花生网斑病原菌孢子差异及其致病力分析

花生网斑病（peanut web blotch），由花生亚隔孢壳菌（Didymella arachidicola）引起，病原菌又称花生茎点霉（Phoma arachidicola）或派伦霉（Peyronella arachidicola），在我国南北的各大花生产区均有发生，已成为生产上严重的叶部病害。为筛选产孢效率高、致病力强的菌株，研究病原菌进化机制和环境适应性，从来自不同地区的花生网斑病叶片样本中分离病原菌菌株，研究分生孢子及致病力差异。结果表明，18个菌株中YY187的产孢时间最短，22℃黑暗条件下燕麦琼脂培养基培养7 d即可产孢；菌株YY187和NY206产生的分生孢子器数量显著多于其它菌株；采用孢子悬浮液接种花生叶片，供试所有菌株均可造成叶片发病，其中菌株LY128和YY187在供试18个菌株中致病力相对较强。因此，综合评价产孢效率更高、致病力更强的本地菌株YY187适合作为花生抗网斑病研究的材料。     

花生抗网斑病品种筛选及抗病性与产量损失的关系

花生茎点霉（Phoma arachidicola Marasas Pauer & Boerema）引起的花生网斑病在生产上普遍流行、危害严重,2018-2019年通过2年的田间接种试验对国内65份花生种质资源网斑病抗性进行测评。以采自山东莱西的病原菌菌株Wb2制备105/mL的孢子悬浮液喷洒于花生叶片表面进行接种,对照区喷施50%咯菌腈WP防治花生网斑病菌。结果表明,65份种质中,抗病（resistant,R）资源8份,占鉴定资源总数的12.3%;中度抗病（moderately resistant,MR）资源9份,占比13.8%;感病（susceptible,S）资源37份,占比56.9%;高度感病（high susceptible,HS）资源11份,占比16.9%。测定抗病性不同资源产量损失差异,结果表明,花生网斑病菌对花生产量影响显著,产量损失率随抗病性的降低而升高。本研究为花生抗网斑病育种提供抗源材料,并为病害产量损失评估提供理论依据。     

白绢病菌在花生品种间致病力分化和广谱抗性品种筛选

为探讨白绢病菌菌株在花生品种间的致病力差异，本研究将强、中和弱致病力菌株田间接种不同抗病性花生品种后考察发病严重度。结果表明，白绢病菌株接种后14 d为最佳调查时间；强致病力菌株ZY2、SQ1和弱致病力菌株GP3-1在所测试的10个花生品种间病情指数差异不显著，而中等致病力菌株（HA、H1-3和BL1-1）在品种间病情指数差异显著。弱致病力菌株GP3-1对各品种的致病力较弱；强致病力菌株能导致供试品种抗性的丧失；中等致病力菌株在抗感品种间的致病力存在分化。本实验筛选出1份对中等致病力菌株存在广谱抗性的花生品种。     

不同处置条件对稻瘟病菌致病力的影响

通过选取属于不同生理小种的6个稻瘟病菌株研究pH值变化、高温处理、放置温度及放置时间等不同处置条件对其致病力的影响。结果表明,菌株孢子悬浮液pH值升高或降低都可以导致菌株致病力减弱,但pH值升高更有效;大部分稻瘟病菌株孢子悬浮液在4℃放置20 d以上或20℃放置10 d以上致病力均丧失,而菌株P131孢子悬浮液4℃或20℃放置20d仍具有致病能力;大部分菌株在煮沸30min后即丧失致病能力,但菌株HN52与P131在煮沸1h后虽然致病力下降,但仍保持有致病能力,而用灭菌锅在121℃下处理20 min后所有菌株致病力均完全丧失。因此,灭菌锅高温灭菌是灭活稻瘟病菌最直接有效的方式。     

花生网斑病菌侵染对寄主防御酶活性的影响

本文采用光密度法对花生受网斑病菌侵染后,寄主体内相关防御酶系活性的变化进行了研究,目的是进一步认识PAL（苯丙氨酸解氨酶）、PPO（多酚氧化酶）和POD（过氧化物酶）等酶与花生网斑病抗性的关系及特性。结果表明,接种网斑病菌后花生体内的防御酶活性普遍升高,本试验研究测定酶系在24～72h内均有最大值出现。但抗病品种一般比感病品种防御酶活性升高快,到达活性高峰早。     

灰斑病菌对大豆叶片总多酚和总黄酮的诱导研究

利用大豆灰斑病菌不同致病力的生理小种接种抗感不同的大豆品种,结果表明:大豆叶片内总黄酮类物质的含量与品种的抗病性呈明显正相关;感病品种叶片内总多酚含量变化显著降低,抗病品种总体变化不大.接种致病力强的生理小种能够大幅度提高抗病品种体内总黄酮含量,这一结果可以作为筛选和鉴定抗病品种的一种生化指标;大豆灰斑病菌弱毒菌株能够诱导感病品种体内总黄酮含量提高,进而提高大豆的抗病性,这一结果为大豆灰斑病的生物防治提供了依据.     

不同抗性花生感染网斑病菌的酶活性及丙二醛含量变化

研究表明,接种网斑病菌后花生植株体内发生了一系列的生理变化。花生接种网斑病菌后叶片的叶绿素含量下降,光合强度降低。植株体内的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）活性和丙二醛（MDA）含量均较对照有所提高,而且抗病品种群育101的SOD酶和POD酶活性值高于感病品种鲁花8号,但MDA含量低于鲁花8号。     

网斑病菌侵染对花生几丁质酶诱导的研究

选取花生品种群育54和潍花8号的幼苗,进行网斑病菌接种和不同浓度水杨酸溶液的诱导处理后,测定两个品种几丁质酶活性。结果表明,经诱导处理后,两品种叶片几丁质酶活性均有提高,群育54酶活性水平提高幅度远大于潍花8号。几丁质酶活性在网斑病菌侵染后6d达到峰值,可提高3～5倍;水杨酸处理后48h达到峰值,可提高5～10倍。不同浓度水杨酸对两个品种几丁质酶活性诱导效果有差别,1.5mmol/L水杨酸溶液处理后48h几丁质酶的活性达到最高。     

花生青枯菌致病性的研究

从我国六个省的花生青枯病发生地区采集的36个花生青枯菌分离株,通过对六个不同抗病性的鉴别品种进行人工接种表明,所有菌株对鉴别品种均具有不同程度的致病力,菌株致病性分化十分明显。根据致病性的不同反应,可以划分为7个致病型,其中的V型和Ⅱ型出现率最高达36.1%和25%。且分布地区相当广泛,为我国花生青枯菌占优势的致病型。试验证明,我国南方病区菌株的致病力普遍比北方强;同一地区可以有不同致病型菌株混合存在;同一母株在不同的地理环境影响下,致病力会发生变化。通过7个省13处自然病圃的品种抗病性鉴定表现,所获结果与人工接种结果基本相同。只是在自然环境条件影响下,菌系的致病性分化更为复杂,出现的致病型更多。本试验为青枯菌系的研究,深入开展花生抗青枯病鉴定,发掘新抗源,加快抗病育种工作进程以及设计综合防治技术措施提供了依据。     

吉林省玉米灰斑病菌的致病性分化研究

选用9个自交系材料作为玉米灰斑病致病性分化的鉴别寄主,对采自吉林省不同地区的14个菌株进行致病性分化研究。结果表明,不同菌株侵染寄主病斑表现不同的反应型,不同菌株间致病力存在差异。根据在鉴别寄主上的发病等级可将吉林省玉米灰斑病菌菌株分为5个致病类群,其中,Ⅰ为强致病类型,包括1号和8号菌株;Ⅱ、Ⅲ为中等致病类群,包括7、9、10、12、13、14号6个菌株;Ⅳ、Ⅴ为弱致病类群,包括2、3、4、5、6、11号菌株。玉米灰斑病菌存在明显的致病分化现象。     

玉米螟白僵菌高致病性菌株筛选

对7株寄生玉米螟的白僵菌菌株产孢量、营养生长量、孢子萌发速率生物学特性指标及对玉米螟3龄幼虫致病力进行了测定,筛选对玉米螟高致病性白僵菌菌株。结果表明:不同菌株间存在较大的差异,综合各项生物学特性指标数据,筛选出生物学特性表现优良的高致病性菌株1株,即BC6菌株。BC6菌株产孢量达到18.35×107个/cm2,14 h的萌发率为96.59%,营养生长量为2.722 mm/d。通过对玉米螟3龄幼虫致病力的测定,校正死亡率达到了90%。各项生物学特性指标均显著高于实验室原有对照(CK)菌株,具有工厂化生产潜力和实际应用价值。     

花生矮化病毒株系致病力分化及区域分布

从河南、北京、山东、河北的花生、刺槐、菜豆、紫穗槐上获得的２９个ＰＳＶ分离物，根据它们引起花生症状的严重程度划分成强、中、弱致病力三种类型。不同致病力类型的ＰＳＶ分离物在叶片中病毒相对含量及对花生产量影响有明显差异。河南开封和郑州ＰＳＶ分离物以弱致病力类型为主，河北迁安和滦县ＰＳＶ分离物以强致病力类型为主，而北京、山东两地ＰＳＶ分离物３种类型均有     

稻瘟病菌孢子保存技术

 将载有稻瘟病菌孢子的滤纸置于不同温度和干燥条件下保存,经分期测定,室内干燥保存,经10个月,不论是孢子活力和致病性一般均可维持原有水平。低温干燥保存则能保存更长的时间。这样解决了目前人工接种中稻苗和孢子的培养难以配合的问题。     

Comparison of inoculation methods for field studies on varietal response to verticillium wilt of potatoes

Verticillium albo-atrum, cultured on potato dextrose agar plates or on sterilized wheat kernels, was used to incite disease in field studies. Immediately prior to planting, seed potatoes were dipped in a spore/mycelium suspension that was prepared from agar plate cultures. A second inoculation treatment involved placing infested wheat kernels under the potato seed at planting time. Both inoculation methods resulted in verticillium wilt development. However, the inoculum suspension dip method resulted in slightly greater incidences of verticillium wilt than did the infested wheat method. Inoculation by means of a suspension dip immediately after cutting the seed resulted in more wilted plants than when seed was inoculated 24 hours or 7 days after cutting. The spore/mycelium suspension dip method is now routinely used for field studies on disease susceptibility or resistance in potato cultivars.     

水稻穗瘟离体接种技术研究

水稻品种叶瘟鉴定,先后已应用了喷雾、注射、钳叶、针刺、涂抹等多种接种方法,鉴定效果良好。但在自然状态下采用注射、喷雾、湿棉球包穗等接种方法鉴定穗瘟,还遇到品种间抽穗期不一致和接种条件难以控制的难题。因此,目前常以诱发叶瘟的抗性来评价品种抗瘟性。叶瘟和穗瘟抗性虽有较高的相关性,但也存在一定的差异,使叶瘟鉴定结果并不能完全反映穗瘟抗生。但品种抗性的评价以穗瘟抗性最为重要,因此,研究穗瘟抗性鉴定的简易技术十分必要。     

水稻穗腐病菌强致病力且高产伏马菌素菌株筛选

目的 旨在确立稳定高效的水稻穗腐病人工接种技术,鉴定不同菌株致病力。利用已有的伏马菌素检测方法分析测定两种培养基中不同菌株的伏马菌素合成能力,基于上述方法筛选强致病力高产伏马菌素菌株。方法 分别在水稻孕穗期和抽穗期采用注射法和喷雾法接种,观察不同时期、不同接种方法下层出镰刀菌的致病性和稳定性;利用适合的接种方法和液相色谱-串联质谱检测法比较不同菌株的致病力和产毒能力。结果 在花粉母细胞减数分裂期-花粉母细胞成熟期采用注射法接种水稻穗腐病,发病率较高且稳定;在花粉母细胞形成期-始穗期接种对水稻产量影响较大。基于该方法成功筛选出了强致病力菌株FP4、FP6、FP8、FP9、FP10;经HPLC-MS/MS分析测定了层出镰刀菌产生伏马菌素能力,获得了强致病力高产毒菌株FP4和FP9。稻谷培养基比玉米培养基更适合层出镰刀菌合成伏马菌素。结论 水稻穗腐病初侵染为花粉母细胞形成期-花粉母细胞减数分裂期,最佳侵染时期为花粉母细胞形成期-齐穗期;穗腐病对水稻产量的影响与感病时期密切相关。     

假禾谷镰孢菌的分离及其对小麦茎基部和穗部的致病力分析

假禾谷镰孢菌(Fusarium pseudograminearum)是黄淮麦区小麦茎基腐病的优势病原菌。为比较假禾谷镰孢菌对小麦茎基部和穗部的致病力,选取实验室前期分离并保存的272个假禾谷镰孢菌菌株,通过室内小麦苗期茎基部接种法和田间扬花期穗部单花滴注接种法对其进行致病力检测。室内苗期茎基部接种结果显示,强、中等和弱致病力的菌株分别有109、137和26个。选择在小麦苗期茎基部表现为强、中等和弱致病力的菌株各17个,通过田间穗部单花滴注接种法检测其对小麦穗部的致病力,结果表明,51个菌株在小麦穗部均可致病,并引起不同程度的枯白穗症状,其中强、中等和弱致病力菌株分别有18、21和12个。进一步对小麦茎基部和穗部的致病力进行比较,发现同一菌株对小麦茎基部和穗部的致病力没有明显相关性。     

山东花生茎腐病病原菌研究

从山东省多地采集的花生茎腐病株上分离到15个茎腐病菌株,选取6个典型菌株,对病原菌进行形态特征、致病性、生物学特性研究。核糖体DNA-ITS序列分析表明,6个菌株的核糖体DNA-ITS序列同源性高达99%。根据病原菌的形态特征、核糖体DNA-ITS序列同源性比较,确认供试6个菌株为同一种病原菌,与GenBank中可可毛色二孢属（Ｌasiodiplodia）（Diplodia的同物异名）的同源性高达99%以上。根据6个菌株的形态特征、致病性测定结果及生物学特性,并结合核糖体DNA-ITS序列分析,将山东花生茎腐病的病原鉴定为棉色二孢菌（Diplodia gossypina )。