培养基更换后草鱼出血病灭活疫苗的免疫效果

使用廉价培养基ＣＡＳ在ＣＩＫ细胞系上增殖草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ—８５４株），所制备的灭活疫苗性能稳定，安全性好。用该疫苗免疫草鱼，饲养１０天后，其血清中和抗体水平测定结果表明，注射组为１０７．９±１１．０（３），浸泡组为６８．５±９．９（３），与对照组［２０．２３±４．５（３）］相比，Ｐ值分别为Ｐ＜０．００１和０．００１＜Ｐ＜０．０１，差异极显著。     

团头鲂血清中抗病毒因子的研究

作者比较了团头鲂、草鱼、鲤鱼血清对草鱼出血病病毒（ＧＣＲＶ－８５４）的中和效价，发现团头鲂的血清中和效价高达６３００，并测得其春夏秋冬的中和效价无明显差异。用提纯的病毒蛋白偶联上Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ作为亲和层析柱，成功地从团头鲂血清分离到了抗ＧＣＲＶ－８５４的蛋白质因子。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗旋转瓶法大规模生产工艺↑（*）

Ｃａｒｅｌ氏瓶静置培养草鱼ＣＩＫ细胞，细胞２～３ｄ内长成单层，细胞单层均匀而稳定；旋转瓶培养，细胞７ｄ左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。２种方式所培养病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。０．１％福尔马林４℃条件下灭活病毒材料１７ｄ制备疫苗，疫苗性能稳定，安全性好。疫苗效力检验结果表明，注射免疫１０ｄ和浸泡免疫１０ｄ后，免疫鱼体内血清中和抗体效价分别为１０７．９±１１．０（３）和６８．５±９．９（３），免疫保护力分别为（７７．１±８．９）％（３）和（７３．９±８．３）％（３），与对照组相比差异显著。本研究建立了草鱼细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺流程，进行了较大规模的疫苗生产和生产性免疫试验，免疫草鱼成活率平均达到８５％以上。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的最小免疫量、免疫期和保存期

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫最为稀释１０＾３倍、０．２ｍｌ／尾。免疫产生期为疫苗注射后的第２天；免疫保护期达１５个月。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的制备及其免疫效果

本文报道经筛选的ＧＣＨＶ－８４１毒株在草鱼吻端成纤维细胞系中进行适应性培养，弱毒驯化，细胞培养弱毒疫苗的制备，安全性观察，不同稀释度和剂量的免疫保护率测定及保存试验，ＧＣＨＶ－８４１毒株在ＰＳＦ细胞中继代驯化至５３代达到减毒目的。筛选得５３－５９代作毒株在ＰＳＦ细胞中继代驯化至５３代达到减毒目的，筛选得５３－５９代作毒种制备的细胞制备细胞弱毒疫使用安全，用稀释１０－１０＾４倍的疫苗，０．１－０．３     

草鱼血清生长激素水平的日变化

草鱼血清生长激素水平的日变化ＤＡＩＬＹＶＡＲＩＡＴＩＯＮＳＯＦＳＥＲＵＭＧＲＯＷＴＨＨＯＲＭＯＮＥＬＥＶＥＬＳＩＮＧＲＡＳＳＣＡＲＰ￥ＺｈａｎｇＷｅｉｍｉｎａｎｄＬｉｎＨａｏｒａｎ（ＢｉｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅａｔｏｆＺｈｏｎｇｓｈａｎＵｎｉｖｅｒ...     

特异化饵料免疫预防草鱼出血病的生产性试验

草鱼出血病是一种病毒性鱼病，它严重影响着草鱼的成活率，尤其是对一龄草鱼种的危害。目前比较有效的防治方法是将出血病疫苗注射到鱼体使其获得后天的免疫保护力，但这种注射法需要一尾一尾地进行，费工费时还易损伤鱼体，对当年草鱼和大规模的鱼种生产难以应用。因此，研究更简便、有效的免疫途径是预防草鱼出血病迫切需要解决的课题。我们于１９９６～１９９８年用草鱼出血病细胞疫苗处理的特异化饵料，在草鱼苗开口期投喂，完成疫苗接种。经室内攻毒测定，对草鱼出血病的免疫保护力可达９０％以上，免疫后的草鱼血清抗体凝集价显著高于…     

银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答研究

以绵羊红细胞为载体，建立了检测银鲫血清抗体的间接血球凝集试验。用该方法研究了银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答一般规律。研究结果表明，疫苗免疫组在免疫７天后可以测到血凝抗体，２１天达到高峰值４０９６，然后开始下降，３５天时抗体滴度降为１６。加弗氏不完全佐剂疫苗免疫组亦在７天时可以测到血凝抗体，２１天达到１０２４，３５天时为２０４８，抗体维持在较高的水平。对鱼体免疫后的保护力进行测定，结果表明，两个免疫组分别在７天左右和１４天左右开始产生保护力。免疫保护力在鱼体免疫初期随着抗体滴度的增加而加强，随后在一段时间内保持在较强的水平，并不随抗体滴度的下降而减弱。浸泡免疫试验的结果亦表明，银鲫可以通过浸泡免疫获得免疫保护力。     

草鱼出血病病毒VP6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果

为了探讨草鱼出血病病毒(GCRV)VP6亚单位疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用,将vp6基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),构建了重组质粒pET28a(+)-VP6。SDS-PAGE和Western-blotting显示,重组VP6蛋白的分子量约为43 ku,主要以包涵体形式存在,重组蛋白占菌体总蛋白的20%左右;Ni2+柱纯化后的重组蛋白,以每尾500μg肌肉注射免疫草鱼(14～20 cm,60～120 g),并在第14、21、28、49、70天通过间接凝集反应检测抗体水平,结果显示,免疫注射后第14天可检测到鱼体产生的特异性抗体,第21天达到最高峰,第70天仍可检测到抗体的存在;免疫注射第21天人工接种GCRV,免疫后的草鱼对出血病的保护力达100%。     

8903浸泡免疫的免疫性试验

水温控制在２０℃以上时，草鱼种浸泡免疫后第１５天成活率达９６．３％，保护力高达９４．１％，对２００尾２．６ｃｍ左右的草鱼种进行中间免疫试验，成活率平均９２．６％。８９０３浸泡免疫草鱼种免疫期可长达１６个月，比注射免疫长２－３个月。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70％以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0(6)％,血清中和抗体效价为160.5±58.9(6);而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2(6)％、88.3±26.2(6);二者有显著的差异(0.05>P>0.01)。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10~(4.5)TCID_(50)/尾左右,FR—836—w在3—5×10~(7.5)TCID_(50)/尾左右,其免疫保护力可达80％左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10~(5.1)TCID_(50)/ml。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70%以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0（6）%,血清中和抗体效价为160.5±58.9（6）;而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2（6）%、88.3±26.2（6）;二者有显著的差异（0.05>P>0.01）。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10^4.5TCID0/尾左右,FR—836—w在3—5×107.5TCID₅₀/尾左右,其免疫保护力可达80%左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10^5.1TCID₅₀/ml。     

在草鱼免疫反应中莨菪佐剂性的初步观察

在草鱼免疫反应中莨菪佐剂性的初步观察赵建培（福州市郊区水产技术推广站，福州３５００１１）史维舟，陈昌福（华中农业大学水产学院，武昌４３００７０）已有研究报道指出，英若具有增强鱼类免疫力的作用［１］。但是，关于度著究竟是如何作用于鱼类的免疫系统，即为什...     

初探母源免疫处理草鱼母本及其子代5种免疫因子含量的周年变化规律

为探究草鱼母源免疫因子传递特性,本实验借助ELISA和qPCR技术分别检测分析了GCRV弱毒疫苗免疫草鱼母本及其子代（即母源免疫子代）早期胚胎阶段至一龄期间5种免疫因子（IgM、C3、LZM、MBL和Bf）蛋白活性和基因表达水平的周年变化规律。结果显示,草鱼母本经GCRV弱毒疫苗免疫后,血液中5种免疫因子蛋白活性及基因表达水平在产卵期均显著高于对照组1.5倍以上,至免疫后第11个月与对照组无显著差异。母源免疫子代发育至水花（4 d）时,IgM、C3、MBL和Bf的基因表达水平均高于对照组;发育至乌仔（15 d）时,IgM、C3和Bf的蛋白活性水平均略高于对照组;发育至5~11月龄时,5种免疫因子在肝脏、脾脏、肾脏和头肾等免疫器官中仍存在高表达。研究表明,GCRV弱毒疫苗促使母源免疫因子在亲本和子代体内富集表达具有一定的时效性,最长可维持至11个月,为实际生产中草鱼母本疫苗免疫程序的制定提供参考依据。     

GCRV弱毒疫苗免疫草鱼母本的免疫因子代间传递与表达特性

为探究GCRV弱毒疫苗母源性免疫的草鱼母本及其子代免疫因子(IgM、C3、LSZ)表达特性及代间传递效应,采用ELISA、Rt-q PCR等方法检测了草鱼母本产前40 d接种疫苗后,母本血液、子代早期发育阶段及2月龄幼鱼3种免疫因子的蛋白活性及基因表达水平。结果显示,经GCRV弱毒疫苗免疫的草鱼母本血液、早期胚胎及幼鱼阶段IgM蛋白活性均显著高于对照组样品。子代各阶段中,28日龄的夏花样品IgM蛋白活性水平最高,而5日龄水花样品中蛋白活性最低;从受精卵发育至3日龄水花阶段,实验组样品免疫因子C3和LSZ的蛋白活性均显著高于对照组;2组鱼中IgM、C3和LSZ蛋白的活性水平随着发育进行,总体上呈先下降后升高的趋势,从卵细胞至3日龄水花阶段实验组样品C3和LSZ蛋白活性水平均显著高于对照组。实验组和对照组受精卵IgM基因的表达水平差异最大,实验组表达量为对照组的3.4倍。从24 h器官形成期至3日龄水花样品中,实验组C3基因的表达水平显著高于对照组。从卵细胞至3 h囊胚期阶段,实验组LSZ基因表达水平显著高于对照组。实验组2月龄草鱼体肾、头肾、脾脏组织中IgM基因表达量均显著高于对照组;感染GCRV病毒后,实验组死亡尾数(2尾)低于对照组死亡尾数(5尾)。研究表明母源性免疫可在草鱼进行代间传递,并对子代起到一定程度的免疫保护作用。     

3月龄草鱼种免疫器官组织学及其免疫后免疫基因的转录差异

为研究处于同一时期但养殖条件不同的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鱼体规格与发育状态间是否具有一致性,观察压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏的显微结构,并对压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼进行腹腔注射疫苗处理,实时荧光定量PCR检测免疫7 d后、14 d后各期草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏中IgM与MHCⅠ的表达量。结果显示,压塘3月龄草鱼各组织发育较普通3月龄草鱼迟缓。压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼在免疫后,头肾、中肾、肠道与脾脏中IgM和MHCⅠ的表达量均有上升,且IgM与MHCⅠ的相对表达量峰值均出现在普通3月龄草鱼免疫14 d后的中肾中(IgM为74.51倍;MHCⅠ为56.02倍。结果表明,草鱼出血病活疫苗可以增强草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏中IgM和MHCⅠ的表达,且在3月龄时期进行注射免疫效果最佳。     

Immune protection in carp, Cyprinus carpio L., after immunization with Aeromonas hydrophila crude lipopolysaccharide

Abstract. Vaccination with crude lipopolysaccharide (LPS) induced better protection against infection with Aeromonas hydrophila in carp than vaccination with formalin killed vaccine. Dipping fish in vaccine for 2 h at 25°C was more effective than intraperitoneal injection of the vaccine in procedural simplicity, lower stress loading and the degree of protection acquired. In carp immunized with crude LPS by the dip method, antibodies were not detected by bacteriai agglutination, passive haemagglutination and the agar diffusion tests. The results indicate that the protection against A. hydrophila infection in carp is not dependent on humoral immunity.     

饲料中添加谷胱甘肽对草鱼生长、生理指标和抗病力的影响

选用初始体质量约8.50 g的草鱼(Ctenopharyngodon idella),在56 d的饲养期中分别投喂添加5种不同剂量谷胱甘肽(GSH)(添加量分别为0 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg和400 mg/kg)的试验饲料,观察GSH对草鱼生长、生理指标和抗病力的影响。结果表明,饲料中添加GSH能够提高草鱼特定生长率、存活率和饲料效率。其中,300 mg/kg GSH组草鱼的特定生长率和400 mg/kg GSH组草鱼的存活率显著高于对照组;添加GSH各组草鱼的饲料效率均显著高于对照组,当添加量为200 mg/kg时草鱼饲料效率达到最高。与对照组相比,饲料中添加GSH的各组草鱼肝胰指数明显升高,其中200 mg/kg组达到显著水平。饲料中添加GSH能够提高血清IGF-1水平,其中300 mg/kg和400 mg/kg组显著高于对照组。与对照组相比,各实验组草鱼血液白细胞数目有不同程度升高,其中300 mg/kg和400 mg/kg组均达到显著水平。饲料中添加GSH可以提高草鱼对嗜水气单胞菌的抵抗能力,其中200 mg/kg GSH组草鱼攻毒后存活率达到最高。以特定生长率为判定指标,GSH在草鱼饲料中的适宜添加量为350 mg/kg。