虾夷马粪海胆体腔液中调理素样分子的研究

为研究虾夷马粪海胆体液免疫机理,测定其体腔液吞噬细胞在不同介质中对不同处理的酵母细胞的吞噬作用。对其无细胞体腔液、从调理及非调理酵母细胞分离出的成分进行SDS-PAGE分析,同时对无细胞体腔液进行透析、SephadexG-200凝胶层析和SDS-PAGE分析,在等渗缓冲液和酵母细胞吸附的无细胞体腔液中,测定不同调理素样分子浓度和不同反应时间时吞噬率的变化。结果显示,吞噬细胞在3种介质:等渗缓冲液、酵母细胞吸附的无细胞体腔液和无细胞体腔液中对非调理酵母细胞吞噬率之比为1.00∶1.11∶1.94,在等渗溶液中对调理酵母细胞的吞噬率是非调理酵母细胞的1.61倍;从调理酵母细胞分离出的成分在SDSPAGE中显示一条调理素样分子带,分子量为250.62 ku。经透析和SephadexG-200凝胶层析后,测得纯化的调理素样分子的分子量为250.62 ku;在所测试的浓度范围内,调理素样分子浓度越大,吞噬活性越高,且5.0和10.0μg/mL组在各个测试时间均比对照组高。在等渗缓冲液中,反应30 min时,10.0和5.0μg/mL组与对照组均有极显著差异(P0.01),在酵母细胞吸附的无细胞体腔液中,反应30 min时,10.0μg/mL组与对照组有显著差异(P0.05)。结果表明,在虾夷马粪海胆体腔液中发现一种调理素样分子,分子量约为250.62 ku,一定浓度的调理素样分子能显著提高虾夷马粪海胆体腔液吞噬细胞的吞噬活性。     

虾夷马粪海胆生物学及增殖养殖技术

综述虾胰马粪海胆的生物学特性,人工育苗,放流增殖和养殖技术。     

虾夷马粪海胆对饵料选择性研究

研究虾夷马粪海胆幼胆对鲜海带、盐渍海带、干海带、白菜和萝卜的饵料选择性。利用五种物料饲喂虾夷马粪海胆幼胆50天,检测海胆的成活率、生长情况。结果发现,摄食鲜海带和干海带组成活率最高,分别达到(99.83±0.29%)和(93.50±2.60%);摄食干海带和盐渍海带组的增重率最高,分别达到(120.36±3.13%)和(117.34土5.74%);摄食鲜海带和盐渍海带组的壳径扩增率最大,分别达到(4.74±0.45%)和(4.30±0.40%)。虾夷马粪海胆幼体摄食干海带时,饵料系数最低,为1.62±0.53。研究表明,鲜海带、干海带和盐渍海带都是虾夷马粪海胆的优选饵料。     

虾夷马粪海胆早期生长发育的遗传力估计

以虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)为亲本，采用不平衡巢式设计方法和人工授精技术，每个雄性海胆配5个雌性海胆，每个雌性个体产生若干幼体，构成了11个父系半同胞家系和35个母系全同胞家系，分别测定了每个母系孵化后生长到3月龄和5月龄的全同胞幼海胆40-50个后代的体重和壳径，应用数量遗传学原理和半同胞组内相关分析法研究了虾夷马粪海胆早期生长发育性状的遗传力。结果表明，3月龄和5月龄的海胆体重的狭义遗传力估计值为0．339-0．523，壳径的狭义遗传力估计值为0．316-0．487。分析结果显示，雌性遗传方差组分均显著大于雄性遗传方差组分，雌性遗传方差组分存在显著的母性效应，表明由雄性遗传方差组分估计的遗传力准确可取，父系半同胞组内相关法计算的狭义遗传力是遗传力的无偏估计值。     

虾夷马粪海胆秋季人工育苗技术要点

虾夷马粪海胆是从R本引进的优良海水增养殖品种,1年中有2个繁殖季节,春季5-6月份,秋季9-11月份,适穴繁殖水温10-20℃。我国北方的育苗生产单位多在9-11月份利用育苗设施的相对空闲时间进行人工育苗。本文简要介绍了虾夷马粪海胆秋季人工育苗的技术要点,供生产单位参考。     

虾夷马粪海胆的养殖

虾夷马粪海胆原产于日本北海道和朝鲜等海域,用其生殖腺制成的“云丹”是珍贵的海产食品,经济价值很高。日本年产量达700吨,价值90亿日元。近年大连水产学院从日本引进虾夷马粪海胆进行试养。山东省1997年从辽宁长海县引进种胆400个,在蓬莱鱼类养殖试验场进行秋季育苗,已育出壳径l～1．5cm幼胆500余万个。     

虾夷马粪球海胆人工育苗

虾夷马粪球海胆(Strongylocentrotus intermedius）人工育苗中，亲胆采用0.5mol/L KCl溶液围口膜注射法催产，孵化密度20－30个／ml，个体培育期间以投喂角刺灌效果最好，当幼虫培育积温达367－369℃（约20－21d）附着变态，平均变态率为26.9%。共得稚胆334万枚。     

虾夷马粪海胆性腺cDNA文库构建及部分EST序列分析

应用Gubler-Hoffman cDNA文库技术.构建虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)性腺cDNA文库.测试结果表明.其库容量为2.10x 106 PFU/mL.长度范围在0.54.2 kb.插人片段平均长度为1.4 kb.达到建库要求.对虾夷马粪海胆cDNA克隆测序.将获得的819条EST序列与NCB1数据库进行BLAST比对.获得了65个有研究价值的EST序列和cDN^克隆.其EST序列已提交到GenBank.序列号分别为G0448010-GO448016,GR410172-GR410229.虾夷马粪海胆性腺cDNA文库的成功构建.使短期内获得大量调控海胆性腺生长和营养性状的关键基因表达信息成为可能.为进一步开发海胆的生物资源提供参考.     

虾夷马粪海胆养殖技术研究进展

虾夷马粪海胆（Strongylocentrotus intermedius）又称虾夷马粪球海胆、中间球海胆,隶属于棘皮动物门、海胆纲、正形目,球海胆科,原产于日本北海道和青森县沿海．     

虾夷马粪海胆不同家系和性别间性腺性状的比较

对来自虾夷马粪海胆20个家系的600枚海胆的性腺湿重、指数、颜色、水分和脂肪酸组成进行了测量和分析,结果显示性腺湿重和性腺指数在家系间均有极显著差异,但在性别间差异不显著,两个性腺产量性状在整个群体内均具有较大的变异;虾夷马粪海胆性腺颜色介于黄色和橙红色之间,且色泽鲜艳,经CIEL*a*b*标准量化和方差分析,L*和a*在家系间无显著差异,但b*、亮黄色差(ΔE1)和亮橙黄色差(ΔE2)在家系间均具有极显著差异,在性别间,雌性海胆的L*、a*和b*值以及两个色差均极显著优于雄性;性腺水分在家系和性别间有极显著和显著差异;性腺总脂中含有较高的EPA(12.11±2.65)%和AA(10.27±3.40)%,而DHA含量较低(0.49±0.64)%,但其在群体内变异极大(130.77%),高不饱和脂肪酸在家系间具有极显著差异,而在性别间仅AA有显著差异(雄性较高)。研究结果表明,对性腺产量和品质进行家系或性别选择均可达到提升性腺产量和品质的目的。     

虾夷马粪海胆溶菌酶基因全长cDNA的克隆与表达分析

本实验采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到了虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)溶菌酶(LYZ)基因的全长cDNA序列。结果表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因全长为912 bp, 含有1个480 bp的开放阅读框(ORF), 编码159个氨基酸, 其中第1−20个氨基酸为信号肽, 蛋白计算分子量为17.69 kD, 等电点为7.75。氨基酸比对分析表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因与紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)和刺参(Apostichopus japonicus)的i型LYZ基因相似百分比分别为91.4%和59.3%, 并且含有i型LYZ基因的保守序列DVGSLSCGP (Y)Y(F)QIK, 所以推断本实验克隆的溶菌酶为i型。采用实时定量PCR方法, 以β-actin为内标, 对其在虾夷马粪海胆各组织中的表达进行研究, 发现LYZ基因在围口膜中表达量最高, 其次是齿间肌、管足、肠、体腔液、雄性性腺和雌性性腺。利用脂多糖(LPS)刺激虾夷马粪海胆, 取刺激后不同时间的海胆体腔液, 对该基因的表达差异进行分析。结果表明, 虾夷马粪海胆的LYZ基因在LPS刺激后8 h时表达量最高, 12 h时开始逐步回落, 至36 h时回落至对照组相近水平。本结果可为虾夷马粪海胆免疫学研究及抗病相关分子标记的开发提供参考依据。

     

Isolation and characterization of bacteria associated with a syndrome disease of sea urchin Strongylocentrotus intermedius in North China

Sea urchin, Strongylocentrotus intermedius, transplanted from Japan in 1989, has been widely cultured along the coasts of Liaoning and Shandong Provinces and has become the dominant and most economically important maricultured species in North China. However, a lesion syndrome symptom of S. intermedius broke out frequently these years, showing lethargy in activities, blackish peristomial membrane and body well lesions, and brought about high mortality eventually. Six representative prominent bacterial strains were isolated from diseased sea urchin from September 2009 to January 2010. By means of API 20NE and 16S rRNA gene sequences analysis, isolates were identified as Shewanella aquimarina, Pseudoalteromonas tetraodonis, Vibrio shilonii, V. harveyi, V. fortis and V. splendidus. Bacterial challenge tests showed that their representative isolates were virulent to S. intermedius with LD₅₀ values ranging from 9.2 × 10⁴ to 3.4 × 10⁶ CFU/g body weight, among which S. aquimarina , V. fortis and P. tetraodonis were highly virulent, and the other three isolates showed moderate virulence. The results indicated that a variety of bacteria including Shewanella, Pseudoalteromonas and Vibrio were involved in the mortality of S. intermedius, and the six isolates were opportunistic pathogens of sea urchins. All isolates reported herein were sensitive to ampicillin, enrofloxacin, ofloxacin, doxycycline and florfenicol.     

温度和盐度对虾夷马粪海胆耗氧率和排氨率的影响↑（*）

采用封闭式呼吸器研究了虾夷马粪海胆（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｃｅｎｔｒｏｔｕｓｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）的耗氧率和排氨率与温度和盐度的关系。结果表明：在温度１５～２５℃的范围内,耗氧率和排氨率随温度的升高而增加;相同温度下,随个体重量的增加耗氧率和排氨率下降,呈负指数关系;虾夷马粪海胆的适宜盐度为３０左右,此时的耗氧率最大,为０．０９１ｍｇ／ｇ·ｈ,排氨率最低,为２３．６２μｇ／ｇ·ｈ。     

中间球海胆与马粪海胆杂交家系早期生长比较和亲本配合力估计

为比较中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)与马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)杂交家系间的生长差异,评估杂交家系亲本在体重上的配合力,构建了种间杂交家系共42个。采用动物模型、约束性最大似然法(REML)和最佳线性无偏预测(BLUP)等方法估计了杂交海胆250、295和340日龄体重的育种值,以及各亲本的一般配合力(GCA)和各亲本组合的特殊配合力(SCA)。采用方差分析方法,比较了体重表型值和育种值在杂交家系间的差异。结果表明,3个生长阶段杂交家系间体重的表型值和育种值差异均达到极显著水平(P0.01),体重育种值在家系间的差异大于表型值,在50%家系留种率下,育种值选择和表型值选择的家系相同率介于88.89%~94.44%,育种值选择具有0.93%~4.83%的选择效率优势;250、295和340日龄各父本的一般配合力分别介于–0.22~0.33,–0.31~0.41和–0.29~0.31,各母本的一般配合力分别介于–0.24~0.33,–0.31~0.41和–0.28~0.28,各父母本组合的特殊配合力分别介于–0.07~0.09,–0.10~0.13和–0.32~0.32,M5、M6和M17等父本的一般配合力始终较高,F9、F11和F19等母本的一般配合力始终较高,M5F9和M6F11等杂交组合的特殊配合力始终较高。