条锈菌诱导下的小麦叶片总RNA提取方法的比较及LD-PCR扩增

为寻找一种既能提取到高质量高产量小麦RNA、又能提取到高质量条锈菌RNA的方法,利用Trizol法、Licl法、SDS法和Bizol法分别从条锈菌诱导的小麦叶片中提取了总RNA,并对Trizol法和Bizol法提取的RNA进行了长距离PCR(LD-PCR)扩增.结果表明,Trizol法、Licl法、SDS法和Bizol法提取的RNA产量(μg/100 mg鲜重叶片)分别为4.72、1.15、1.56、10.43 μg/100 mg,Trizol法和Bizol法提取的RNA产量明显高于Licl法和SDS法.Trizol法提取的RNA合成的cDNA片段大小主要集中在0.25～2.0 kb范围内,而Bizol法提取的RNA合成的cDNA片段大小主要集中在0.5～5.0 kb范围内,Bizol法提取的RNA反转录合成的cDNA质量好于Trizol法.Bizol法同样能提取到高质量的条锈菌RNA,而且提取RNA的成本较低.综合各种因素,Bizol法是条锈菌诱导下的小麦叶片总RNA提取的较理想方法.     

一种适合油棕不同组织RNA提取的方法

获得高质量的RNA是开展油棕果实发育相关分子生物学基础研究的重要前提和保障。以油棕成熟果肉、胚乳、胚和胚芽4种组织为材料，分别采用Invitrogen公司的Trizol试剂和MRIP法提取总RNA，并比较其提取效果。结果表明：MRIP法提取的RNA质量较好，其中胚芽中的总RNA提取量高达2 139.0 ng/μL，而胚乳中的含量相比较低，仅为1 083.6 ng/μL；MRIP法的总体提取效果优于Trizol试剂，包括RNA完整性、含量、纯度等，适用于油棕及棕榈科植物总RNA提取。     

qRT-PCR分析莱茵衣藻氮、硫同化相关基因的表达

实验发现,缺氮、缺硫的环境有利于莱茵衣藻油脂的积累,说明与氮、硫同化相关的基因也与油脂合成有着密切的关系。分析了氮、硫同化通路相关基因,选择氮同化相关的6个基因(NAR3、NAR1.1、NII1、NIA1、NIT2、AOX1)以及硫同化相关的6个基因(SULP1、SIR1、SLT1、ARS1、SULTR1、ATS1)进行q RT-PCR分析。对莱茵衣藻CC124以及CC425藻株分别进行缺氮、缺硫处理,Trizol法连续提取4 d的RNA作为模板,进行实时荧光定量PCR检测基因的表达水平。结果发现,这12种基因均较对照上调表达,其中,莱茵衣藻氮、硫运载体基因上调表达非常显著。缺氮条件下NAR3、NAR1.1较正常最高上调表达200倍;缺硫条件下SLT1较对照有1 000~2 000倍的m RNA表达量,SULTR2也最高能增高450倍的表达量。     

玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化

玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。     

甜玉米籽粒总RNA提取方法的比较

[目的]探索获得高质量、高纯度的甜玉米籽粒总RNA的提取方法.[方法]以授粉后20 d的超甜玉米系SY01籽粒为试验材料,比较了RNAiso法、Trizol法、CTAB法3种方法对甜玉米籽粒总RNA的提取效果,用琼脂糖凝聚电泳、Nanodrop2000、Agilent 2100 Bioanalyzer检测了提取的RNA...     

莱茵衣藻氮胁迫基因数字表达谱分析

以正常培养条件下的莱茵衣藻为对照，通过数字表达谱技术对缺氮诱导3 d的藻细胞进行转录水平上的检测，并结合pathway分析。结果表明：差异表达基因共有482个，其中上调表达基因108个，下调表达基因374个；这些差异表达的基因共分布在85个pathways中。此结果为进一步揭示氮元素缺乏诱导微藻油脂积累的分子机理提供有用信息。     

2种提取椰子树RNA方法的比较研究

椰子树组织中富含多糖和酚类化合物，为了获取高质量的RNA，笔者以椰子树叶片和根部为材料，比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明：CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好，能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测，总RNA的28 S和18 S条带清晰可见，纯度较高，完整性好，无明显降解，以此RNA为模板进行RT-PCR反应，能获得特异条带，表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。     

甘蔗原生质体RNA提取条件和方法的优化

为了获得高产量和高纯度的甘蔗原生质体RNA,本研究以新台糖22号（ROC22）和桂糖28号（GT28）甘蔗原生质体为材料,探究了渗透压和原生质体活力对甘蔗原生质体RNA提取效果的影响,并比较了Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法、试剂盒法4种RNA提取方法。结果表明：原生质体渗透压与RNase活性呈显著正相关,原生质体活力与RNase活性呈极显著负相关;RNase活性越高,RNA提取效果越差;使用0.5 mol/L的甘露醇作为渗透压调节剂可获取活力最高的甘蔗原生质体;原生质体活力为70%和90%时所提的RNA完整性好且纯度高,符合后续分子实验的需求,原生质体活力为90%时,RNA产量最高。因此,需要提取甘蔗原生质RNA时,至少需要保证原生质体的活力在70%以上,且原生质体活力越高,RNA的产量越高;采用改良Trizol法,可以大量制备能满足后续分子实验的完整性好且纯度高的RNA,利用该条件和方法,可以确保获得大量高质量的甘蔗原生质体RNA。本研究结果为甘蔗体细胞融合育种过程中的分子生物学研究提供了方法和技术支撑。     

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

植物总RNA的提取是进行下游分子生物学实验的关键基础,高质量的RNA是下游实验成功的保障。许多植物由于其体内含有酚、多糖以及其他的一些次生代谢物,要获得这些植物高质量的总RNA比较困难。本文在多次实验的基础上,提出了改良LiCl沉淀法,该方法步骤少、效率高,使用此方法得到的棉花幼苗总RNA经检测表明其质量比使用冷酚法提取的RNA要高得多,且完全满足后续实验的要求。使用此方法成功提取了香蕉叶片、根、木薯叶片的RNA,经检测表明,所得到的RNA完整性好,完全可以满足后续实验的要求,说明改良LiCl沉淀法是一种适用于多酚多糖植物的快速RNA提取方法。     

锥栗总RNA提取方法比较及LFY基因克隆

锥栗总RNA的提取质量是后期锥栗空棚分子机理研究的关键。以锥栗花序为材料,采用2种植物RNA快速提取试剂盒、改良Trizol法和改良CTAB法提取锥栗总RNA,并采用多种方法检测提取出的总RNA的质量。结果表明:采用改良CTAB法获得的总RNA可明显看到28S和18S条带,且亮度比约为2∶1,DNA基本无残留,点样孔无杂质,OD260/OD280均接近2,而OD260/OD230均超过2,经逆转录可作为模板,获得LFY基因。改良后CTAB法最合适,所得的总RNA产量高、比较纯净、完整,可用于后续的逆转录并进行基因片段的扩增。     

青蒿素抗菌作用研究

目的：青蒿中有多种药用成分,其中的青蒿素具有抗菌、抗寄生虫、解热及促进免疫等作用。且毒性极低,无副作用,青蒿素是最重要生理活性之一。所以研究青蒿素的抗菌作用具有重要意义。方法：用恒温搅拌法提取出青蒿素的样品,然后选用两种典型细菌菌株通过滤纸片法对青蒿素的抗菌作用进行了定性和定量研究。结论：青蒿素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用。且随着浓度逐渐增大抑菌作用也随之加强。     

利用水上栽培方法研究水稻根系

对水上种植条件下的水稻根系的一些性状与水田条件下种植时进行了比较。结果表明,水上水稻的根系数量、根系分枝特性、根粗等形态指标以及根系活跃吸收面积百分比等生理指标与水田水稻根系表现出较好的一致性,而且在整个生育期内的动态变化也呈现出较一致的趋势。说明利用水上种植方法研究水稻根系是可行的,能较好地反映较高产量水平的水稻根系在自然环境条件下的生长情况,因此有望成为今后水稻根系研究的一条简便有效的新方法。     

Allocating the costs of multi-purpose water resource development: a case study of Chi-Chi Weir in Taiwan

Most multi-purpose water resources have been planned and constructed by governments in Taiwan to meet the water demands of different users. However, economic and solvency differences among parties using water create conflicts regarding the reasonable and equitable allocation of investment and operational costs. The Chi-Chi Weir in Nantou County, which was completed in 2002, meets the high water demand of residents and the needs of industrial growth in central Taiwan. Thus, multi-purpose water reservoirs are designed to serve agriculture, the public and industry. Three analytical methods, the quantity-based method, marginal cost method, and separable cost remaining benefit method (SCRB), are employed to compare the cost allocation for different parties using water. The quantity-based method indicates that proportional costs allocated to agriculture, the public, industry and new irrigated areas are 88.02, 3.63, 7.86, and 0.49%, respectively. Via the marginal cost method, the proportional costs allocated to agriculture, the public, hydropower, industry and new irrigated areas are 68.44, 2.51, 28.71, and 0.34%, respectively. The marginal cost price of water is NT$ 2.97 ton⁻¹; industrial use has the highest price. Based on the SCRB method, the proportional costs allocated to agriculture, the public, hydropower, and new irrigated areas are 18.2, 22.2, 51.8, 4.8, and 2.9%, respectively.     

大豆中转基因成分筛查策略研究

转基因大豆是目前我国进口量最大的转基因作物,为避免转基因大豆及制品的违法使用,快速筛查大豆中转基因成分的方法策略亟待开发。为检索已知商业化转基因大豆的外源基因信息,通过构建转基因大豆常用转化元件的数据库,建立了转基因大豆的筛查策略。结果表明:已知的15个转基因大豆转化事件中,利用Ca MV35S启动子、CP4-epsps基因、Bt基因、pat基因4个靶标元件的组合,可筛查12个转基因大豆的转化事件;另有3个转化事件需要使用转化事件特异性引物检测。使用4个靶标元件和转化事件组合的筛查方法检测的灵敏度可达到1 g·kg~(-1),可对大豆中的转化事件进行快速、高灵敏度的筛查。     

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

小麦籽粒DNA提取方法的比较及SSR反应体系的优化研究

为了快速获得较高质量的DNA用于SSR分析,并建立一套稳定的SSR反应体系,以小麦单粒干种子为材料,比较了CTAB法和SDS法获得的DNA条带清晰度和RNA残留带的清晰度;同时,研究了模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度以及Taq酶用量对SSR结果的影响。结果表明,CTAB法微量提取小麦干种子DNA可获得理想的扩增结果;SSR的最佳反应体系是:模板DNA浓度为4.0~4.8ng·μL-1,Taq酶用量为1U,引物浓度为50~200nmol·L-1,dNTPs浓度为50~500μmol·L-1。     

玉米矮花叶病预测预报研究

为了较准确地预测玉米矮花叶病发生流行情况,对该病进行有效控制,根据历史资料和实际调查数据,应用生长模型预测法、马尔科夫链预测法和回归模型预测法对该病进行了预测预报研究,初步建立了玉米矮花叶病流行预测体系.生长模型预测法可对生长到一定阶段后的春玉米进行玉米矮花叶病短中期预测,对夏玉米出苗后即可进行短中期预测.马尔科夫链预测法可对发生程度作概率预测,可作为玉米矮花叶病长期发生趋势预测预报的一个参考.应用回归模型预测法可进行中期预测,预测一个生长季的最终病情。     

Wire frame representation of 3D moulded bra cup and its application to example-based design

Fabric or foam sheet moulding is an important manufacturing technique for the apparel industry, in particular for bra production. It is the most economical and convenient method to seamlessly form a garment part into a specified 3D shape. This paper proposes an example-based method for designing moulded bra cups. In this study, a total of 10 typical moulded bra cup specimens were scanned using the Steinbichler Comet white light scanner. Parameterization based remeshing and registration algorithm was used to characterize the 3D shapes of the convex surface of the scanned bra cups. Using an example-based method, virtual master moulds were constructed based on the 3D surfaces of the investigated bra cups after eliminating the style lines and size differences. Then a new bra cup design can be developed from the master mould, either by drawing the style lines in the virtual environment or using scissors to cut the moulded plastic shot along the desired style lines. Different sizes can also be made by grading the wire frame model in 3D manner. The present method will provide a scientific tool for the product development of new bra cups which was conventionally very time-consuming and ineffective.     

富含多酚类植物RNA提取的研究进展

植物体内广泛存在多糖、多酚等次生代谢物,由于其易被氧化,且难以与核酸分离,导致了RNA提取困难。针对植物多酚类化合物的结构及生物学特性进行分析,将现有的RNA提取方法进行分类,并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。     

马铃薯块茎休眠及其打破的方法

马铃薯块茎借休眠以渡过不利其生长的条件,从而保证世代繁衍的遗传特性。马铃薯块茎的大小和休眠时间的长短影响其商品价值和利用时间,储藏过程中的休眠解除会造成水分、养分大量消耗,以至丧失应用价值。随着生产发展的需要,有关马铃薯休眠的研究已经被提出,了解休眠特征和打破休眠的方法,对于栽培和储藏保鲜具有十分重要的意义。