莫荷罗非鱼“广福1号”

正莫荷罗非鱼"广福1号"(品种登记号为GS-02-002-2015)是中国水产科学研究院珠江水产研究所科研团队经多年培育而成的耐盐新品种,并于2015年通过国家水产新品种审定。该科研团队以2001年从美国引进的橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼分别经8代群体选育的后代为母本和父本,杂交获得的子一代。即为莫荷罗非鱼"广福1号"。优良特性适盐范围广,耐盐能力强。莫荷     

栉孔扇贝、虾夷扇贝及其杂交子代的MSAP分析

运用甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术对栉孔扇贝(♀)、虾夷扇贝(♂)及其杂交子一代、子二代基因组DNA胞嘧啶甲基化水平进行了研究,并分析了DNA甲基化与各性状的相关性及其与杂种优势的关系。结果表明,(1)DNA甲基化率与壳宽、总重等表型值呈正相关的关系,而与壳长、壳高、软体重和闭壳肌重4个性状表型值呈负相关的关系,其中闭壳肌重与甲基化率的相关性达到极显著水平(P<0.01);(2)虾夷扇贝、栉孔扇贝、F1代、F2代的总甲基化率分别为32.79%、24.13%、19.98%、20.18%,杂交种F1代的甲基化水平低于双亲,是两种扇贝杂交的结果;F1代的甲基化模式经过了重新调整,其变化相对其亲本主要有4种类型:甲基化水平相同、去甲基化、超甲基化、次甲基化,且去甲基化位点多于超甲基化位点。结果证实杂种优势的产生与杂交种F1代基因组DNA甲基化模式的改变和重新调整有关,丰富了杂种优势机理研究内容。     

低温对罗非鱼基因组DNA甲基化的影响

以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼耐寒品系为实验材料,采用DNA甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)分析方法从全基因组水平上探讨了低温适应对罗非鱼DNA序列中CCGG位点的甲基化水平的影响。结果显示,选用的18对选择性扩增引物共检测到849个位点。耐寒品系检测到的位点数为411个,对照组为438个,其中发生甲基化的位点数分别为72和104个,总甲基化率分别为17.52%和23.74%;全甲基化位点分别为37个和65个,全甲基化率分别为9.00%和14.84%;半甲基化位点分别为35个和39个,半甲基化率分别为8.52%和8.90%。结果分析表明,尼罗罗非鱼耐寒品系的总甲基化水平、全甲基化水平和半甲基化水平较对照组均有一定程度的下降。与对照组相比,尼罗罗非鱼耐寒品系基因组DNA甲基化总体水平下降了6.22%,其中以全甲基化位点变异为主,其下降幅度比例明显,为5.84%。由此可见,经过连续多代的低温胁迫可导致尼罗罗非鱼DNA甲基化水平发生改变,发生了去甲基化反应,表现为基因组甲基化程度降低的特征,说明了DNA甲基化与罗非鱼抗寒性反应密切相关。     

罗非鱼催乳素Ⅰ基因的组织分布及盐胁迫对其表达的影响

采用同源克隆方法从橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）、荷那龙罗非鱼（O.hornorum）及其正反交子代垂体中克隆了催乳素Ⅰ基因（PRLⅠ）,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比对分析。结果显示,4种罗非鱼的PRLⅠ基因序列长度均为798 bp,ORF长639 bp,共编码212个氨基酸;橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼仅在31号位点存在一个氨基酸残基差异。用q PCR方法分析橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼PRLⅠ基因在不同组织或器官中的表达,结果表明罗非鱼PRLⅠ基因在垂体中的表达量最高,在其他组织中的表达量较低;盐胁迫后4种罗非鱼垂体中的PRLⅠmRNA水平均显著降低,而在其他组织中的表达变化不大。由此可知PRLⅠ基因主要在垂体表达,参与罗非鱼的渗透压调节。     

云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F1的DNA甲基化分析

为探讨石斑鱼杂种优势形成过程中基因组DNA甲基化水平的变化，本研究采用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism, MSAP)技术检测云纹石斑鱼(Epinephelus moara)、鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)及云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F1 3个群体的基因组DNA甲基化水平，分析杂交F1与亲本基因组DNA甲基化水平的差异。结果显示，云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼的基因组DNA属于甲基化程度较高的类群；云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F1的DNA总甲基化率分别为60.62%、59.38%和55.78%，DNA全甲基化率分别为31.37%、30.67%和29.27%，DNA半甲基化率分别为29.25%、28.71%和26.51%；杂交F1的DNA总甲基化率、全甲基化率和半甲基化率均低于双亲，并存在极显著差异(P<0.01)，3个群体的全甲基化率均大于半甲基化率。研究表明，云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F1 DNA甲基化水平与杂种优势呈负相关，杂交F1 DNA甲基化水平的降低可能是形成快速生长等杂种优势的原因之一。     

莫荷罗非鱼幼鱼耐盐性能的初步研究

以橙色莫桑比克罗非鱼与荷那龙罗非鱼的杂交子代莫荷罗非鱼(Oreochromis mossambicus♀×O.hornurum♂)为实验材料,通过急性耐盐实验和慢性耐盐驯化实验,对其幼鱼耐盐性进行了初步研究。结果表明:莫荷罗非鱼的96 h半致死盐度为(33.74±0.94)‰;在每天将盐度提高8‰的情况下,其半致死盐度为(112.93±4.87)‰,驯化致死盐度为128‰~136‰。实验表明,莫荷罗非鱼经过驯化可以耐受更高盐度的水环境,具有在海水中养殖的潜力。     

干露胁迫对长牡蛎基因组DNA甲基化的影响

为探讨干露胁迫对海产贝类基因组DNA甲基化的影响,应用荧光标记甲基化敏感扩增多态性(fluorescencelabeled methylation sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)技术,比较了不同干露条件下(0 d、0.5 d、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d和11 d)长牡蛎(Crassostrea gigas)基因组DNA甲基化的变化。结果表明,对照组(干露处理0 d)闭壳肌与鳃组织的总体甲基化水平分别为29.76%和29.82%;干露处理0.5 d、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d和11 d的长牡蛎全基因组甲基化水平呈现先增高后降低的趋势,其中,闭壳肌组织的总体甲基化水平分别为36.59%、38.86%、43.02%、39.30%、51.13%、46.79%和35.06%,鳃组织总体甲基化水平分别为39.39%、42.13%、39.36%、43.54%、56.19%、38.57%和28.99%;干露处理7 d的长牡蛎甲基化水平明显高于其他时期(P0.05),11 d时甲基化水平基本恢复至初始状态。甲基化变异模式分析发现,闭壳肌与鳃组织DNA甲基化变异位点存在差异,甲基化升高位点变化程度较大(P0.05)。以上结果表明,长牡蛎通过改变DNA甲基化模式来应答干露胁迫,发生了不同程度的甲基化与去甲基化反应,DNA甲基化与长牡蛎的抗逆性状密切相关。     

云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F_1的DNA甲基化分析

为探讨石斑鱼杂种优势形成过程中基因组DNA甲基化水平的变化,本研究采用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitiveamplificationpolymorphism,MSAP)技术检测云纹石斑鱼(Epinephelus moara)、鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)及云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F_13个群体的基因组DNA甲基化水平,分析杂交F_1与亲本基因组DNA甲基化水平的差异。结果显示,云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼的基因组DNA属于甲基化程度较高的类群;云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及其杂交F_1的DNA总甲基化率分别为60.62%、59.38%和55.78%,DNA全甲基化率分别为31.37%、30.67%和29.27%,DNA半甲基化率分别为29.25%、28.71%和26.51%;杂交F_1的DNA总甲基化率、全甲基化率和半甲基化率均低于双亲,并存在极显著差异(P0.01),3个群体的全甲基化率均大于半甲基化率。研究表明,云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交F_1DNA甲基化水平与杂种优势呈负相关,杂交F_1 DNA甲基化水平的降低可能是形成快速生长等杂种优势的原因之一。     

野生和“黄海1号”中国明对虾不同组织基因组DNA的MSAP分析

为了从表观遗传学角度讨论中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)野生群体和人工选育新品种“黄海1号”不同组织间甲基化水平和多态性差异,应用甲基化敏感扩增多态性(mehylation sensitive amplified polymorphism, MSAP)分别对野生群体组中国明对虾和“黄海1号”肌肉、鳃、血液3种组织样品基因组DNA的CCGG甲基化水平进行对比分析,试图从表观遗传学角度探讨影响中国明对虾生长性状的分子机制.采用30对引物进行选择性扩增,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE)带型结果显示,野生群体组中国明对虾肌肉、鳃和血液的甲基化比例分别为23.1%,22.3%和19.7%;而“黄海1号”肌肉、鳃和血液的甲基化比例分别为21.4%、19.6%和18.9%.野生群体组中国明对虾和“黄海1号”同一组织间的甲基化水平和甲基化多态性水平不同,肌肉、鳃和血液不同组织间的甲基化水平和甲基化多态性水平亦不同.DNA 甲基化多态性带型分析显示,鳃组织的甲基化水平和多态性水平在野生群体组中国明对虾和“黄海1号”间变化趋势最大,肌肉最稳定.本研究旨为甲基化修饰与中国明对虾生长性状间的相关性研究提供依据.     

急性温度胁迫对虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)基因组DNA甲基化的影响

为探讨急性温度胁迫对虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)基因组 DNA 甲基化水平的影响，本研究从表观遗传学角度，运用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism，MSAP)技术比较分析了升温海水(17℃和24℃)急性胁迫虾夷扇贝(原暂养于9℃的海水中)9 h 和24 h 后基因组 DNA 甲基化的变化情况。结果显示，9对引物在各组的总扩增位点数为314–337，总甲基化位点为79–94，所占比例为23.45%–28.51%；所有处理组基因组 DNA 总甲基化率低于对照组，急性升温胁迫使虾夷扇贝基因组 DNA 发生去甲基化，而且去甲基化程度随胁迫温差增大和胁迫时间增长而增强，说明急性升温胁迫能够改变 DNA 甲基化水平和模式。本研究为进行虾夷扇贝抗逆基因的筛查提供了新思路和研究基础，丰富了表观遗传学在扇贝中的研究资料。     

橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）和荷那龙罗非鱼（O．hornorum）的选育效果评价

以橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）和荷那龙罗非鱼（O．hornorum）为基础群体，分别对其进行选育，并对产生的选育系F4代的选育效果进行了评价。经过4代的选育，橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的日增重率分别比对照系提高了27．96％和36．73％，差异显著（P〈0．05），平均每代选育效应分别为6．99％和9．18％。F4代的体重变异系数分别为23．74％和22．17％，比对照组分别降低了24．83％和36．33％。而且第一次性成熟时这2种罗非鱼的平均体重都比对照系增加2倍以上，其杂交子代的雄性率达到了99．4％。试验结果表明，橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的选育效果明显，F4代的生长性能有了显著提高，个体之间的生长速度趋于一致；也说明这2种罗非鱼F4代仍具有一定的选育潜力，对其继续进行选育是切实可行的。     

Optimum Density of Red Tilapia Oreochromis mossambicus×O. urolepis hornorum in a Pulsed-Flow Culture System

Abstract.— Densities of 9 tilapia (hybrid Oreochromis mossambicus × O. urolepis hornorum)/m³ gave the highest production among five densities (1, 3, 6, 9, and 12 fish/m³) tested in a pulsed-flow culture system. Culture of fish in irrigation ditches may have great potential for integrating fish farming with irrigated agriculture. Each 1,000 meters of ditch could potentially produce up to 1,400 kg of tilapia during a 112-d growing season.     

莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼耐盐性的初步研究

用人工配制的6个盐度咸水(0、15、25、30、35、40),对莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼耐盐性进行了初步研究。结果表明:在几种耐盐指标中,莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的96小时半致死盐度分别为22．29和21．56;在除盐度为40外的其它各盐度梯度中,莫桑比克罗非鱼的50％成活时间和平均成活时间均高于荷那龙罗非鱼,但差异不显著 (p>0．01)。在对2种罗非鱼的盐度驯化过程中,各个驯化盐度梯度下,莫桑比克罗非鱼的死亡率均小于荷那龙罗非鱼的死亡率。     

橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的染色体核型分析

采用体腔注射PHA-空气干燥法对橙色莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和荷那龙罗非鱼(O.hornorum)染色体数量、形态和核型进行了分析和比较。结果显示:两种罗非鱼的二倍体染色体数目均为2n=44,都具有1对特大的染色体,未发现中部着丝粒染色体对和异型染色体。两种罗非鱼的染色体组型形态基本相似,它们的核型公式为2n=44,6sm+24st+14t,NF=50,用常规染色体染色的方法难以区分。研究结果表明,这两种罗非鱼的常规核型差异不显著,在分类地位上非常接近。     

Sex reversal in the genus Oreochromis: optimization of feminization protocol

Abstract. High rate of feminization was achieved by oral administration of diethylstilbestrol (DES) and ethynyloestradiol (EES) to gonadally undifferentiated Oreochromis mossambicus (L.) and O. mossambicus × O. urolepis hornorum Trewavas all-male hybrid. All-female groups were produced at doses > 10mg/kg DES and >50mg/kg EES, when fry immediately after yolk-sac absorption were fed hormone-treated feed ad libitum. The critical period for feminization was about one week. Treatments longer than 10 days did not result in a higher proportion of females, and treatments starting later than one week after yolk-sac absorption were not effective. Optimal derived protocol was applied to O. aureus (Steindachner), resulting also in complete feminization.     

Growth studies on juvenile tilapia using pure species, hormone-treated and nine interspecific hybrids

Abstract. The comparative growth performance of the juveniles of six pure tilapia species, Oreochromis mossambicus , O. spilurus , O. macrochir , O. aureus , O. niloticus and Sarotherodon galilaeus were assessed under standardized conditions in a recirculated water system. The effects of standardized treatments of 17α methyltestosterone and 17β estradiol were assessed by comparison with untreated controls of O. niloticus , O. mossambicus and O. aureus and the growth performance of nine interspecific hybrids in comparison to their parental species were studied.
The results showed significant differences in growth rate for the strains of the pure species under the conditions used. Standardized hormone treatment had significant effects on sex ratios and growth performance of all the species studied but did not change their overall performance ranking when compared to the pure species. No hybrid performed significantly better than the best parent for SGR although O. aureus × O. niloticus hybrid was significantly better than O. niloticus when corrected weight gain was used. This work shows that species choice hormone treatment and hybridization have implications for tilapia culture.     

All-male Tilapia Hybrids of Two Strains of Oreochromis niloticus

Hybridization between Nile tilapia Oreochromis niloticus (Local and Stirling University strains) and blue tilapia O. aureus was found to be a tool to produce monosex populations. In order to select a purebred that produces all- or nearly all-male hybrids with high productivity, O. niloticus females and their diploid gynogenetics (meiogynes and mitogynes) were hybridized with O. aureus males. The sex ratio of progenies was evaluated from inter- and intraspecific crosses of two strains of Nile tilapia. Single-pair matings and group spawns under hatchery conditions showed no deviation ( P > 0.01) from the expected sex ratio of intraspecific crosses among two strains of Nile tilapia. However, a higher proportion of male progenies in blue tilapia was observed in group spawns in pond ( P < 0.004) and hatchery conditions ( P < 0.01). Only the Stirling strain and mitogynes produced all-male progenies under laboratory conditions. There were significant differences ( P < 0.05) in growth among hybrid progeny groups, when gynogens and their regular O. niloticus (Local strain) females were crossed with O. aureus males. Six-month hybrid offspring from mitogyne female parents grew better than those from regular and meiogyne female broods.     

细胞核rDNA序列用于罗非鱼及其杂交种鉴别的初步研究

罗非鱼种间，尤其是尼罗罗非鱼与杂种尼奥罗非鱼之间，很难区分。本文对尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼、莫桑比克罗非鱼和杂交种尼奥罗非鱼（尼罗罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂）和红罗非鱼的核糖体DNA内部转录间隔子1（ITS1）序列及其两侧的18S和5．8s部分序列特征进行分析，以筛选种间鉴别标记。PCR扩增产物大小约700bp，测序结果表明，（去除引物后）18S长146bp，5．8S长66bp，不同种类之间无差异；ITS1长383-483bp，因种类不同而异，其GC含量大于AT含量，达到67．1％。序列比对分析结果表明，18S和5．8s片段高度保守，但各有3个变异位点可以把上述几个种和杂种相互区分开；18S序列上有一个UnbI限制性酶切位点，可作为尼罗和尼奥罗非鱼的鉴别标记。ITS1序列种间变异大，系统发育分析表明，所研究的5个种聚成2个类群，尼罗与尼奥罗非鱼为一组，莫桑比克-红罗非鱼-奥利亚罗非鱼为另一组。组内种间遗传距离较小，尼罗和尼奥罗非鱼的种间遗传距离为0．006；莫桑比克、奥利亚和红罗非鱼的种间遗传距离在0．007-0．009之间；两组罗非鱼之间的遗传距离较大，在0．030-0．035之间，表明罗非鱼ITS1序列多态性较高，适合于种类区分。结合部分18S和5．8S序列，细胞核rDNA具有鉴别罗非鱼及其杂种的潜力。