大豆胚尖再生体系的优化及与子叶节再生体系的比较

研究了浸种时间、诱导时间、6-BA浓度3个因素对吉育91胚尖不定芽诱导的影响,并将优化的胚尖再生体系与子叶节再生体系进行比较。结果表明,浸种24 h最适宜胚尖不定芽的形成,不定芽诱导率可达到85.1%,平均芽数可达到4.9个;诱导培养48 h时不定芽诱导率及平均芽数较高,分别为84.2%和5.3个;诱导培养基中6-BA浓度为2.0～3.0 mg.L-1时,不定芽诱导及伸长状况最佳。除了生根率差异不显著外,吉育91胚尖再生体系在再生能力与培养周期上均显著优于子叶节再生体系,因此更适合作为遗传转化的受体材料。     

大豆子叶节和胚尖再生体系的比较及大豆SR1基因的遗传转化

以合丰23和合丰35的子叶节和胚尖为外植体,通过农杆菌介导对抗大豆疫霉根腐病基因SR1进行遗传转化。结果表明:合丰35胚尖和子叶节体系的出芽率(96.1%和79.1%)均显著高于合丰25(66.45%和74.4%);胚尖转化体系的平均再生周期(40 d)低于子叶节转化体系(68 d);在诱导培养基上培养20 d时胚尖转化体系的转化效率(96.1%)高于子叶节体系(77.8%)。以合丰35胚尖为外植体成功转化大豆抗疫霉根腐病基因SR1,共获得6株转基因植株。     

卡那霉素和草铵膦对不同基因型大豆胚尖不定芽诱导的影响

以合丰35、黑农44和吉林35的胚尖为外植体,分别考察了不同浓度的卡那霉素和草铵膦对不同基因型大豆胚尖不定芽诱导的影响。结果表明,不定芽诱导率合丰35和吉林35在卡那霉素100 mg.L-1时与对照差异不显著,黑农44在100 mg.L-1处理时显著低于对照;芽数吉林35在卡那霉素100 mg.L-1时显著低于对照并高于其他浓度,而合丰35与黑农44在100 mg.L-1时芽数与对照差异不显著;3种基因型大豆胚尖不定芽伸长均在卡那霉素浓度为100 mg.L-1时受到显著抑制。草铵膦浓度在0.2～1.2 mg.L-1时对合丰35和吉林35的芽数没有影响,但黑农44在1.0 mg.L-1时芽数开始显著低于对照;芽长合丰35、黑农44和吉林35分别在0.6、0.2和0.2 mg.L-1时显著低于对照。因此,合丰35、黑农44和吉林35的适宜卡那霉素的筛选浓度为100 mg.L-1,草铵膦浓度分别为0.6、0.2和0.2mg.L-1。     

大豆子叶节再生影响因素的研究

为了建立一个大豆子叶节高效再生体系用于大豆的遗传转化，选用10个东北主栽大豆品种（Glycine max(L.)Merr.）的子叶节作为外植体，研究了基因型、植物激素的浓度、超声波辅助处理时间…等6种影响大豆子叶节再生的因素。结果表明合丰35、合丰25、黑农40再生效率较高，平均每个外植体分化出的丛生芽数分别为6.69、6.32和5.98；确定了丛生芽分化阶段所需的BA浓度，合丰35、合丰25为1.5mg/l，黑农40为1.2mg/l。适宜的外植体大小为保留全部子叶。作为遗传转化时的除菌剂，头孢唑啉钠（Cef）在500mg/l时对子叶节的再生无显著影响。当遗传转化时使用的超声波辅助处理时间小于12秒时，对子叶节再生无显著影响。     

大豆子叶节对潮霉素敏感性研究

标记基因的利用是筛选和鉴定转基因植株的有效方法,使用潮霉素能抑制植物的生长.选用3个基因型大豆为材料,以褐化率、分化率为指标,研究了不同质量浓度潮霉素对大豆子叶节分化和丛生芽生根的影响.结果表明不同基因型大豆对潮霉素的敏感性不同,潮霉素对大豆子叶节适宜筛选浓度黑农35为6 mg·L-1、合丰35和合丰25为4 mg·L-1;丛生芽生根筛选浓度黑农35为2 mg·L-1、合丰35和合丰25为1 mg·L-1.     

大豆体细胞胚的诱导及对草甘膦耐性的研究

以大豆未成熟子叶为外植体,研究合丰25、吉林35、吉育91对未成熟子叶体细胞胚诱导率的影响,并探讨3种基因型大豆未成熟子叶对草甘膦的耐性。结果表明:3种基因型的愈伤组织诱导率均为100%,体细胞胚诱导率为53.95%～72.12%,平均胚数吉育91高于其它2种基因型。3种基因型的体细胞胚诱导率在草甘膦浓度间存在差异,在大豆以未成熟子叶为受体转基因时,诱导体细胞胚胎发生的草甘膦筛选浓度为2.5～5.0 mg.L-1。     

大豆不定胚悬浮培养基因型筛选及基因枪遗传转化的研究

对32个不同基因型大豆的幼胚进行不定胚诱导,30 d时统计分析初生胚诱导率、次生胚诱导率和诱导效率,经综合比较得出适合体细胞诱导不定胚的4种基因型为L155、垦丰16、绥农25和吉育91。然后以不定胚诱导率较高的L155为材料建立大豆悬浮培养不定胚繁殖体系,并用基因枪轰击的方法将GUS表达盒片段转入不定胚细胞团。X-gluc染色后显微观察到基因蓝色产物,说明GUS基因通过微弹轰击法导入大豆不定胚细胞并表达。     

大豆子叶节再生中植物生长调节剂浓度及基因型筛选

以黑农35为实验材料,对大豆子叶节再生过程中种子的灭菌方法、萌发培养基中植物生长调节剂的浓度、丛生芽分化、生根培养与驯化等过程中植物生长调节剂的浓度进行研究,确定了大豆组培过程中最适合的种子灭菌方法是氯气灭菌法,确定了萌发培养基中的6-BA浓度为2mg/L,丛生芽分化培养基中6-BA浓度为1.70mg/L,GA3浓度为0.5mg/L时,分化率最高（78.1%）生根培养基中添加0.37mg/ LNAA更适合根的生长。采用此方法对北方37个主要栽培大豆品种进行了基因型筛选,确定了合丰25、黑农35、合丰35、绥农10、绥农14等5个比较适合的大豆基因型。     

大豆下胚轴不定芽对卡那霉素和氯化钠耐性的研究

为探讨不同基因型大豆对卡那霉素和NaCl的耐性,以大豆黑农44、合丰35和淮豆9号的下胚轴为外植体,分别研究了不同浓度的卡那霉素和NaCl对不同基因型大豆下胚轴不定芽形成的影响.结果表明:大豆不同基因型对卡那霉素和NaCl的耐受性不同,且在伸长培养42 d时随卡那霉素和NaCl浓度的增加,不定芽诱导率、芽数和芽长均显著降低;黑农44、合丰35和淮豆9号卡那霉素的筛选浓度分别为100,150,100 mg·L-1,NaCl的筛选浓度分别为100,100,75 mmol· L-1.     

农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化技术流程及操作要点

大豆遗传转化效率低,是大豆转基因育种亟待解决的重要问题。以大豆子叶节为外植体采用农杆菌介导法,系统地研究了大豆子叶节遗传转化各技术环节的操作要点,包括工程菌液制备、无菌苗获得及外植体制备、农杆菌的侵染及共培养、不定芽诱导、不定芽伸长、根诱导、驯化与移栽、抗性植株的获得及转基因植株的检测等,建立了一套较稳定、高效的大豆子叶节遗传转化体系。并利用该体系,将野生大豆耐盐碱相关基因A1对大豆品种绥农28、合丰50、合丰55、东农50进行遗传转化,系统地探讨了大豆基因型、影响T-DNA的转移效率的各环节、筛选剂浓度及不同基因型转化效率等几个重要因素。     

6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响

以吉林35、吉林47等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对丛生芽诱芽率和平均芽数的影响,同时测定吉林35在胚尖诱导丛生芽的过程中对潮霉素的耐受性.结果表明:3.0 mg·L<,-1>6-BA浓度下吉林35的诱芽率最高,综合考虑丛生芽诱芽率和平均芽数2个性状,吉林35更加适合于大豆胚尖再生系统;在遗传...     

大豆胚尖再生体系的研究

以吉大豆1号、2号等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对不同基因型胚尖丛生芽诱芽率和再生率的影响,筛选得到适合于胚尖再生系统的基因型吉大豆2号,并以吉大豆2号为材料,研究侵染阶段加入脯氨酸和硝酸银对胚尖褐化率的影响,将获得的再生植株进行生根试验.结果表明:共培养基中添加3.0 mg·L-1脯氨酸和3...     

大豆子叶节植株再生体系的研究

以大豆品种"辽豆17"、"辽豆18"和"辽豆23"子叶节为外植体诱导不定芽的发生.结果表明:随着培养基中6-BA浓度的增加,每块外植体上不定芽的数量呈增加的趋势,当向1/2MSB培养基中添加0.05 mg·L-1IBA和4.0 mg·L-16.BA时,不定芽的诱导率最高.比较不同的外植体获得方法,保留半片子叶的外植体诱...     

PCR-ELISA法对大豆品种的转基因定性检测研究

以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增,对PCR扩增的固相和液相产物分别进行杂交和凝胶电泳检测的PCR-ELISA法,对黑龙江省常规选育品种合丰35和黑农37、外源DNA直接导入大豆的分子育种所获品种黑生101、及大连进口的美国2号等大豆,进行转基因定性检测.结果表明:该方法高效可靠,可作为一种快速定性检测转基因产品的方法;检测结果:美国2号为转基因大豆,黑生101、合丰35和黑农37为非转基因大豆.上述结果对分子育种、生态保护、安全监测及对建立黑龙江省非转基因大豆生产保护区等具有重要意义.     

大豆加工品质的资源筛选和遗传改良的研究Ⅱ.豆腐、酱油、毛豆大豆加工原料的筛选

以不同生态区的主栽品种和改良创新的品种为试材,分别对其糖份和球蛋白含量进行研究,结果表明:1.7S含量大于30%的品种有合丰25、合丰43、哈交20-5022、哈交20-5489、哈交20-5651-3、哈交99-5657、哈交99-5138、黑农45、黑农44、哈交20-5214,其中黑农45的7S球蛋白含量最高.2.11S含量大于70%的品种有黑农37和哈交20-51004.3.哈96-3是一个理想的菜用大豆新种质,黑农37是制作酱油加工原料的好品种.4.大豆品种中糖份与脂肪含量间的关系为正相关,与蛋白质之间成不显著的负相关.     

大豆子叶节丛生芽的诱导研究

选用吉大豆1号、吉大豆2号、吉林47和东农42共4个基因型的大豆子叶节作为外植体进行离体再生,筛选出丛生芽诱导率较高的大豆基因型吉林47。在此基础上,以吉林47的大豆子叶节为外植体,研究了外植体消毒时间、发芽时间和条件对大豆子叶节再生的影响,并设计正交试验对芽诱导及伸长阶段的激素配比进行了研究。得出吉林47较适合氯气灭菌时间为6～10 h,最适萌发条件为16 h光+8 h暗光周期条件下培养5～7 d。最终确定芽诱导阶段添加6-BA浓度为2 mg.L-1、IBA浓度为0.1 mg.L-1;14 d后继代伸长阶段添加IAA浓度0.3 mg.L-1、GA浓度为0.5 mg.L-1。     

大豆子叶节、胚尖再生植株的研究

为了获得高效的大豆再生体系,以大豆品种合丰35和北京小黑豆的成熟种子为材料,利用氯气和升汞两种消毒方法,研究不同浓度6-BA和2,4-D对子叶节和茎出芽的影响.结果表明:在大豆萌发时,加入1.0 mg L-1 6-BA和2.0 mg L-2,4-D,每个外植体分化的芽数较高;在茎尖再生系统中,6-BA和2,4-D诱导茎尖不定芽形成的最佳浓度是3.0 mg L-1和3.5 mg L-1,最佳诱导时间是24-48 h.     

大豆品质的形成和籽粒糖代谢关键酶活性

以红丰9、合丰46、黑农38、垦丰5、合丰25和黑农42 6个大豆品种为材料,分析蛋白质和脂肪的含量变化过程.从中选取红丰9、垦丰5和黑农42 3份材料,测定籽粒6.磷酸葡萄糖脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶和异柠檬酸裂解酶的活性.旨在了解上游物质和能量调配对大豆品质形成的影响.结果表明:蛋白质和脂肪的积累规律相似.脂肪积累鼍变化与6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性强弱变化趋势相同,但脂肪含量变化较酶活性变化延迟一些.异柠檬酸脱氢酶和异柠檬酸裂解酶活性和变化趋势影响着蛋白质合成和积累.