外源DNA直接导入大豆的研究

本文报道了在大豆自花授粉后,利用其形成的花粉管通道,将外源DNA直接导入栽培大豆的研究结果。 通过对10组大豆实验材料进行外源DNA导入的结果看出:转化的后代主要表现在熟期、株型、花色、种皮包、百粒重和蛋白质含量的变异;变异的D_2代单株或株系的过氧化物同功酶酶谱和酶活性显示了明显的差异,其中发生“疯狂分离”的单株,其酶带显示不规律;表型变异不明显而蛋白质含量高于受体的8701组合的D_2代各株系,其酶活性明显增强,并主要表现在A_1和B区。 实验结果表明:外源DNA片段直接导入受体植物卵细胞、合子或早期胚细胞,部分片段可以被受体细胞DNA整合和表达。还表明:利用花粉管通道途径来实现外源DNA直接导入大豆,进行大豆种质创新和品质改良也是可能的。     

大豆外源DNA导入后代的异柠檬酸脱氢酶酶谱分析

采用淀粉凝胶电泳的方法，对利用外源总ＤＮＡ导入栽培大豆的变异后代异柠檬酸脱氢酸（ＩＤＨ）酶谱进行了分析，结果表明：酶谱谱带清晰，呈现Ａ、Ｂ、Ｃ三种类型。后代与受体及供体间谱带存在差异，有些后代的同工酶谱带中含有供体的特异带，说明供体的ＤＡＮ片段已整合到受体基因组中，并得到了表达。     

外源基因导入小麦引起的生化特性变化

将外源豌豆 DNA直接导入普通小麦中 ,结果发现变异小麦的籽粒蛋白质构成及过氧化物酶 (POD)、酯酶 (EST)、超氧化物歧化酶 (SOD)同工酶谱带发生了不同类型的广泛变异 :超大穗变异株系 M1 新增加了高分子量麦谷蛋白亚基 86 ku和 80 ku组分 ,相反 ,中国春变异株系 C消失了高分子量麦谷蛋白亚基 92 ku和 82 ku组分 ,它们的中分子量蛋白区亚基带染色程度也分别产生了明显的加深和减弱变化 ;同工酶不同程度出现差异谱带、酶带缺失、酶活性增强或减弱的显著变化。表明受体发生广泛变异可能是外源基因导入、基因杂合、基因互作与外源 DNA片段“重组插入”效应共同作用的结果     

亚麻外源DNA导入后代的过氧化物酶同工酶分析

本文讨论了亚麻过氧化物酶同工酶酶谱分析的适宜方法，在此基础上对利用花粉管通道技术进行的亚麻外源ＤＮＡ导入后代进行了过氧化物酶同工酶酶谱分析。结果表明：ＤＮＡ导入后代与其受体的酶谱差异明显，主要表现为酶谱带数的不同和谱带染色深浅的差异。由此表明外源ＤＮＡ片段（或基因）已整合到受体基因组中，并得到表达。     

离子束介导大豆DNA小麦变异株系幼苗不同部位蛋白水解酶和过氧化物酶分析

为分析离子束介导大豆DNA获得的小麦高蛋白、低蛋白和雄性不育变异株系中性蛋白水解酶和过氧化物酶的变化,采用复性电泳技术对变异株系幼苗的根系、叶鞘和叶片进行了分析.结果显示:(1)在根中检测到的蛋白水解酶带型差异较大、酶活性强;高蛋白变异株系中检测到28、45、55和100 kD四条新带;在雄性不育变异株系中检测到113 kD一条新带;在叶鞘中,所有的变异株系都没有检测到100 kD的酶带.(2)过氧化物酶在根中检测的酶带数较多、酶活性强;在低蛋白变异株系的叶片中检到31 kD一条新带;在叶鞘中,对照和变异株系间酶活性也有一定的差异.(3)小麦幼苗期蛋白水解酶和过氧化物酶从叶片到根系酶带增多、活性增强.由此推测,外源大豆DNA导入受体后某些片段可能插入受体基因组,导致基因突变或受体基因表达发生改变.     

亚麻外源DNA导入后代的过氧化物酶同工酶分析

本文讨论了亚麻过氧化物酶同工酶谱分析的适宜方法，在此基础上对利用花粉管通道技术进行的亚麻外源ＤＮＡ导入后代过氧化物酶同工酶酶谱分析，结果表明：ＤＮＡ导入后代与其受体的酶谱差异明显，主要表现为酶谱带数的不同和谱带染色深浅的差异。由此表明外源ＤＮＡ片段（或基因）已整合到受体基因组中，并得到表达。     

外源DNA导入大豆其后代的同工酶酶谱分析

采用聚丙稀酰胺凝效电泳的方法，对通过外源ＤＮＡ导入法所获的大豆变异后代，进行过氧化物酶和酯酶的酶谱分析。其结果是酶谱带清晰，变异后代与亲本的谱带有明显差异，并与该材料的表型性状相一致。因此，我们认为可以用同工酶分析法做为鉴定外源ＤＮＡ导入大豆的生化指标之一。     

利用淀粉凝胶电泳技术鉴定外源DNA导入后代

利用淀粉凝胶电泳技术，对外源ＤＮＡ直接导入栽培大豆的变异后代，进行了磷酸己糖异构化酶（ＧＰＩ）、异柠檬酸脱氢酶（ＩＤＨ）和葡糖磷酸变位酶（ＰＧＭ）的同工酶酶谱分析。实验结果表明：将向日葵的ＤＮＡ导入栽培大豆后，三种酶的谱带清楚，后代与受体及供体间谱带存在差异。有的出现了供体特异带，有的出现了供体和受体所不含有的新型带，有的酶谱带加强或减弱，这说明外源ＤＮＡ已导入到受体基因组中，并在不同程度和不同方式上得到了表达。     

甘蔗近缘植物DNA导入甘蔗方法研究初报

本试验将甘蔗近缘植物陇川割手密（Sacharum Spontaneum）DNA提取液分别以共培养导入法和基因枪导入法导入到桂糖11号的胚性细胞内，然后分化培养成苗。对两种DNA导入法转导植株表现型及其变异株系的过氧化物酶同工酶谱分析表明：两种DNA导入法的T1、T2代转导植株表现型变异率均与对照有明显差异，其中基因枪导入法获得的转导植株其T1、T2代植株表现型变异率高于共培养法，获得变异的稳定性较高，共培养法T2代替株变异株系的过氧化物酶同工酶谱与对照桂糖11号的安全一致，而基因枪法T2代植株变异株系的过氧化物酶同工酶谱与对照有差异，在B区有两条新的酶带，迁移率大于第10号带，其中一条的迁移率与割手密的4号酶带相似。     

外源DNA直接导入水稻的研究初报

应用花粉管通道法、种子浸渍法及孕穗期茎注射等方法，将玉米等外源供体DNA直接导入水稻品种中，其后代在生育期、株高、穗数、粒数及粒重等主要性状方面都产生了明显的变异。本文初步报道了用普通栽培水稻盐粳10号为受体，玉米黑307为供体将其DNA经孕穗期茎注射法导入后得到的变异株系及花粉管通道法、种子浸渍法后代的变异情况。     

外源DNA导入大豆变异后代的SOD同工酶分析

以花粉管通道途径向大豆导入外源DNA,变异后代已达D_4代。 受体为栽培品种吉林20号、吉林16号;供体足野生豆、半野生豆和栽培豆。从439个D_1植株中得12株变异株,变异率为3％。变异性状明显表现供体特征,并且是可遗传的。超氧物歧化酶(SOD)同工酶电泳鉴定,在有的变异株中检测到供体具有的亚基谱带b_1、b_2。结果表明,外源DNA导入技术在大豆育种上是可以利用的。     

燕麦DNA导入普通小麦的初步研究

以健壮燕麦（Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）为供体,宁春４号小麦为受体,采用花粉管通道法进行外源ＤＮＡ导入。结果表明,变异株系在生育期、株高、穗长、结实小穗数、千粒重等性状上产生了明显的变异;酯酶和过氧化物酶同工酶谱带数与受体相比增加或减少,叶绿素含量和瞬间光合速率偏向供体或受体;并筛选到对小麦条锈病免疫或高抗的部分变异株,表明燕麦ＤＮＡ已导入到小麦中,并得到表达。     

利用淀粉凝胶电泳技术外源DNA导入后代

利用淀粉凝胶电泳技术，对外源ＤＮＡ直接导入栽培大豆的变异后代，进行了磷酸己糖异构化酶、异柠檬酸脱氢酶和葡萄磷酸位酶的同工酶酶谱分析。实验结果表明：将向日葵的ＤＮＡ导入栽培大豆后，三种酶的谱带清楚，后代与受体及供体间谱带存在差异。     

芸豆和玉米总DNA导入大豆及后代同工酶酶谱分析

本文报道了利用花粉管能道技术,将芸豆、玉米的总ＤＮＡ导入大豆的实验结果及采用不连续双垂直板聚丙烯凝胶电泳法,对其导入后代进行过氧化物酶及多酚氧化酶的酶谱分析。结果表明：远缘材料的外源总ＤＮＡ导入大豆,其后代发生明显变异,过氧化物酶和多酚氧化酶酶谱发生了变化,说明了外源遗传物质已转移到大豆基因组中,并且得到表达。     

离子束介导大豆DNA的小麦变异株系蛋白水解酶谱分析

为研究离子束介导大豆DNA的小麦变异株系在返青期、起身期和拔节期的蛋白水解酶变化．采用复性电泳对新乡9号和筛选出的高蛋白变异株系05—10-1和低蛋白变异株系05—6-1，做不同酸碱条件下的蛋白水解酶分析。结果显示．与对照相比。变异株系05-6—1在返青期酸性条件下少检测到一条29kD酶带；在起身期中性和碱性条件下少检测到一条49kD酶带：在拔节期碱性条件下多检测到一条154kD新酶带．而少检测到158kD的酶带：而变异株系05～10—1在这3个生理时期和对照的蛋白水解酶酶谱带型基本一致．主要在某些酶带的酶活上存在差异。     

远缘物种DNA导入水稻保持系的种质创新及SSR分析

将小粒野生稻(Oryza minuta)、高粱的DNA分别导入水稻保持系V20B和IR58025B,在第1代(D1)获得变异,从前者变异株的后代中选育出了新的不育系及其保持系株系野威A和野威B,而高粱DNA导入IR58025B获得的变异系从D2开始在形态上已不出现分离.SSR分析表明,变异系野威B、香粱5均与受体存在遗传多态性,并含有供体特异的分子标记带型.首次从分子水平上证明,通过导入外源DNA获得的变异株确实存在无分离的现象.说明导入远缘物种DNA是创造水稻新种质的有效途径.     

小麦单细胞再生植株后代染色体与DNA变异的初步研究

为了使体细胞无性系变异更好地应用于作物品种改良,以小麦单细胞培养再生植株后代为材料,研究了其染色体和DNA的变异.结果表明,再生植株后代与未经培养的亲本相比,花粉母细胞减数分裂染色体行为发生异常,终变期染色体数目和体细胞染色体数目发生变化,而且早期世代变异幅度大.但随着繁殖世代的增加,花粉母细胞减数分裂染色体行为和体细胞染色体数目的变化渐趋稳定,至第五代基本稳定.对农艺性状已稳定的再生植株第九代不同株系总DNA进行RAPD-PCR扩增,结果表明,不同株系与未经培养的亲本相比在DNA水平上存在变异,出现亲本特异性谱带缺失,该类株系表现为矮秆、早熟.     

珍珠粟DNA导入水稻的性状变异研究

为了探索水稻育种的新途径,我们自1986年以来,以花粉管途径为基础,对外源DNA导入水稻的方法进行了研究。为了提高处理样本的结实率及处理后代的变异频率与变异谱,先试验了“带入法”(选择水稻当日开放花朵直接注射外源DNA的方法),后又对水稻萌动种子与秧苗实行“浸渍法”处理。通过对处理后代各性状的分析,表明“浸渍法”导入外源DNA是一种简便高效的水稻分子育种途径。现将其方法及后代性状变异结果总结如下。     

低能离子束介导外源DNA转入小麦种胚中对小麦幼苗叶片蛋白水解酶酶谱的影响

利用低能离子束介导法将大豆DNA导入小麦种子胚中，通过复性电泳技术分析了受体小麦幼苗叶片中蛋白水解酶的变化，结果表明：（1）离子束介导大豆DNA片段的小麦幼苗叶片的蛋白水解酶酶谱有明显变化，出现45和280kD两条新的酶带；（2）小麦幼苗叶片中45和205kD蛋白水解酶的活性受环境影响较大；（3）68和72kD两条酶带在各处理的不同 pH条件下均具较强活性；（4）不同pH条件下蛋白水解酶酶谱变化明显。     

病毒病抗性不同的大豆品种及其F_1代过氧化物酶酯酶同工酶分析

本研究对大豆病毒病抗性不同的大豆杂交亲本及F_1代,接种SMV_1号株系后的过氧化物酶和酯酶同工酶的变化进行了分析。结果表明,抗病与感病亲本及其F_1代接种后的同工酶谱带存在着明显的差异。感病亲本及F_1代酶的活性增强,酶带数较多,而且部分酶带变宽,颜色变深。抗病亲本则不发生变化。各组合F_1代的酶谱与双亲有关,抗病×抗病的F_1代酶谱与双亲完全相同,抗病×感病的F_1代酶谱偏向抗性亲本,感病×感病的F_1代产生一个双亲所不具备的小分子新杂种酶带。未接种的感病亲本酶谱与抗病亲本相同。植株内部同工酶的变化与成株抗性相一致。因此,我们认为过氧化物酶同工酶,可作为鉴定大豆抗感病毒病的生化指标之一。