空载体组和对照组为70％和0％。研究表明，疫苗能够诱导草鱼产生免疫反应，为草鱼出血病核酸疫苗的生产应用和产业化提供了重要的理论依据。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究：生产性免疫试验

用草鱼出血病细胞培养灭活疫苗(CFRV疫苗)在较大的范围内对草鱼进行免疫试验,通过五种不同的草鱼放养方式以及二种疫苗给予途径的比较观察,证实CFRV疫苗在生产上有广泛的应用性。试验结果表明,一龄草鱼种使用CFRV疫苗后成活率比对照纽提高25.5±15.8(10)%,二龄草鱼种的成活率提高31.2±8.1(7)%,草鱼成鱼的成活率提高26.7±5.4(3)%。本文还对目前CFRV疫苗制作的成本和使用疫苗后带来成活率提高的经济效益作了分析,指出在生产上推广应用是可行的。     

给草鱼注射疫苗应注意的问题

当前正是草鱼疫苗注射免疫的季节,为了能有效地预防草鱼“四病”(即烂鳃病、赤皮病、肠炎、出血病)和防止草鱼细菌性暴发病的发生和蔓延,提高养殖成活率,确保免疫效果,养殖户在进行草鱼疫苗注射的过程中必须掌握如下技术要点。     

给草鱼注射疫苗应注意的问题

当前正是草鱼疫苗注射免疫的季节,为了能有效地预防草鱼“四病”(即烂鳃病、赤皮病、肠炎、出血病)和防止草鱼细菌性暴发病的发生和蔓延,提高养殖成活率,确保免疫效果,养殖户在进行草鱼疫苗注射的过程中必须掌握如下技术要点:疫苗的保存及疫苗的稀释方法注射用的草鱼多联疫苗,应保存在温度为2～8℃的冰箱中,尽量使其不冻结,否则会影响其免疫效果。使用疫苗的保存期应不超过1年,且要求没有霉变,要随配随用,当日稀释当日用。疫苗稀释的比例按使用说明书。稀释疫苗所用的水,必须是灭菌的生理盐水,若用5%葡萄糖注射液稀释效果更好,稀释过程应在…     

草鱼呼肠孤病毒减毒的研究

草鱼呼肠孤病毒GCHV－892野毒株在PSF细胞中连续传代时，于培养液中加入一定浓度的桉液，传至19代已达减毒目的。继代至29代，其减毒效果保持稳定；传至27代后不再加入桉液，传代至37代，其减毒效果仍保持稳定不变。致弱病毒对草鱼的安全性好，免疫原性强。用该弱毒株制备的弱毒疫苗免疫草鱼后，草鱼的成活率和免疫保护率均达100％。因而作者认为桉液是草鱼呼肠孤病毒的一种良好减毒剂。经桉液减毒的GCHAV－892是一株可应用于生产上制备弱毒疫苗的良好弱毒株。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的最小免疫量、免疫期和保存期

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫量为稀释10∧3倍，0.2毫升/尾，免疫产生期为疫苗注射后的第2天；免疫保护期达15个月。弱毒疫苗的保存期为-30℃30个月、-10℃24个月，4℃8个月，15-20℃1个月左右。     

多联佐剂疫苗免疫机制的探讨

应用ANAE染色法检测了免疫草鱼外周血淋巴细胞，阳性率结果表明：草鱼在免疫后的第一天淋巴细胞的阳性率明显升高，至第180天时仍远远超过正常草鱼的阳性率。细胞免疫在草鱼的免疫中具有重要作用。从而揭示了多联佐剂疫苗之所以具有显著抗病力的免疫机制。这一结果为国内首次报道。     

草鱼夏花疫苗注射技术

福建省将乐县水产技术部门在水产养殖病害防治中，树立病害防控理念，坚持“以防为主、防治结合”的原则，根据养殖户以往每年7～8月份培育的水产鱼种常常暴发草鱼病毒性出血病，且并发草鱼烂鳃、肠炎、赤皮三病等发病死亡率高的实际情况。技术人员积极探索鱼病防治新办法，改原在冬春季节对草鱼种注射疫苗为对夏花草鱼种注射疫苗的办法，     

草鱼出血病的免疫学研究进展

由于草鱼病毒性出血病发病率高,且尚未找到有效防治的药物,至今一直成为草鱼养殖发展中"瓶颈"问题的根本原因。因此,采取免疫学途径防治草鱼出血病是解决此问题的关键之所在。综述了采用草鱼出血病疫苗、干扰素及免疫增强剂进行草鱼出血病防治的研究现状;提出口服型免疫增强剂是生产上防治草鱼出血病最为有效的途径之一。     

特异化饵料免疫预防草鱼出血病的生产性试验

草鱼出血病是一种病毒性鱼病，它严重影响着草鱼的成活率，尤其是对一龄草鱼种的危害。目前比较有效的防治方法是将出血病疫苗注射到鱼体使其获得后天的免疫保护力，但这种注射法需要一尾一尾地进行，费工费时还易损伤鱼体，对当年草鱼和大规模的鱼种生产难以应用。因此，研究更简便、有效的免疫途径是预防草鱼出血病迫切需要解决的课题。我们于１９９６～１９９８年用草鱼出血病细胞疫苗处理的特异化饵料，在草鱼苗开口期投喂，完成疫苗接种。经室内攻毒测定，对草鱼出血病的免疫保护力可达９０％以上，免疫后的草鱼血清抗体凝集价显著高于…     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗旋转瓶法大规模生产工艺↑（*）

Ｃａｒｅｌ氏瓶静置培养草鱼ＣＩＫ细胞，细胞２～３ｄ内长成单层，细胞单层均匀而稳定；旋转瓶培养，细胞７ｄ左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。２种方式所培养病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。０．１％福尔马林４℃条件下灭活病毒材料１７ｄ制备疫苗，疫苗性能稳定，安全性好。疫苗效力检验结果表明，注射免疫１０ｄ和浸泡免疫１０ｄ后，免疫鱼体内血清中和抗体效价分别为１０７．９±１１．０（３）和６８．５±９．９（３），免疫保护力分别为（７７．１±８．９）％（３）和（７３．９±８．３）％（３），与对照组相比差异显著。本研究建立了草鱼细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺流程，进行了较大规模的疫苗生产和生产性免疫试验，免疫草鱼成活率平均达到８５％以上。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的最小免疫量、免疫期和保存期

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫最为稀释１０＾３倍、０．２ｍｌ／尾。免疫产生期为疫苗注射后的第２天；免疫保护期达１５个月。