甜叶菊离体诱变与分子初检

以甜叶菊茎段为外植体,用不同浓度的 NaN3对其进行不同时间的处理,筛选出合适的离体化学诱变体系,并对该体系下的部分再生苗进行RAPD和SRAP检测。结果表明：NaN3处理的半致死剂量为9 mmol/L浸泡4 h,该处理下植株矮化、腋芽数减少;用2种分子技术对该处理下14株再生苗的进行检测,结果表明,共28.6％再生苗的DNA序列发生了一定程度的变异,这为使用NaN3对甜叶菊进行大规模的离体诱变奠定技术基础。     

蝴蝶兰NaN_3离体化学诱变及再生植株RAPD检测

采用NaN3对离体培养的蝴蝶兰类原球茎薄切片进行诱变处理,研究不同浓度和不同处理时间对类原球茎薄切片生长的影响,并对再生苗DNA进行了RAPD检测。结果表明,NaN3对类原球茎薄切片生长产生重要影响,部分薄切片白化或褐化死亡,再生类原球茎生长受到抑制,再生苗数量减少,部分再生苗畸变,叶片皱缩、变厚。10条RAPD引物的PCR检测发现,再生苗DNA序列发生了一定程度的变异,产生RAPD图谱带型多态性。根据以上结果认为,本体系合适的NaN3诱变剂量为6mmol/L,处理2d。     

甜叶菊多倍体离体诱导技术体系的建立

以甜叶菊茎段为外植体,用不同浓度的秋水仙素在试管苗茎段再生植株过程中进行不同时间处理,探讨适合于甜叶菊离体多倍体诱导的最佳秋水仙素处理时间和浓度,初步建立甜叶菊离体诱导多倍体的技术体系。结果表明,秋水仙素对甜叶菊植株形成影响较大,秋水仙素处理的最佳剂量为0.1%处理3 d,再生植株总数高且多倍体比率达42.3%;同时,再生苗生根也受到了一定影响;多倍体苗叶片厚实、颜色较深、植株矮化,气孔增大,单位面积气孔数较少;多倍体细胞核体积增大,染色体数加倍。     

低浓度秋水仙素离体诱导甜叶菊多倍体技术体系的建立

以甜叶菊茎段为外植体,采用不同低浓度秋水仙素在甜叶菊试管苗茎段再生苗初期进行长时间持续处理,以探讨低浓度秋水仙素诱导甜叶菊多倍体的优势及适合长时间诱导甜叶菊的秋水仙素浓度,简化甜叶菊离体诱导多倍体技术环节。结果表明:0.025%的秋水仙素浓度适合于甜叶菊多倍体离体诱导的持续诱变,直至试管苗再生而无需清洗外植体和更换培养基,简化了诱导技术环节,提高了甜叶菊多倍体离体诱导效率;多倍体植株田间农艺性状表现为叶片大而厚实、开花延迟、花蕾较大等特征。旨在建立低浓度秋水仙素离体诱导甜叶菊多倍体技术体系。     

火焰兰茎段侧芽离体再生及褐化的研究

以火焰兰的茎段为外植体，探讨不同植物激素配比对茎段侧芽萌发和生根壮苗的影响，以及不同培养基配方和不同添加剂对火焰兰生长过程中褐化现象的抑制作用。结果表明：最佳侧芽诱导培养基为MS＋6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.5mg/L，培养40 d，后诱导率可达97.95%；添加活性炭0.3 g/L可有效抑制侧芽诱导过程中的褐化现象，褐化率仅为13.17%；1/2 MS＋6-BA 0.2 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋AC 0.5 g/L生根效果最好，生根率达到100%，且植株生长健壮。利用火焰兰茎段侧芽能够离体再生获得瓶苗，建立高效的火焰兰茎段为外植体的离体再生体系，为扩大拓宽火焰兰组织培养外植体来源和快速繁殖技术提供技术支撑。     

叠氮化钠对花生丛生芽诱导的影响

花生幼芽叶节,用不同浓度的NaN3及不同的处理时间进行诱变处理.结果表明,外植体的成活率,丛生芽的诱导率均随NaN3浓度的提高及处理时间的增加而降低.NaN3用于诱发花生丛生芽变异的适宜浓度为200mg/L,处理时间为2h.     

甘蓝型油菜单倍体离体诱变及其效应的AFLP分子标记检测

以油菜小孢子培养得到的单倍体植株的离体组织作实验材料,诱导愈伤组织,获得生长良好的愈伤组织经不同剂量的60Co-γ射线辐射以后,部分分化成苗,对成苗单株进行AFLP分析,检测其诱变效应.结果表明茎段在附加有0.5mg/L 2,4-D和2mg/L 6-BA的MS培养基上能诱导出生长良好的愈伤组织;用3 000～4 000R辐射剂量对愈伤组织进行处理较为适宜;分子标记检测结果显示单倍体基因组在诱变过程中发生了不定向变异.     

花生胚小叶的离体再生及筛选压力选择

以花生胚小叶为外植体,优化离体再生条件,通过对再生苗进行筛选,为外源基因的遗传转化提供实验依据。研究表明,不同基因型胚小叶的再生能力差异显著,在供试基因型中中花8号不定芽诱导率和成苗率最高,且外植体状态最好。中花8号胚小叶再生的最佳诱导培养基为MSB + 6-BA（4.5mg/L）+NAA（1mg/L）+AgNO3（2mg/L）,最佳诱导培养时间为21d。对中花8号再生苗进行筛选浓度实验,草丁膦（PPT）为20mg/L时,可筛选出抗性苗;300mg/L的卡那霉素（Km）可用于较小幼苗筛选,而对较大幼苗则需将Km的浓度提高至400mg/L以上。     

大麦单粒种子起源的小孢子培养再生频率研究

为提高单株小孢子培养的再生效率,以大麦品种花30为材料,在人工气候室研究了离体穗、离体小花预处理时间和诱导培养基中无机氮、有机氮含量以及添加PEG对愈伤组织产量、绿苗产量和再生能力的影响。结果表明,离体穗5℃处理19 d的愈伤组织和绿苗产量及再生能力均优于32 d的,离体小花预处理1～2 d可促进愈伤组织的形成和绿苗的分化;降低无机氮浓度[KNO_3降至707.5 mg·L~(-1),(NH_4)_2SO_4降至115.75 mg·L~(-1)]可提高愈伤组织和绿苗产量及再生能力;提高有机氮浓度(谷氨酰胺从400 mg·L~(-1)提高到1 600 mg·L~(-1),水解酪蛋白从100 mg·L~(-1)提高到400 mg·L~(-1))可增加小孢子愈伤组织和绿苗产量;培养基中添加4%PEG可提高小孢子愈伤组织产量和质量。     

马铃薯四倍体栽培种茎段组织的EMS诱变研究

用1%的EMS溶液处理“中薯2号”试管苗茎段材料,通过对诱变材料再生过程的观察、再生苗试管培养观察及棚栽阶段的生理指标统计分析,研究了EMS对马铃薯四倍体栽培种茎段组织化学诱变的作用。试验结果表明:EMS能够有效渗入生长点细胞;经EMS处理后试管苗生长量显著小于对照,再生植株和组织器官发生变异;试验证实1%(v∶v)浓度EMS处理4h以上具有明显的诱变效应,可以应用于今后马铃薯诱变育种。     

香青兰的离体保存研究

以香青兰为试材,研究不同养分水平培养基,不同浓度甘露醇、多效唑及琼脂对试管苗离体保存的影响.结果表明:1/4MS培养基中试管苗前期存活率较低,但保存时间延长了4个月以上:甘露醇对试管苗的生长有抑制作用,可延长试管苗存活时间4个月；多效唑能促进香青兰试管苗侧芽分化,但对试管苗茎的伸长有明显抑制作用,其中浓度为2.0 mg/L时试管苗存活率最高,保存时间可延长4个月,保存至9个月时,存活率达到50％；MS培养基中附加琼脂浓度8.5～10.5 g/L为香青兰最佳离体保存方法,该条件下香青兰试管苗保存时间明显延长,保存12个月时存活率仍高达85 ％～60％,且试管苗恢复生长后长势良好,其再生后代的形态特征与对照株无差异.     

马铃薯试管苗“藕式”快速繁殖方法研究

传统的马铃薯脱毒苗切繁方法是将带有一个叶片的单茎节切段接种于培养基中培养成苗,本研究以马铃薯品种大西洋、无花的试管苗为材料,用剪去根部和顶芽的多茎节切段,接种于含有不同激素及配比的培养基中培养。结果表明,MS培养基附加1.0mg/L BA和1.0 mg/L的NAA,可使得每个腋芽萌发并快速生根、成苗,按照此程序继续进行继代扩繁,我们称之为"藕式"快速繁殖方法。该方法大大降低了成本,提高了效率。     

甘蔗健康种苗培育体系的建立

通过热处理、温热处理结合茎尖分生组织培养建立有效的甘蔗(Saccharum L.)健康种苗生产的技术体系。以经过热处理和温热处理的甘蔗带芽茎段萌生的腋芽为外植体,取其茎尖分生组织接种于MS BA1.0mg/L NAA0.1mg/L PVP200mg/L 蔗糖30g/L的培养基上培养10￣20d可诱导其产生完整的小芽,再把产生的新芽切割下来接种于MS 6BA1.0mg/L KT0.5mg/L 蔗糖30g/L的培养基上培养20d后便可形成由3￣5个芽组成的丛生芽,丛生芽在继代培养过程中每15￣20d可增殖3￣5倍。把丛生芽分割成单株并接种于1/2MS NAA1mg/L 蔗糖20g/L培养基上培养10￣20d可诱导小芽形成完整的根系,小植株移栽成活率可达98%。植株生长健壮、整齐、无变异,经分子检测证明小植株能脱去宿根矮化病和花叶病的病原。该体系的建立为甘蔗健康种苗的工厂化育苗奠定了坚实的基础。     

A Reexamination of the Effectiveness of Ribavirin on Eradication of Viruses in Potato Plantlets in vitro Using ELISA and Quantitative RT-PCR

The potato plantlets singly infected by PVA, PLRV, PVS, PVX and PVY and mix-infected by PVM, PVS and PVY were cultured on MS medium with different concentration of ribavirin. The effects of ribavirin on growth of the plantlets and efficiency of virus elimination were investigated. Results showed that the plant height and fresh weight obviously decreased with increase of ribavirin concentration from 0 mg/L to 150 mg/L, and most of the plantlets could not survive when the concentration reached 200 mg/L. According to the ELISA tests, ribavirin was more efficient for eradicating PVA, PVM, PVS and PVX than PVY and PLRV, and healthy plantlets could be obtained with high frequency (up to 100 %) by culturing with 75?~?150 mg/L ribavirin after 2?~?3 subcultures. Whereas, only 33?~?66 % PVY and PLRV infected plantlets were found to be virus-free after 3 subcultures with 75?~?150 mg/L ribavirin. The results of quantitative RT-PCR (qPCR) indicated that ribavirin could obviously reduce virus content in the plantlets. Except PLRV was detected positive after 3 subcultures with ribavirin, the healthy seedlings were obtained from infected stocks at the first or end of propagation and no viruses could be detected at the post-eradication stage. No apparent difference of genetic variation resulted from ribavirin treatment was found by SSR analysis between the control and the treated plantlets. All of these results above proved that ribavirin treatment in vitro was an effective method to eliminate viruses in the propagation of potato.     

龙竹的组织培养

以龙竹的幼枝节段作为接种外植体,采用从腋芽-丛生芽-完整植株的繁殖途径进行繁殖。结果表明:在MS+BA 2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+PVP 250 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上培养10-20 d可诱导其腋芽萌发,新芽接种于MS附加BA 2 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+CW 100 mL·L-1+蔗糖30 g·L-1的培养基上培养20 d可诱导形成丛生芽,丛生芽在继代培养过程中每20-25d可增殖3-5倍。把丛生芽接种于1/2MS+NAA2mL·L-1+IAA2mL·L-1+蔗糖20 g·L-1培养基上培养4周后可诱导形成完整的根系,小植株移栽成活率可达98％。该体系的建立为龙竹的工厂化育苗奠定了坚实的基础。      

赤霉素对不同甜叶菊品系主要农艺性状、糖苷含量及产量的影响

喷施不同浓度的赤霉素(GA)于4种不同类型的甜叶菊品系叶表面,考察外源激素处理对其主要农艺性状、糖苷含量及糖苷产量的影响。结果表明:(1)赤霉素处理组同对照组相比,处理后株高、节长显著增长,且节间伸长效果主要集中在茎秆中部,叶长显著变短、叶宽显著变窄,叶长宽比值增大,单株干叶产量下降;赤霉素处理间,表现出一定的浓度效应,即随着赤霉素处理浓度增大,表现出一定的株高增加,叶长、叶宽减小的趋势。(2)就提高植株糖苷含量而言,100 mg/L的GA处理(A1)提高了SR1型甜叶菊的RA苷的含量,100 mg/L和300 mg/L GA提高了SR3品系ST苷含量,300 mg/L GA提高了SR2品系ST苷含量。(3)就糖苷产量而言,由于各处理下其干叶产量均显著下降,最终导致所有GA处理中,除300mg/L的GA处理显著提高了SR2的ST苷产量外,其余GA处理均不利于甜叶菊RA或ST糖苷产量的提高。