施氏鲟的性腺分化及养殖水温对其性腺分化的影响

利用组织学方法观察了养殖施氏鲟(Acipenser schrenckii)原始生殖细胞(PGCs)的起源、迁移和原始生殖腺的形成及分化。结果表明,施氏鲟PGC最早出现于1.5 dph(days post-hatching)的仔鱼中肾管(又称吴尔夫氏管)原基一侧的中胚层中。3~7 dph,PGCs数目增多,并聚集成细胞索,17~31 dph,PGCs沿肠系膜向肾管区下方迁移,并与生殖嵴细胞一起形成原始性腺;40～60 dph时成群的小细胞团由肾区向原始性腺迁移,原始性腺上皮细胞柱状;90~120 dph,原始性腺中出现生殖上皮和性细胞,脂肪细胞和血管增多。180 dph以后,施氏鲟幼鱼性腺在组织学水平上出现光滑型(精巢)和褶皱型(卵巢)2种性腺组织结构,标志施氏鲟幼鱼性腺在解剖学水平上已经分化。本实验结果表明,孵化后31～180 d为其性腺分化的关键期。将孵化后56 d的仔鱼分别在不同的水温(27℃±0.5℃、24℃±0.5℃、21℃±0.5℃、18℃±0.5℃和15℃±0.5℃)中培育至210 d,组织学观察其性腺的发育和分化,结果发现,温度可影响施氏鲟幼鱼性腺分化的时间,但不影响其性腺分化的方向。高温(24℃和27℃)可使施氏鲟幼鱼提前性腺分化,其中27℃组较对照组(21℃)提前50 d,24℃组提前30 d;低温(15℃组)则延长幼鱼性腺分化的时间。施氏鲟幼鱼的性别分化不属于温度依赖型。     

大黄鱼性腺性别分化的组织学观察

利用组织学方法研究了大黄鱼的性腺分化和发育规律。大黄鱼受精卵于2009年9月22日开始孵化,孵化水温26℃,育苗水温22.0~25.8℃,养殖水温11.5~25.6℃。20日龄稚鱼(体长17.6~19.2 mm)腹腔中一对原始性腺已经形成。55日龄幼鱼(体长27.5~37.0 mm)半数个体性腺中形成成簇发育的卵原细胞群,标志着卵巢解剖学分化开始。减数分裂和卵巢腔的形成同时开始于60日龄(体长28.0~37.2 mm)。120日龄幼鱼(体长39.2~51.0 mm)性腺中,初级卵母细胞出现,标志着卵巢细胞学分化的开始。精巢分化开始于第95日龄(体长38.0~48.0 mm),其解剖学标志为生精导管的形成及体细胞在性腺中的散布方式。145～195日龄,由于水温过低,鱼苗停止生长,期间性腺发育水平没有明显变化。215日龄幼鱼(体长44.0~59.2 mm)性腺中精母细胞的出现标志着精巢细胞学分化的开始。精小叶于230日龄(体长56.2~72.8 mm)形成。由此可见,大黄鱼雌性性腺发育早于雄性性腺,且大黄鱼性腺分化类型属于分化型雌雄异体型。     

中华锯齿米虾内外性征分化时间与特征

通过对中华锯齿米虾(Neocaridina denticulate sinensis)早期性腺发育的组织学观察和第一腹肢的形态学观察,研究了其雌雄性腺分化的时间、分化过程中生殖细胞及第一腹肢变化的特征。实验结果表明,卵原细胞出现在孵化后发育12～18 d的幼体,此时期所有幼体的第一腹肢内肢均具有刚毛。孵化后发育18～22 d幼体的性腺出现了两种类型:类型1和类型2,类型1具有典型的卵巢特征,之后沿着卵巢发育方向分化;类型2兼备精巢和卵巢的一些特征,之后沿着精巢发育方向分化。精巢的分化要经过一个类卵巢的阶段,在该时期还出现了雄性生殖肢,其第一腹肢内肢刚毛数量减少且为卵圆形,而雌性第一腹肢的内肢在形状与刚毛数量上无明显变化,雄性生殖肢的出现与精巢的分化时间是一致的。     

漠斑牙鲆工厂化苗种繁育试验

经过66d的控温、控光和加强营养等生殖调控措施,漠斑牙鲆雌性亲鱼性腺发育成熟率为69%,雄鱼性腺发育成熟率为85%,总计产卵8090ml,其中未受精卵6175ml,受精卵1915ml,受精率为24%。孵化水温18℃,盐度27～29,pH8.0～8.2,受精卵50h后孵化出仔鱼;共孵化出初孵仔鱼112.0×10^4尾,孵化率为58.5%。仔稚鱼培育水温为19～20℃,幼鱼培育水温为20～22℃,经过90d的培育,苗种全长达30mm。18个培育池120m3水体,共培育出全长大于30mm的鱼苗30余万尾,总成活率为26.8%;单位出苗量为1562.5尾/m^2;幼鱼白化率小于3%。试验结果表明,用“控温＋控光＋营养”调控法进行漠斑牙鲆苗种工厂化繁育可行并且是成功的。     

石鲽人工繁殖初步研究

首次报道了石鲽亲鱼培养、产卵习性、卵子孵化、仔稚鱼培育的试验结果。人工培养条件下，石鲽亲鱼性腺虽能发育，但难以自然产卵，需人工催产。石鲽性腺发育适宜水温为4-10℃，受精卵正常孵化水温为4～8℃。在6～10．5℃条件下，经34天培育，共获1．3cm接近完成变态的稚鱼804尾。     

大亚湾黑鲷繁殖特征的生物学研究

为开展大亚湾黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)的增殖和保护,于2018年1月、3月、4月和8—12月共采集了721尾黑鲷样本,研究了大亚湾黑鲷繁殖生物学的周年变化特征。结果表明,1)繁殖期的雌性全长为175～487 mm,均值为(297.92±56.61) mm,体质量为90.96～1 907.12 g,均值为(511.36±307.53) g,雄性全长为110～440 mm,均值为(237.61±61.05) mm,体质量为21.92～1 370.00 g,均值为(277.76±210.33) g,雌性个体全长显著大于雄性个体全长(P0.001);2)性腺成熟系数和性腺发育表明大亚湾黑鲷繁殖期为11月至翌年3月;3)具有雌雄同体个体存在,表明该物种会发生性逆转,且表现为雄性个体先成熟再向雌性转变;4) 50%性成熟雌性全长达到248.52 mm,雄性为148.03 mm;5)卵径频率分布表明黑鲷为分批产卵型鱼类,绝对繁殖力为84 100～2 655 168粒,均值为(728 732±499 547)粒;全长相对繁殖力为380.54～8 271.55粒·mm~(-1),均值为(2 731.44±1 630.93)粒·mm~(-1),体质量相对繁殖力为277.58～3 592.83粒·g~(-1),均值为(1 443.87±766.82)粒·g~(-1),绝对繁殖力与全长、体质量及性腺质量均呈显著线性相关。     

鮸鱼早期发育的形态学初步研究

对(鮸)鱼Miichthys miiuy(Basilewsky)胚胎和仔、稚、幼鱼的各发育阶段的形态特征进行了描述.(鮸)鱼的受精卵为圆球形浮性卵,无色透明,在水温25～27 ℃、盐度31.9的条件下,经19 h 18 min陆续孵出仔鱼.根据胚后发育的形态特征对仔、稚、幼鱼各时期提出界定标志,仔鱼期初孵仔鱼发育至各鳍分化完成(1～17日龄,持续17 d);稚鱼期鳞片开始出现、生出枕骨棘至全身被鳞(18～32日龄,持续15 d);33日龄以后进入幼鱼期.仔、稚、幼鱼培育水温25.8～32.2 ℃,盐度28.6～32.5.(鮸)鱼以卵径(0.91 mm)、油球径(0.33 mm)和枕骨棘形态等的特征区别于其他石首鱼类早期发育的形态依据.     

半滑舌鳎的性腺分化和温度对性别决定的影响

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2～3倍。由于温度可影响多种鱼类的性腺分化,因而探索温度对该鱼的性别决定和性腺分化的影响,获得性逆转雄性亲本,用于培育全雌后代,具有重要的应用前景和经济效益。通过石蜡组织切片,对半滑舌鳎早期性腺分化进行组织学观察。发现在24℃饲养条件下,孵化后30 d半滑舌鳎性腺开始分化,其中具有裂隙的性腺原基未来发育为卵巢,而不具裂隙的原基未来发育为精巢。在孵化后25～100 d对半滑舌鳎进行不同温度(16℃、20℃、24℃、28℃、32℃)处理,在9月龄时利用石蜡组织切片鉴定表型性别,观察温度对性腺分化的影响,结果表明,28℃和32℃高温能显著提高群体中的雄性比例,使其分别达到69.2%和66.7%;而低温16℃和20℃对性腺分化影响不大,群体中雄性比例分别为56.5%和57.1%;24℃处理群体中雌雄个体比例接近1∶1。半滑舌鳎雌性特异的遗传性别鉴定技术也检测到高温和低温处理组出现了由基因型雌性向表型雄性逆转的雄性个体。这些结果表明温度影响了半滑舌鳎性腺分化方向。     

花鲈性腺分化组织学及性别相关基因cyp11b和cyp19a1a的表达分析

以花鲈(Lateolabrax maculatus) 1~214 dph (day post hatching)的仔稚鱼、幼鱼以及18月龄的雌鱼和雄鱼为研究对象,研究了花鲈早期性腺发生、发育和分化情况;分析了性腺分化过程中性别相关基因(cyp11b和cyp19a1a)的表达及与性别之间的关系。结果显示,在30 dph [全长为(1.28± 0.10) cm],首次在中肾管前端的腹腔膜周围观察到原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs),说明30 dph前是花鲈胚后PGCs迁移至生殖嵴的关键时期;在55 dph [全长为(2.45±0.19) cm],观察到一对呈对称分布的原始性腺已经形成,说明花鲈幼鱼的原始性腺在30~55 dph (全长为1.28~2.45 cm)之间发生;55~180 dph时(全长为2.45~12.28 cm),原始性腺不断发育变大,并且一直处于未分化状态;180 dph后性腺开始分化;在195 dph [全长(14.54±1.54) cm]观察到精巢开始分化,卵巢于205 dph [全长为(15.86±0.94) cm]开始分化,且性腺的解剖学分化要早于细胞学分化;18月龄的花鲈幼鱼性腺发育到Ⅱ期。性别分化相关基因cyp19a1a在花鲈卵巢中的表达量高于同期精巢,说明其在卵巢的分化及维持中发挥更关键的作用,而cyp11b在18月龄幼鱼Ⅱ期精巢中的表达量显著高于同时期的卵巢及Ⅰ期精巢,说明其主要在精巢的分化及维持中扮演重要角色。本研究结果不仅可以丰富花鲈的繁殖生理学资料,也为其性别调控技术的研究提供了科学依据。     

人工养殖银鲳子代胚胎发育及仔稚幼鱼形态观察

采用人工培育的子代银鲳(Pampus argentus)为亲本,对银鲳的胚胎及胚后各发育阶段的形态特征进行观察测量,以期为今后苗种培育和繁殖生物学研究提供参考资料.银鲳成熟卵子为端黄卵,单个油球,卵径(1.417±0.063)mm,油球径(0.575±0.031)mm.在水温(20.0±0.5)℃、盐度24±1,pH8.0～8.5条件下,受精卵经36 h孵化出膜.初孵仔鱼在水温19.0～24.0℃、盐度 23±1,pH8.0～8.5、光照2 000～3 000 lx条件下,经60 d培育成幼鱼.银鲳早期发育分前期仔鱼、后期仔鱼、稚鱼和幼鱼,前期仔鱼以卵黄囊吸收消化为主要形态特征;后期仔鱼分化出侧囊、食道、胃、幽门育囊和肝脏等消化器官,外形特征是鱼体腹两侧星状黑色素及金黄色斑点明显,背鳍和臀鳍鳍条原基出现,13日龄仔鱼全长(5.586±0.479)mm,体高((1.068±0.087)mm;稚鱼期消化器官进一步完善,脊索末端向上曲屈,随后尾下骨出现并且尾下骨末端与体轴倾斜,至35日龄尾下骨与体轴垂直,45日龄体高明显增高,全长(25.560±3.870)mm,体高(11.157±1.266)mm.幼鱼期胸鳍前端呈尖形,尾鳍上下两侧生长加快形成深叉状,鳞片完全长成,60 d时全长为(引.000±3.300)mm,体高达(19.750±1.620)mm,此时体形与成鱼已无差别.此外,本研究还对仔稚幼鱼的划分、鲳属鱼类中主要品种胚胎与仔稚鱼发育的异同点以及育苗中容易出现死亡的关键时期进行了分析探讨.     

Gonadal morphogenesis and sex differentiation in cultured chub mackerel,Scomber japonicus

The timing of primordial germ‐cell (PGC) migration with regard to the gonadal anlagen, gonad formation and sex differentiation was examined histologically in the chub mackerel (Scomber japonicus) at 5–190 days post hatching (dph). At 5 dph, PGCs appeared on the peritoneal epithelium surface or in the mesentery, on the dorsal side of the abdominal cavity. By 10 dph, stromal cells around the PGCs proliferated. The gonadal primordium was formed by 15 dph. The gonadosomatic index was 0.01% at 30 dph and increased thereafter (0.32% in females and 0.04% in males at 160 dph). Ovarian differentiation occurred at 30–40 dph, indicated by ovarian cavity formation (elongation and fusion of the upper and lower ovarian edges). Meiosis was subsequently initiated. A few meiotic oocytes surrounded the cavity at 50 dph; most were in the perinucleolus stage at 60 dph and attained a diameter of 60–70 μm at 190 dph. Testicular differentiation occurred at 30 dph, indicated by the formation of the sperm duct primordium. Spermatogonia gradually proliferated, developing into spermatocytes at the chromatin–nucleolus stage (after 90 dph) and subsequently into spermatids and spermatozoa (160 dph). These data could aid the development of seeding and cell‐engineering technologies for scombrid fish.     

水温对半滑舌鳎性腺组织发育的影响

探讨了不同温度(19,21,23,25和27 ℃)对半滑舌鳎的性腺组织发育的影响。在受精后39～106 d对半滑舌鳎进行温度控制处理,通过石蜡组织切片,对半滑舌鳎早期性腺分化发育进行组织学观察。发现在19 ℃饲养条件下,受精后46 d(pfd46)半滑舌鳎性腺原始生殖细胞数量增加,有分化成卵巢的倾向;在该条件下,pfd82半滑舌鳎性腺开始分化为精巢。pfd82时,27 ℃条件下的幼鱼卵巢中卵原细胞数目大量增殖;精巢中精小叶多而密,结缔组织间隔清晰。pfd129时,27 ℃处理的幼鱼卵巢发育到Ⅱ期,其他温度处理组仍处于Ⅰ期卵巢,但随着温度的提高,卵巢中卵母细胞数目增多,且由散乱分布变为有序的排列在卵巢小叶中;精巢中贮精囊数量增多,囊腔中精子增多。pfd142时,高温处理组幼鱼性腺发育最快,其Ⅱ期卵巢中卵母细胞数目最多,精巢中后期生精细胞偏多,精子几乎分布到各个精小叶中,且贮精囊结构发达,内纳高密度精子,在周围输精管中也分布着精子。结果表明，温度影响了半滑舌鳎性腺发育程度,二者呈现线性关系,在适当温度范围内,性腺发育速度随着温度升高而加快。     

Cryopreservation of trout primordial germ cells

A method for cryopreserving trout primordial germ cells (PGCs) was established. Trout PGCs were successfully cryopreserved with high survival by freezing with medium containing 1.8 M ethylene glycol. Transplantation experiment revealed that frozen/thawed PGCs colonized and proliferated in the recipients' gonads.     

基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究

在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与体细胞分离,形成所谓的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)。母源性基因Dead end(dnd)在胚胎发育中特异地表达于原始生殖细胞,编码一种进化上保守的RNA结合蛋白,对生殖细胞发育具有重要作用。本研究通过PCR获得大黄鱼(Larimichthys crocea)dnd基因(Lcdnd)的部分cDNA序列,结合实时定量PCR、整胚原位杂交等技术,研究Lcdnd在各组织和胚胎发育中的表达。实时定量PCR结果显示：dnd在性腺中特异表达,且其在卵巢中的表达量高于精巢；检测的各期胚胎中都有dnd的表达,随着胚胎的发育其表达量呈下降的趋势。整胚原位杂交结果显示：Lcdnd在早期卵裂阶段主要分布于分裂沟,到囊胚期至原肠早期则开始定位于细胞内,原肠早期时定位在胚环中的中内胚层,且阳性信号增多,暗示此时原始生殖细胞的形成。接着原始生殖细胞沿胚环向胚体形成处(胚盾)迁移；随着胚胎的发育,发现胚体两侧的阳性信号增多；到体节发生期,阳性信号细胞分布于胚体两侧的侧板中胚层,随着体节的发生这些细胞沿背腹轴向腹部运动；发育到孵出期时,到达了发育中的原始生殖嵴。本研究首次使用dnd作为一种较为可靠的大黄鱼生殖细胞标记,揭示了大黄鱼原始细胞的起源与迁移,为大黄鱼生殖细胞发生发育及养殖大黄鱼的育性控制的研究奠定了一定的基础。     

菊黄东方鲀性腺分化的组织学观察

运用组织切片法,对菊黄东方鲀性腺分化过程进行了观察。在40日龄前,原始性腺未分化。40日龄(21.60～24.71mm),约半数个体开始形成卵巢腔,分化为卵巢;其他约半数个体的性腺仍未分化。雌鱼在60日龄(35.51～43.60mm),形成封闭的卵巢腔;70日龄(46.30～54.75mm),卵原细胞形成卵母细胞;120日龄(94.83～107.29mm),产卵板充分发育,卵巢结构已近完善。雄鱼在60日龄(35.51～43.60mm),形成精小囊及精原细胞,开始分化;90日龄(71.59～80.54mm),形成精小管和精小叶;120日龄(94.83～107.29mm),初级精母细胞形成,性腺分化基本完成。雌鱼性腺分化时期早于雄鱼。     

养殖中华鲟性腺发生与分化的组织学研究

用组织切片方法研究人工繁育中华鲟的性腺发生及两性分化过程。中华鲟出膜后3d，原始生殖细胞以单细胞的形式存在于肾管区腹下方。出膜后11d，生殖褶形成，到2月龄和7月龄时，性腺中分别出现血管和脂肪组织，直到8月龄性腺均处于两性未分化状态，划分为0期。9月龄(体重0．6～1．1kg)，性腺出现组织学水平上的两性分化，性腺划入I期。I期性腺中，精(卵)原细胞进行有丝分裂。以初级精(卵)母细胞出现作为Ⅱ期开始的标志，精巢和卵巢分别于1．8～2．2年龄(1.55～5．6kg)和2．5～3．0年龄(3．1～8．2kg)进入Ⅱ期。3年龄以后，性腺发育分化陆续达到肉眼可分辨性别的程度，5～5．6年龄(18～35．5kg)时，所有的性腺能肉眼区分雌雄，但精巢和卵巢仍都处于Ⅱ期，其中卵母细胞的卵径为60～240μm。     

Germ cells during gonadal sex differentiation in the teleost

We reported previously that two isoforms of vasa mRNA and protein are present in tilapia (Kobayashi et al. 2002). One (vas-s) lacks a part of the N-terminal region found in the other isoform (vas). Both isoforms are expressed in oocytes through the embryonic stages when PGCs localize in the lateral plate mesoderm. After PGCs localized in the gonadal anlagen, vas-s expression increased and vas expression became undetectable. Expression of both isoforms was observed again after morphological gonadal sex differentiation, irrespective of genotypic sexes. These changes are in accordance with sex differences in number of gonial germ cells during this period, suggesting that molecular sexual dimorphism occurs in germ cells between both sexes during this period.