黄颡鱼脑P-450芳香化酶基因的克隆和组织表达

P-450芳香化酶（P450arom）是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本文采用RT-PCR和RACE法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑P450芳香酶基因HP450aromB,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了研究。结果表明HP450aromB cDNA全长2080bp（不包括poly（A））,5′端非翻译区有25bp,3′端555bp（不包含poly（A））,阅读框（open reading frame,ORF）1500bp,编码500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56kDa。同源性分析显示,HP450aromB的氨基酸序列与其它鱼脑P450arom具有70％以上的同源性,与其它鱼卵巢P450arom为60％左右同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom则为50％左右同源;但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区,芳香化酶特异保守区Ⅱ及血红系结合区Ⅲ和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83％～96％,78％～86％和85％～100％。系统发育分析表明HP450aromB与鱼类脑P450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致。实时定量RT-PCR研究显示,HP460arom B在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部HP450aromB的表达总量没显著差异。     

黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco AMH基因的克隆鉴定及表达

为研究抗缪勒氏管激素AMH对黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco性别分化及生长发育的调控作用,克隆扩增了黄颡鱼AMH基因的全长序列(GenBank检索号MK310106),研究该基因的组织表达模式。结果表明:AMH基因的全长为3588bp,其开放阅读序列为1653bp,编码550个氨基酸,位于第2号染色体上(19371164~19374761bp)。同源性分析表明,与已发布的黄颡鱼Tachysurus fulvidraco的相似性最高,可达99.6%;与低眼无齿[鱼芒]Pangasianodon hypophthalmus及斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus的相似性也很高,分别达75.8%与74.8%,而与哺乳动物相似性较低。系统进化树分析显示:黄颡鱼AMH可与斑点叉尾鮰、低眼无齿[鱼芒]等鲶形目物种聚集成簇。Real-TimePCR检测结果表明:AMH的mRNA在各组织中的表达量差异性极大,在性腺组织中表达量最高,其次是肝脏和脑;1龄精巢的表达量最高,2龄次之,而1、2龄雌鱼的表达量基本相近。AMH对黄颡鱼性腺的分化及生长发育有重要调控作用。     

雄性黄颡鱼芳香化酶基因mRNA在熟期组织中表达分析

在水温分别为20(常温对照组)、25、30℃条件下,采用RT-PCR方法,研究性腺成熟期雄性黄颡鱼组织中P450芳香化酶(P450aromA和P450aromB)的mRNA表达水平,同时测定性腺成熟系数(GSI)、肝重指数(HSI)、肥满度(CF)和血浆睾酮(T),雌二醇(E2)含量.结果表明,P450aromA在性腺...     

雄性黄颡鱼芳香化酶基因mRNA在性成熟期组织中表达分析

在水温分别为20(常温对照组)、25、30℃条件下,采用RT-PCR方法,研究性腺成熟期雄性黄颡鱼组织中P450芳香化酶(P450aromA和P450aromB)的mRNA表达水平,同时测定性腺成熟系数(GSI)、肝重指数(HSI)、肥满度(CF)和血浆睾酮(T),雌二醇(E2)含量。结果表明,P450aromA在性腺发育成熟期雄性黄颡鱼心脏、肝、脾、胃、肾脏、精巢、鳃、脑、头肾、肠管组织中均无表达,P450aromB只在脑和肠中有表达,在脑中表达量高于肠,表达量随着水温升高而显著下降;各组实验鱼血浆T和E2含量与芳香化酶基因表达量存在相关关系。该实验结果表明,P450aromA可能与精子发生相关,可能不参与黄颡鱼精子排放过程;P450aromB在雄鱼脑中高度表达,可能参与性腺成熟期精子活力保持与排放过程,且应激温度越高,对性腺成熟期精子活力保持与排放过程影响越大。     

黄鳝β－肌动蛋白基因的克隆及序列分析

采用RT—PCR和RACE法，从黄鳝(Monopterus albus Zuieuw)肝脏中分离和克隆黄鳝β-肌动蛋白(actin)基因。该基因cDNA全长l765bp[不包括poly(A)]，5’端非翻译区12bp，3’端非翻译区有625bp[不包含poly(A)]，阅读框(Open reading frame，ORF)1128bp，翻译成375个氨基酸，蛋白质分子量41．77kD。将所得序列与各科鱼、蛙、鸡、牛、鼠、人等的β-肌动蛋白基因序列同源性分析显示，核苷酸序列具有68％～95％的相似性，氨基酸序列具有97％～100％相似性，显示该基因在生物进化过程中的保守；系统发育分析表明黄鳝β-肌动蛋白基因与罗非鱼的亲缘关系最近。     

黄颡鱼LRH-1基因的分离和表达

肝受体类似物(Liver receptor homolog-1,LRH-1)是核受体家族Ftz-F1中一个亚家族成员,由于其在哺乳类卵巢中的高表达而被认为在卵巢类固醇合成的调控中起着一定的作用.本研究使用RT-PCR、RACE法分离到了黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肝受体类似物基因(LRH-1)以及一个无活性的LRH-1' cDNA.LRH-1 cDNA全长1 945 bp,包括γ'非翻译区207bp,3'非翻译区238 bp,开放阅读框1 500 bp,编码500个氨基酸,推算的蛋白分子量为57.19 kD.LRH-1'全长1 663 bp,5'非翻译区283 bp,3'非翻译区330 bp,开放阅读框1 050 bp,编码350个氨基酸,推算的蛋白分子量为39.7 kD.与LRH-1相比,LRH-1'缺少存在于基因5'端的锌指结构和3'端起转录激活作用的AF-2基序.不同动物LRH-1氨基酸序列比对结果表明,黄颡鱼LRH-1和其他动物的LRH-1相似性为79%～85%,和其他动物的类固醇生成因子(SF-1)相似性为59%～66%.系统发育树显示,Ftz-F1分为两大支,一支包括鱼类SF-1;另一支又有2个分支,分别包含其他动物的SF-1和所有动物的LRH-1,在LRH-1分支中鱼类LRH-1单独为一小支.以β-actin为内标的荧光实时定量.RT-PCR结果显示,LRH-1在雌、雄黄颡鱼脑、肝、肾、性腺均有表达,以肝脏的表达量为最高,雌鱼各组织的表达量均比雄鱼高,其中肝脏和性腺差异明显(P＜0.05);在卵巢的不同发育阶段,该基因的表达量也不尽相同,Ⅲ期卵巢表达量最高,明显高于Ⅴ期(P＜0.05),Ⅴ期又明显高于Ⅱ、Ⅳ和Ⅵ期(P＜0.05);注射催产素促黄体释放激素类似物(LRH-A)12 h后,LRH-1在脑的表达量没明显变化,在肝脏和肾脏的表达量明显增加,而在卵巢的表达量明显下降.     

杂交黄颡鱼、雄性瓦氏黄颡鱼和黄颡鱼的形体指数及肌肉营养组成比较分析

为评估商品规格杂交黄颡鱼的食用营养价值,对杂交黄颡鱼[Pelteobagrus fuividraco(♀)×P.vachelli(♂)]、雄性瓦氏黄颡鱼和黄颡鱼商品鱼的形体指数、出肉率和肌肉的营养组成、氨基酸含量及脂肪酸组成进行了比较分析。结果表明,杂交黄颡鱼的肥满度与雄性黄颡鱼无显著差异;杂交黄颡鱼的胴体率、含肉率和脏体比均与雄性瓦氏黄颡鱼及雄性黄颡鱼无显著差异(P0.05)。杂交黄颡鱼肌肉水分含量最高,脂肪含量最低,而蛋白质和灰分含量与雌、雄黄颡鱼均无显著差异;雄性瓦氏黄颡鱼肌肉中水分、蛋白质和灰分的含量较低,脂肪含量最高;杂交黄颡鱼肌肉的氨基酸总量和7种人体必需氨基酸与黄颡鱼无显著差异(P0.05),但均显著高于雄性瓦氏黄颡鱼(P0.05);杂交黄颡鱼肌肉脂肪中C22:6n3的比例和n3系列不饱和脂肪酸总量的比例与雌性黄颡鱼无显著差异(P0.05),但均高于雄性瓦氏黄颡鱼,均低于雄性黄颡鱼。试验表明,杂交黄颡鱼的体形和出肉率与雄性黄颡鱼一致,其肌肉为低脂蛋白食品,营养价值与黄颡鱼接近。     

瓦氏黄颡鱼生长激素基因克隆及其组织特异性表达分析

生长激素(growth hormone,GH)对脊椎动物的生长发育及代谢具有重要作用。采用RT-PCR和RACE技术,克隆了瓦氏黄颡鱼垂体GH cDNA全长序列,应用real-time qPCR法对不同组织中GH mRNA的表达进行检测。序列分析表明,GH cDNA(GenBank登录号:GU395549)序列全长1 203 bp,其5’端非编码区77 bp、3’端非编码区523 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)603 bp,由此推导GH前体蛋白由200个氨基酸组成。同源性比较结果表明,瓦氏黄颡鱼与同目鱼类的GH编码序列同源性较高,与哺乳类和鸟类的同源性较低。Real-time qPCR结果显示,GH mRNA在垂体中的表达量最高,其次是脑、肌肉、肝脏、脂肪组织、胃、脾脏、卵巢或精巢,而在肾脏、心脏、鳃和肠中没有明显的表达。实验结果表明,GH基因在瓦氏黄颡鱼组织中广泛表达,提示GH可能以旁分泌或自分泌的方式对其生长和繁殖发挥重要作用。     

黄颡鱼生长激素cDNA序列克隆及其序列分析

采用RT-PCR方法,首次从黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)脑垂体总RNA中克隆出生长激素(growth hormone,GH)cDNA的开放阅读框ORF(open reading frame)序列,长603nt,推导的GH前体由200个氨基酸组成。以生长激素氨基酸序列为分子标记,比较了包括黄颡鱼在内的鲇形目6科9种鱼类的生长激素氨基酸序列同源性,并用PHYLIP软件构建了鲇形目6科9种鱼类的系统发育树,可识别3个大的单系类群,即类群Ⅰ:鲇科Siluridae;类群Ⅱ:芒鲇科Pangasiidae (鱼尝科Bagridae 异囊鲇科Heteropneustidae);类群Ⅲ:鱼回科Ictaluridae 胡子鲇科Clariidae。     

黄颡鱼FZD家族4个基因的克隆、组织表达及对铜的响应

实验采用RT-PCR和RACE克隆fzd2、fzd3a、fzd4和fzd10基因,其c DNA全长分别为2 176、3 243、2 509和3 021 bp,其中ORF长度分别为1 652、2 084、1 649和2 161 bp,编码551、695、550和586个氨基酸。氨基酸序列比对和系统树分析显示,4种基因十分保守,黄颡鱼与斑点叉尾鲖亲缘关系最近。组织表达分析显示,4种基因的m RNA在脑、脾脏、肾脏、鳃、心脏、肌肉、脂肪、肝脏及卵巢等组织中都有表达,而其表达量不尽相同。FZD家族基因对铜的响应研究表明,在暴露28 d时,fzd3a m RNA水平随着铜浓度的增加而增加,但是fzd2、fzd4和fzd10基因表达各个处理组无显著性差异;在56 d,fzd2m RNA水平在30μg Cu/L组最高,其他2个组差异不显著,fzd3a、fzd4和fzd10的基因表达在3个铜暴露组中均无显著差异,表明fzd家族这些基因的功能发生了分化,部分成员介导了铜影响黄颡鱼卵巢发育的调控。     

黄颡鱼肌细胞生成素基因cDNA克隆及其在雌雄个体中的差异表达

为了探究黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因的组成结构、功能特性以及在雌雄个体组织中的表达差异,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得黄颡鱼MyoG基因1346 bp全长cDNA序列,其中序列包括63 bp的5′非翻译区、521 bp的3′非翻译区和762 bp的开放阅读框(ORF),ORF编码253个氨基酸。氨基酸序列包含MRFs基因家族的Basic结构域和螺旋–环–螺旋(HLH)结构域,不含信号肽,没有跨膜结构,定位于细胞核内。氨基酸序列与蓝鲇(Ictalurus furcatus)同源性高达94.1%,基于氨基酸序列构建的NJ进化树显示黄颡鱼MyoG基因与同属鲇科鱼类关系最近,表明MyoG基因在物种间比较保守。实时荧光定量PCR检测显示,MyoG基因在雌雄个体心脏、肌肉等8种组织中均有表达,但在肌肉中的表达量显著高于其他组织(P0.05),且在雄性中的表达量显著高于雌性(P0.05);Western blot检测MyoG蛋白在雄性肌肉中的表达量高于雌性,推测其可能是造成黄颡鱼雌雄生长差异的因素之一。本研究不仅为黄颡鱼雌雄生长差异和肌肉发育调控提供了研究基础,也为黄颡鱼快速生长新品种(系)选育提供理论参考。     

Dietary copper requirement of juvenile yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco

The present experiment was conducted to quantify dietary copper (Cu) requirement for juvenile yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco. The six experimental diets were formulated to contain the graded levels of CuSO₄·5H₂O (0, 0.005, 0.01, 0.02, 0.04 and 0.08 g kg^?1 diet respectively) providing the actual dietary copper values of 2.14 (control), 3.24, 4.57, 7.06, 12.22 and 22.25 mg Cu kg^?1 diet respectively. Each diet was fed to triplicate groups of yellow catfish (initial body weight: 3.13 ± 0.09 g, means ± SD) in an indoor static rearing system for 7 weeks. Fish fed the diet containing 3.24 mg Cu kg^?1 diet had the highest weight gain and specific growth rate, but they were not significantly different from that of fish fed the 4.57 and 7.06 mg Cu kg^?1 diets (P > 0.05). The poorest feed conversion rate, the lowest protein efficiency ratio, the lowest hepatosomatic index and viscerosomatic index were observed in fish fed the diet containing the highest Cu content diet (P < 0.05). Condition factor showed no significant differences among the treatments (P > 0.05). Proximate composition of fish body was significantly affected by dietary copper level (P < 0.05). Cu contents of whole body and liver increased with dietary Cu levels (P < 0.05), but muscle Cu content remained relatively stable (P > 0.05). Analysis by the second‐order regression of SGR and linear regression of whole‐body Cu retention of the fish indicated that dietary Cu requirements in juvenile yellow catfish were 3.13–4.24 mg Cu kg^?1 diet.     

拟态弧菌感染黄颡鱼的动态病理损伤及病原分布研究

以1.0×106CFU·m L~(-1)拟态弧菌(Vibrio mimicus)浸浴感染黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco),于第0、第4、第8、第16、第24、第36、第48、第60、第72小时剖杀取样,研究病理损伤及病原菌的体内动态分布。结果显示,皮肤肌肉、鳃、肠道出现病变最早,其中皮肤肌肉损伤最严重。第16小时表皮变性、坏死,鳃上皮肿胀,肠绒毛水肿;第24~第48小时表皮坏死、脱落,真皮严重出血,肌纤维变性、坏死,鳃出血,上皮局部坏死,肠上皮变性与灶性坏死;第48~第72小时皮肤肌肉坏死更严重,形成溃疡灶,鳃灶性坏死。肾、肝、脾与心36 h后相继出现不同程度的淤血、出血,变性和灶性坏死。q PCR检测发现,第4小时即在鳃、肠、皮肤肌肉检出病菌,细菌含量分别为1.3×102CFU·mg~(-1)、2.6×102CFU·mg~(-1)、4.7×102CFU·mg~(-1);鳃与皮肤肌肉中菌量随时间延长而增加,第72小时皮肤肌肉中菌量达到4.5×107CFU·mg~(-1);第24小时后相继在肾、肝、脾、心检出病菌,菌量介于1.9×10~4.7×102CFU·mg~(-1)之间。结果表明皮肤、鳃和肠道是病菌的入侵位点,并在体内多组织、器官分布。     

不同脂肪酸含量及比例对黄颡鱼幼体组成影响的研究

在粗蛋白42%和粗脂肪8%的半精制饵料中,添加不同剂量的鱼油、玉米油、花生油和芝麻油,使20C:5n-3(EPA)+22C:6n-3(DHA)的含量(占总脂肪的%)和n-3/n-6比例分别为14.942,0.728;15.551,0.851;19.365,1.238;19.976,1.345和20.457,1.406。饲喂黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco,Richardson)幼鱼50 d,研究了不同脂肪酸含量及比例对黄颡鱼幼鱼体组成的影响。结果表明,随着饵料中EPA+DHA的含量和n-3/n-6比例的逐渐增加,鱼体肌肉中水分含量逐渐增加,粗蛋白含量逐渐降低,肌肉中的n-3脂肪酸含量和n-3/n-6比例逐渐增加,肌肉的n-6和n-9脂肪酸含量逐渐降低。     

不同投饲率对黄颡鱼幼鱼生长和存活的影响

将黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco Richardson)幼鱼(体长1.621±0.1561cm,体重0.093±0.02g)放养在12个容水50L(40cm×30cm×41.6cm)水槽中,每个水槽30尾,投喂含粗蛋白40.53%、粗脂肪13.14%的配合饲料,以搅碎的泥鳅(Misgurnus anguilli-caudatus)为黏合剂(二者的比例为4∶1),投饲率为15%(1组)、20%(2组)、25%(3组)和30%(4组),每组三个重复。60d的饲养表明,4组鱼的成活率最高(81.57%),1组最低(18.75%),2组和3组分别为54.83%和54.54%。统计分析表明,随投饲率增加,鱼的增重率不断增加,2、3、4组鱼的增重率显著高于1组(P<0.05),但这三组间差异不显著(P>0.05)。1组鱼的呼吸代谢率高于其他组是生长缓慢的原因。本实验证明,黄颡鱼夏花培育期间,投饲率以25%~20%为宜。     

Osteological development and anomalies in larval stage of hatchery‐reared yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco

Comprehensive knowledge of osteological development of fish not only provides means for understanding its functional development, but also allows early detection of skeletal anomalies. The present study was conducted to determine osteological development and occurrence of anomalies from the first to the 40th day after hatching (DAH) for yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco, a commercially important species in China. Vertebral ontogeny started with formation of anterior neural arches at 3 DAH, and completed at 6 DAH. Vertebral centra started to develop at 4 DAH and ossification in all centra was visible at 15 DAH. Caudal fin appeared at 2 DAH and ossification was visible at 26 DAH. The onset of dorsal and anal fins appeared at 4 DAH and their ossifications were visible at 20 DAH. Pectoral fins were present before first feeding and formed entirely at 9 DAH, and their ossifications were visible at 21 DAH. Pelvic fins appeared at 9 DAH, and formed completely at 21 DAH. The ossification of pelvic fins was not finished until the end of the experiment (40 DAH). 24 types of skeletal anomalies were observed. About 20% of individuals showed at least one anomaly. Haemal vertebrae anomalies occurred at the highest frequency, followed by pre‐haemal, caudal vertebrae and anal fin anomalies, and caudal fin had the lowest anomalies frequency. For the first time, our study determined osteological development and anomalies incidence in larval yellow catfish, which help further investigations into rearing conditions leading to appearance of these anomalies to prevent their incidence.     

运输对养殖黄颡鱼血液生化和肌肉物性分析指标的影响

测定了在10.4~11.2℃下运输4 h后不同时间(0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d和20 d)养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)血液生理生化指标和肌肉物性分析指标的变化。结果显示,运输引起了黄颡鱼血清皮质醇和血糖浓度的显著升高(P0.05),在运输结束12 h后恢复到正常水平。运输后鱼体血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均有显著性升高,随着恢复时间的推移逐渐回降到正常水平;但过氧化物酶(POD)活性并未出现显著性差异,维持稳定的水平。运输后肌肉硬度、弹性、胶黏性、凝聚性、咀嚼性、回复性等物性分析指标均显著性降低。除了凝聚性和咀嚼性之外,其他肌肉物性分析指标在运输结束72 h后恢复到正常水平。研究表明,长途运输造成了养殖黄颡鱼的应激反应,对肌肉物性特征产生了显著的影响,但运输后的恢复可使鱼体抗氧化能力和肌肉物性分析指标回复到正常水平。