农杆菌介导法将β-1，3-葡聚糖酶基因导入油菜的研究初报

将克隆的烟草 β-1 ,3 -葡聚糖酶基因插入双子叶植物高效表达载体 p Bin4 3 8中 ,构建了植物表达载体 p BLG。利用农杆菌介导法 ,将此抗真菌基因导入甘蓝型双低油菜品种 H1 65中 ,得到了抗卡那霉素的再生植株 ,并探讨了影响油菜分化的几个要素。结果表明 :乙酰丁香酮及硝酸银等物质对油菜分化及绿苗的形成具有重要作用 ;油菜对卡那霉素十分敏感 ,提高卡那霉素浓度有可能将一部分转化体淘汰。对 8株再生植株进行了 PCR检测 ,其中 4株表现为阳性。进一步的点杂交分析表明 ,有 3株表现出较强的杂交信号 ,初步说明外源基因已整合到油菜基因组中     

烟草Ⅰ类几丁质酶和β—1,3—葡聚糖酶cDNA植物双价表达载体的构？…

将烟草中经修饰的Ⅰ类几丁质酶和β－１,３－葡聚糖酶ｃＤＮＡ分别加上ＣａＭＶ３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子,依次插入到同一植物表达载体ｐＢｉｎ１９上,获得植物双价表达载体ｐＣＧ－Ⅱ。     

Ti质粒介导的B、t、k-δ内毒素蛋白基因转化大豆的初步研究

以Ｔｉ质粒为介导，将ｐＫＴ５４Ｂ７Ｃ５质粒上的Ｂ、ｔ、ｋ－δ内毒素蛋白基因导入东北大豆“黑农３７”、“黑农３９”等品种。采用多种外植体和感染方法，从胚轴和子叶节诱导出丛生芽与再生植株。经卡那霉素筛选和冠瘿碱检测，初步证明外源基因导入大豆基因组中。共获得８１株再生植株，其中成活３０株，仅３株结７个荚，得到７粒种子。ＰＣＲ检测和ＤＮＡ分子杂交，鉴定这７株再生植株呈阳性反应，证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。７粒种子均已萌发，植株生长发育正常     

花生条纹病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

用内切酶Ｂａｍ ＨＩ和ＥｃｏＲＩ将ｐＧＥＭ－ ＳｔＶ 含有的约１１Ｋｂ 大小的ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因切下定向插入到表达质粒ｐＢＶ２２０ 的启动子ＰＲ、ＰＬ的下游,构建了该基因的原核表达载体ｐＢＶ－ ＳｔＶ。ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ凝胶电泳结果表明：ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因在大肠杆菌ＤＨ５α中经温度（４０℃）诱导后,可特异地表达３３ｋＤ蛋白。     

抗真菌蛋白Rs—AFPs基因克隆与序列分析

从开花后５０－９０ｄ的萝卜种子中提取总ＲＮＡ,逆转录合成ｃＤＮＡ第一链,通过ＰＣＲ反应,得到Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２基因扩增产物。采用Ｔ－载体克隆技术,将二分别插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ／ＥｃｏＲＶ－Ｔ克隆载体,得到重组质粒ｐＧＲ－１和ｐＧＲ－２用其转化宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α,从阳性菌落制备测序用质粒ＤＮＡ样品,在ＡＢ１３７０Ａ ＤＮＡ测序仪上测序。     

大豆Gy1基因种子特异性表达载体的构建及在玉米中的转化

实验构建了2个大豆贮藏蛋白Gy1基因种子特异性表达载体,并将其分别转入玉米愈伤组织中。载体1以潮霉素为筛选标记,将Gy1基因片段插入到含有种子特异启动子的植物表达载体pCAMBIA1301-7αP上,得到种子特异性表达载体pCAMBIA1301-7αP-Gy1;载体2以BADH为筛选标记,将Gy1基因插入到带有耐盐基因BADH的植物表达载体pCAMBIA1301-BADH上,得到安全性无抗生素选择标记的种子特异性表达载体pCAMBI-A1301-sbeⅡb-Gy1。通过农杆菌介导法将其分别导入玉米自交系H99的愈伤组织中,共获得132株再生植株;经过PCR检测,初步证明获得了34株转基因阳性植株。     

结构与功能比较研究

启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油８２１ 中分离到油菜基因ＮａｐＢ和ＦＡＥ１的上游启动子序列ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１,其中ｐＮａｐＢ长１１３６ｂｐ,ｐＦＡＥ１长１４２０ｂｐ。 两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括ＲＹ重复、Ｇ－ｂｏｘ和Ｅ－ｂｏｘ等,但两 种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１两个启动子分别与报告基因ＧＵＳ融合并通过农杆菌 介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对Ｔ１代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表 达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间 和空间分布以及作用强度明显不同。ｐＮａｐＢ启动子比ｐＦＡＥ１作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比 ｐＦＡＥ１强,但ｐＦＡＥ１启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的ＧＵＳ染色深度在两种启动子间差别不大。     

油菜种子特异表达启动子ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１的 结构与功能比较研究

启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油８２１ 中分离到油菜基因ＮａｐＢ和ＦＡＥ１的上游启动子序列ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１,其中ｐＮａｐＢ长１１３６ｂｐ,ｐＦＡＥ１长１４２０ｂｐ。 两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括ＲＹ重复、Ｇ－ｂｏｘ和Ｅ－ｂｏｘ等,但两 种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１两个启动子分别与报告基因ＧＵＳ融合并通过农杆菌 介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对Ｔ１代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表 达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间 和空间分布以及作用强度明显不同。ｐＮａｐＢ启动子比ｐＦＡＥ１作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比 ｐＦＡＥ１强,但ｐＦＡＥ１启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的ＧＵＳ染色深度在两种启动子间差别不大。     

基因枪介导甘蔗遗传转化研究初报

将从灰树花（Grifola frondosa）中分离克隆到的海藻糖合酶cDNA以正向插入植物表达载体pBI121/BamHI Sst1位点，获得一植物表达载体pBT；又用Ubi-L启动子插入植物表达载体pBI121/HindⅢ＋Xbal位点，获得重组质粒pUB,再把海藻糖合酶cDNA正向插入pUB/BanHI SstI位点，获得另一植物表达载体pUBT。然后通过基因枪法分别用植物表达载体pBT和pUBT转化甘蔗。再生植株的点杂交和PCR－Southern杂交表明海藻糖合酶基因已整合进甘蔗的基因组中。     

转γ-生育酚甲基转移酶基因大豆的获得

以大豆子叶节为外植体,利用γ-生育酚甲基转移酶基因(γ-TMT)的种子特异性表达载体p7S-TMTL,通过农杆菌介导法转化大豆,获得26株抗卡那霉素再生植株.PCR检测结果表明其中4株为阳性,初步证明γ-TMT已整合到这4株大豆的基因组中.