巴西橡胶树花药体细胞胚形成中乳管分化的研究

培育数量多、质量好的体细胞胚是当前巴西橡胶树花药组织培养的主要研究目标,而对于体细胞胚发育过程中是否有乳管分化目前尚不清楚。以不同发育阶段的正常体细胞胚以及不同形态的畸形胚为材料,对它们的乳管分化情况进行了研究。结果表明,球形胚、心形胚和鱼雷胚中都没有乳管分化,最早出现可辨识的乳管是早期子叶胚,而不同形态的畸形胚都有乳管分化。本研究为深入研究乳管分化的机制提供了基础。     

巴西橡胶树的次生体细胞胚胎发生—— 一种新的长期性体细胞胚胎发生诱导方法

在橡胶树中,以未成熟种子的内珠被为外植体通过其胚性愈伤组织的继代增殖可以持续不断地诱导体细胞胚胎,该方法称为持久体细胞胚胎发生(Maintained Somatic Embryogenesis,MSE)。然而,直接利用内珠被组织诱导易碎型胚性愈伤组织系不但频率很低,而且迄今仅无性系PB260和RRIM703能够藉此途径实现体细胞胚胎的长期诱导。本研究以体细胞胚胎为外植体成功诱导和建立可增殖胚性愈伤组织系。组织学分析显示,体胚外植体切口边缘表皮及周维管细胞脱分化导致易碎型胚性愈伤组织的产生。所获愈伤组织经继代增殖和筛选最终得以建立胚性愈伤组织系。该新方法被称为间接次生体细胞胚胎发生(Indirect Secondary Somatic Embryogenesis,SSE)。我们还就体胚及内珠被2种外植体诱导胚性愈伤系的潜力进行了深入比较。结果表明,采用体胚外植体诱导胚性愈伤组织系其频率明显高于内珠被外植体。除了PB260和RRIM703之外,我们通过SSE途径还成功建立了无性系PB217的胚性愈伤组织系,而该无性系之前一直难以用MSE法获得其胚性愈伤系。此外,采用SSE法建立胚性愈伤系所需继代培养的次数也大为减少。对于不少仅实现初生体细胞胚胎发生的无性系而言,该方法无疑为其长期性体胚发生的诱导开辟了一条新的途径。     

影响橡胶体细胞胚蒸发成植株的几个因素

研究了培养基组份对橡胶体细胞胚萌发成植株的影响，结果表明，改良Ｍｓ基本培养基的大量元素无机盐浓度减少至７０％，蔗糖用量为３％￣４％，附加成份ＧＡ３为０．５￣１ｍｇ Ｌ，ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ，可促进体细胞胚的萌发，提高植株的再生频率。     

甘薯体细胞胚发生的研究进展

甘薯体细胞胚发生的研究进展严寒静，谈锋（西南师范大学生命科学系６３０７１５）甘薯由于遗传上的高度杂合性和广泛存在的不亲和性，使得应用生物技术进行遗传改良具有特别重要的意义。利用体细胞胚胎发生来建立甘薯高频植株再生系统和开发利用人工种子的研究，是这方面...     

橡胶树体胚发生过程中的生理生化特性

以巴西橡胶树花药为外植体,研究了巴西橡胶树花药体胚发生过程中抗氧化酶活性和某些生理参数的变化。结果表明,橡胶树花药体胚发生过程中,SOD活性变化表现在培养30 d达到最高值,而后下降平缓;丙二醛(MDA)含量在第60天达到最高。生理参数的变化表现为可溶性蛋白含量0 d含量最高,可溶性糖的含量在50 d达到最高,据此认为,SOD和MDA对橡胶树花药体胚的诱导起主导作用,可溶性蛋白含量与不定芽的发生密切相关。     

巴西橡胶树花药体胚发生类型及其培养条件的改良

橡胶树花药培养体胚发生率低及植株再生频率低是制约其组培苗工厂化生产的瓶颈。以热研7-33-97品系花药为外植体,研究橡胶树花药体细胞胚发育过程并对其体细胞胚进行系统分类,同时改良其培养条件。结果表明,完整的体胚发育过程是球形胚-心形胚-鱼雷胚-子叶胚,但有些心形胚不能进一步发育成鱼雷胚,在后继培养中会分化成畸形胚;体胚发生不具同步性,在鱼雷胚旁又长出次生胚。胶树花药体细胞胚共分9种类型,发现胶树花药体胚发生过程中产生连体胚现象,该类胚能正常发育成植株。不同胚状体培养条件对植株再生率的影响说明,暗培养诱导胚状体2个月后再转移至500 lx弱光照条件下培养10～15 d,然后再转移至出苗培养基培养,能够显著提高植株再生率。在诱导胚胎发生培养基中添加不同浓度的稀土,结果表明,稀土具有提高橡胶树花药体胚发生率的效果,其中以添加1 mg/L稀土培养效果最佳。     

巴西橡胶悬浮细胞培养胚胎发生与植株再生

研究结果表明,把２％的甘油加入到悬浮培养基中,能提高胚胎发生的频率;在悬浮培养基和固体诱导培养基中分别加入浓度为１．０ｍｇ／Ｌ和０．２ｍｇ／Ｌ的２,４-Ｄ能促进胚胎的发生;在固体培养基中添加ＡＢＡ有利于正常胚状体的形成;高浓度的谷氨酰胺对胚状体成苗培养有明显的促进作用。     

抗生素对巴西橡胶树花药愈伤组织生长与分化的影响

将巴西橡胶树花药胚性愈伤组织接种到添加不同浓度的羧苄青霉素、头孢霉素和特泯丁3种抑制农杆菌生长的抗生素培养基上,结果表明：除500mg/L特泯丁抑制胚性愈伤组织生长但促进体胚发生,其它抗生素均为促进愈伤组织生长但抑制体胚发生。潮霉素、卡那霉素和巴龙霉素3种筛选抗生素均抑制愈伤组织生长和体胚发生,三者抑制能力顺序为潮霉素〉卡那霉素〉巴龙霉素,但潮霉素完全抑制了体胚发生,而巴龙霉素则与对照相似即对体胚发生几乎没有抑制作用。故特泯丁可以作为农杆菌介导巴西橡胶树花药愈伤组织遗传转化的抑菌抗生素,500mg／L使用浓度效果较好,卡那霉素作为筛选抗生素,50mg／L使用浓度效果较好。     

橡胶树花药愈伤组织继代培养与胚状体发生能力研究

利用橡胶树花药愈伤组织进行继代培养与胚状体诱导,结果表明,在诱导愈伤组织、继代培养和分化胚状体中MS培养基稍优于改良MS培养基;以继代1代的愈伤组织胚状体的诱导率最高,分别达到70．8％和67．5％;在继代0代、2代和3代之间差异达到极显著,在继代4代时差异达到显著,其他继代次数之间差异不显著。在继代8代后,两种培养基的诱导率逐渐升高,分别达到44．6％和35．3％。     

橡胶树次生体胚发生及其再生植株遗传稳定性的分子检测

以热研7-33-97花药为材料,建立橡胶树次生体胚发生和植株再生体系,主要包括初生花药体胚诱导、次生体胚发生和次生胚植株再生三个步骤.结果表明,来自花药初生异常胚和初生子叶期胚的0.2～0.3 cm胚块均能成功诱导次生体胚发生,并均能获得成熟子叶期胚.以初生异常胚为外植体,每个胚块获得子叶期胚数为0.64个.以初生子叶期胚为外植体连续3次诱导次生体胚发生,随诱导次数增加,体胚发生频率先上升,后保持稳定.2,4-D对次生体胚植株再生具有明显影响.添加4.5 μmol/L和9 μmol/L 2,4-D植株再生培养基中植株再生频率达到85.0%.AYLP检测次生体胚植株遗传稳定结果显示:(1)来自初生异常胚的次生体胚植株60.0%植株DNA发生变异;(2)来自初生子叶期胚的次生体胚植株,随次生体胚发生次数增加,检测到DNA变异植株频率由30.0%升高到52.4%.AFLP聚类分析结果显示,次生体胚植株与热研7-33-97高度相似,相似系数大于0.904.     

橡胶树次生体胚植株染色体数目和DNA含量分析研究

遗传稳定是离体繁殖植物种苗的关键。本研究利用染色体制片和流式细胞术,对1～10个增殖世代的次生体胚植株的染色体数目及DNA含量进行了分析,发现1～10个增殖世代的次生体胚植株染色体数目以2n＝36为主,且DNA含量与芽接无性系相同,说明1～10个增殖世代的次生体胚植株在染色体水平保持遗传稳定。     

橡胶树死皮病的分子生物学研究进展

橡胶树死皮(tapping panel dryness, TPD)是一种复杂的生理综合症,其发生和发展机理十分复杂。随着分子生物学的快速发展,从分子角度来研究死皮病已有一些报道。本文归纳总结近些年来橡胶树死皮病在分子生物学方面的研究工作,为进一步开展死皮研究及揭示死皮发生的分子机制提供理论参考。     

巴西橡胶树胚性组织长期继代保存及增殖技术

在橡胶树花药组织培养过程中,利用胚诱导过程后期产生的不同生理阶段的胚性组织进行继代增殖和成胚性研究,试验表明:1)心形胚及前期的胚性组织能继代增殖,多次继代增殖后的组织,经胚诱导过程1~3个月能成倍形成鱼雷胚,大大提高了橡胶花药组培的成胚率;2)胚性愈伤是适合长期继代和增殖保存的最好材料,经2a的继代保存增殖率和成胚率不下降,其最大继代增殖能力还在测试中;3)在继代增殖培养基上,胚性组织按原有形态增殖,通过选取同一生理阶段的胚性组织进行继代,可控制体胚发育过程,促进体胚发育同步进行。     

可可体细胞胚胎发生及植株再生体系的构建

以可可（TheobromaCac0L.）的子叶为外植体,通过体胚发生途径,诱导再生可可植株。各培养阶段的优化培养基和培养条件为∶（1）愈伤组织诱导培养基（PCG）∶改良DKW+2,4-D3.0mgL+KT1.0mg几+TDZ 0.01mgL,在28+2）℃（以下培养温度均同）温度条件下,暗培养20d,诱导率为96.67%;（2）愈伤组织增殖培养基（SCG）∶改良DKW＋2,4-D 3.0mgA+KT1.0mg九,暗培养20d;（3）胚状体诱导培养基（ED）∶改良DKW+Sucrose30gL,暗培养60~150d,胚状体诱导产生并发育成熟,胚状体的诱导率为333%;（4）成熟胚诱导成苗∶①PEC培养基为∶改良DKW+Ghrose20gl+Sucrose10gL,光照为16h/d,培养60d;②采用RD培养基∶改良DKW+BA1.5mgl+AA0.5mgl,光照为16h/,培养3090d后,可得到完整的植株,再生植株的诱导率为 42%。     

橡胶树乳管切割后的堵塞研究

用光学和电子显微镜技术研究了巴西橡胶树幼茎切割后乳管的堵塞。发现在切割后乳管伤口有一个由蛋白质物质组成的网，它与絮凝的橡胶粒子将乳管伤口堵塞。组成这个网的蛋白质物质主要来自黄色体的内含物，特别是微纤维。讨论了这种蛋白质网在乳管切割后堵塞中的作用。