通过继代培养提高橡胶树体胚诱导频率的研究

橡胶树体胚诱导频率低、正常胚状体比例低是影响橡胶树花药培养的重要限制因子。组织切片结果显示:50 d的愈伤组织生长期实际上应划分为2个阶段:0~30 d为愈伤诱导阶段,30~50 d为胚性表达和愈伤增殖阶段,因此本试验以30 d的橡胶树花药愈伤组织为材料,通过继代培养基的正交筛选,探索通过继代培养提高橡胶树体胚分化频率的途径。试验结果显示:橡胶树初代花药愈伤组织经过优化后的继代培养基继代培养1次后,分化的胚状体是不继代培养分化胚状体数量的4.29倍,而其中正常胚状体的数量是不继代的2.4倍。继代培养基包含4种激素,以6-BA的影响最大,其次为KT。优化的愈伤继代培养基为改良MS培养基添加6-BA0.1 mg/L+KT 0.3 mg/L+3,4-D 0.3 mg/L+ABA 0.013 mg/L。与传统橡胶树花药再生体系相比,本试验增加了愈伤组织继代这一程序,并摸索了适宜的继代培养基配方,使花药再生体系更加符合实际花药培养发育的过程,以提高橡胶树胚状体分化频率,促进橡胶树体胚苗产业的发展。     

小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性的影响因素

为建立稳定、高效的小麦幼胚愈伤组织继代分化体系,以4个小麦品种为材料,对影响普通小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性的因素进行了研究。结果表明,碳源、有机添加物、诱导和继代间隔时间及基因型对小麦幼胚愈伤组织的分化和继代分化特性有显著影响。1.5%蔗糖和1.5%麦芽糖配合使用,小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化效率显著高于3%蔗糖和3%麦芽糖单独使用的分化效率;4种有机添加物对小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性均有正向增加效应,其中,诱导培养基中分别添加500mg·L-1酸水解酪蛋白、250mg·L-1 L-谷氨酰胺和250mg·L-1 L-天门冬酰胺的正向效应显著,愈伤组织分化率分别比对照提高17.5%、15.2%和14.2%,继代3次后的愈伤组织分化率比对照显著提高了93.9%、73.6%和52.8%;诱导分化和继代诱导分化的时间是小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性重要的影响因素之一,诱导15d和继代间隔15d的愈伤组织分化和继代分化率显著高于20d和25d,且随诱导和继代间隔时间的延长,愈伤组织分化率迅速下降;供试4种基因型材料的愈伤组织分化和继代分化特性有显著差异,供试品种千斤早和小偃22愈伤组织分化特性较好,扬麦12和扬麦18继代愈伤分化特性较好,愈伤组织分化和继代分化特性的表现无相关性。     

桂竹香花器离体培养的研究

以桂竹香花柄，花瓣，花丝为外植体，研究不同激素对诱导愈伤组织和不定芽的影响，研究结果表明，4种外植体均能形成愈伤组织，但愈伤组织的发生率，发生部位及形态等表现差异，花柄愈伤组织继代MS＋2，4－D＋BA培养基，可分化产生不定芽，出芽率78％－82％，再生小苗在1／2MS＋NAA 0．5mg/L培养基中生根形成再生植株。     

花生不同外植体芽诱导制约因素研究

以花生品种远杂9102成熟种胚发芽12d、4d的幼叶为外植体,对花生幼叶不定芽诱导制约因素进行了研究,结果表明,采用较高浓度的6-BA（8mg/L）、较低浓度的NAA（1mg/L）,不定芽诱导率可达70%以上。最佳诱导培养基为MS＋6-BA8mg/L＋NAA0.5mg/L＋AgNO32mg/L 最佳继代培养基为MS＋6-BA5mg/L＋NAA2mg/L＋AgNO32mg/L。同时试验发现种子预培养4d的幼叶不定芽诱导率较预培养12d的高 花生幼叶近叶柄基部切口处不定芽诱导率较高,是较理想的不定芽诱导部位。以远杂9102预培养2d的子叶作外植体,对愈伤组织诱导及分化进行试验,确定MS＋6-BA4.5mg/L＋2,4-D2.2mg/L为诱导愈伤的最佳培养基,愈伤组织诱导率达79.8%,最佳分化培养基为MS＋KT（0.15mg/L）。     

燕麦新品种燕科一号组织培养特性及再生体系研究

为建立燕麦遗传转化的高效植株再生体系，选用裸燕麦新品种燕科一号的幼穗进行组织培养特性和再生体系研究。结果表明，在6种诱导培养基上愈伤组织状态和诱导率差异不大；在进一步继代培养过程中愈伤组织出现明显差异，其中培养基Y2和J结合培养效果好；愈伤组织分化产生绿色芽点和绿苗，二者分化率呈显著正相关；绿苗分化适宜的激素配比是6-BA0．5mg／L＋KT0．4mg／L＋NAA0．4mg／L，有84．90％的愈伤组织分化成苗，其中KT的作用较6-BA、NAA强；在1／2MS培养基上再生苗容易生根，生根率达到89．64％，移栽成活率91．05％；幼穗取样以0．5～1．0cm最为理想。     

琼脂浓度对水稻愈伤组织植株再生率和内源激素含量的影响

 以盐粳2号脱壳种子为外植体研究了培养基不同浓度琼脂对愈伤组织植株再生率的影响及可能的机理。在分别进行脱分化、分化和继代培养基中琼脂浓度试验时，当琼脂从0.5％提高到1.0％ 植株再生率均显著升高。在继代和分化培养基琼脂浓度均为1.0%时植株再生率最高，而脱分化培养基0.5%或1.0%琼脂和分化培养基1.0%琼脂 组合，再生率最高，两者均为1.0% 琼脂反而降低。试验还表明，随着培养基中琼脂浓度提高，愈伤组织含水量显著降低而脯氨酸含量上升。较高浓度（1.0%）琼脂继代培养的愈伤组织内源ABA含量显著高于较低浓度（0.5%）琼脂的，而ZRs含量则显著较低。同样，在分化培养过程中，较高浓度琼脂分化培养的愈伤组织内源ABA含量显著地高于较低琼脂的，而ZRs含量则相反，但差异不显著。 V 关键词：琼脂浓度：精     

台湾释迦的离体培养与植株再生

选取台湾释迦实生苗的不同部位为外植体进行离体培养与植株再生研究。结果表明：诱导台湾释迦愈伤组织的最佳外植体为下胚轴,最适愈伤组织诱导培养基为MS＋6．BA0．5mg／L＋2,4．D2mg／L;愈伤组织分化培养基为MS＋6．BA2mg／L＋NAA0．1mg／L;增殖培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L;生根培养基为1/2MS＋NAA0．2mg／L。     

小麦幼胚培养基因型的筛选

为了筛选出小麦幼胚培养和转基因受体材料的优良基因型，以19个小麦品种的幼胚为材料，采用多种诱导和分化培养基进行组织培养，井于分化前对部分愈伤组织进行了冷冻、干燥和置于分化培养基上暗培养等物理处理，研究了基因型、培养基及二者的互作效应等因素对愈伤组织的诱导、分化和植株再生的影响。结果表明，不同基因型间差异显著。其中89(117)在组织培养时反应良好，幼胚愈伤组织的绿原基分化率和出苗率分别为83．3％和32．2％，显著高于19个品种的平均值72．5％和19．6％，立该品种幼胚的出愈率和再生苗生根率也很高，可作为幼胚培养和转基因受体材料的优良基因型；同时，基因型与分化培养基问存在显著的互作效应，如：89(117)、豫麦66和豫麦18—64的出苗率在培养基I、G和E上分别高达61．3％、52．8％和43．6％，而在培养基D、F和C上则只有13．3％、7．4％和21．4％。因此，在筛选优良基因型时应同时筛选出适合于该基因型的培养基。本试验中适于品种89(117)的培养基为：诱导培养基Ⅳ(激素组合为：2，4—D2mg/L ABA0．5mg/L)、继代培养基①(激素组合为：2，4—D 1mg/L ABA0．5mg／L KT lmg／L)和分化培养基A、B、G或I。研究结果还表明，光照分化培养前的干燥和冷冻处理对愈伤组织快速分化出苗有很大的促进作用。     

绿绒海芋Alocasia micholitziana的组织培养及其植株再生的研究

以绿绒海芋Alocasia micholitziana的叶片、叶柄为外殖体,研究不同灭菌剂对外殖体消毒效果的影响、不同激素及浓度配比的培养基对愈伤组织诱导、不定芽分化及增殖的影响。结果表明：（1）消毒处理时叶柄适于用0.1％ HgCl2浸泡处理8 min,叶片则为7 min;（2）叶柄、叶片在所试培养基中均能诱导出愈伤组织,最佳诱导培养基为MS+2 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,叶柄愈伤组织诱导率可达100％;（3）从愈伤组织诱导不定芽的最佳培养基为MS+2 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA,诱导率可达100％;（4）在培养基MS+2 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA上,芽增殖效果最佳,苗生长健壮;（5）最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L IBA,移栽后苗容易成活;（6）苗移栽时以泥炭土 ∶ 珍珠岩 ∶ 蛭石(3 ∶ 1 ∶ 1)成活率较高,可达98％以上,而且小苗生长健壮。     

玉米成熟胚愈伤组织诱导及褐化控制研究

玉米成熟胚组织培养过程中发生褐化可影响愈伤组织的诱导、生长和组培过程的进行。实验研究探讨3种防褐剂硝酸银(AgNO3)、活性炭和PVP及培养条件对玉米成熟胚愈伤组织诱导和继代过程中褐化控制的作用。结果表明,一定浓度的AgNO3能明显减轻褐化,其中愈伤组织诱导时10.0 mg/LAgNO3控制外植体褐化的效果最佳;愈伤组织继代培养时7.0 mg/LAgNO3控制较为适宜。2.0 g/L活性炭能有效抑制外植体的褐化,高于此浓度会抑制愈伤组织的诱导;继代培养初期在含2.0 g/L活性炭的培养基中培养7 d,不仅能有效控制褐化,还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。愈伤组织诱导时1.0 g/LPVP能在有效控制外植体褐化的同时促进愈伤组织的形成。暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的诱导。     

提高农杆菌转化水稻频率几个因素的研究

以6个重要的籼稻和粳稻品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的几个重要因素。结果表明,对于籼稻品种而言,CC培养基是愈伤组织的最适诱导培养基;添加1.0~2.0 mg/L ABA能有效地改善愈伤组织的质量;在继代培养基中添加山梨醇能改善愈伤组织的生长状态,降低愈伤组织的褐化。而对于粳稻品种来说,适宜的诱导培养基是NB培养基,添加ABA对愈伤组织的改善效果不明显,对于多次继代的愈伤可以适当增加蔗糖浓度以提高抗性愈伤率。此外,在筛选时期适当加大筛选压力,分化时去掉筛选压力,壮苗时加适当的选择压力,可提高转化率。在分化时,采用适宜的激素配比有利于提高分化率。应用所优化的农杆菌转化系统,获得了一些有价值的转化植株。     

Factors Affecting Agrobacterium-Mediated Transformation Efficiency in Rice

Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient /Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained.     

Factors Affecting Agrobacterium-Mediated Transformation Efficiency in Rice

Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained.     

ABA和AgNO3对小麦幼胚愈伤组织诱导和分化的影响

为解决河南小麦生产上三个主导品种（豫麦18号、豫麦49号、兰考906）生物技术改良的技术瓶颈问题。研究了不同浓度的ABA和AgNO3处理对上述三个小麦品种幼胚愈伤组织诱导和分化特性的影响。结果表明。添加0．1mg／LABA的诱导培养基以及在添加0．1mg／l ABA的基础上再添加2．5mg／L或5．0mg／LAgNO3的诱导培养基对幼胚愈伤组织形成和分化最为有利，但不同基因型在相同的处理下幼胚愈伤组织诱导率和分化率仍存在较大的差异。     

红杨桃胚乳愈伤组织的诱导和三倍体植株再生

以红杨桃成熟干种子为材料,萌发后剥离胚乳进行培养。结果表明,最佳诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D　2mg/L+BA 0.2mg/L,诱导频率可达93.5％:将淡绿色致密的愈伤组织转至MS+ZT　3mg/L+NAA0.2mg/L的培养基上,经连续继代后,形成芽原基并发育成小植株,壮苗后取茎尖染色体显微观察,证明再生植株多为三倍体,其发生频率可达73.7％。      

水田七的组织培养和植株再生

用水田七成熟种子为材料进行无菌播种,得到无菌苗再用幼叶、叶柄为材料进行组织培养和植株再生。经试验得出各阶段适宜的培养基分别为：(1)诱导愈伤组织：MS＋2.0 mg/L TDZ;(2)诱导芽分化：MS＋1.5 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA;(3)生根培养：1/2MS＋0.5 mg /L IBA＋0.1 mg/L NAA。     

云蔗03-194甘蔗组培快繁技术

以甘蔗新品种云蔗03-194的幼嫩叶片作为外植体,采用不同2,4-D浓度对幼嫩叶片的切片进行愈伤诱导,以不同6-BA和KT激素配比对甘蔗愈伤进行分化诱导和增殖培养,以不同NAA浓度及香蕉汁添加量诱导甘蔗组培苗生根。结果表明:适宜甘蔗幼嫩叶片愈伤诱导的培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L,诱导分化培养以MS+6-BA1mg/L+KT 0.5 mg/L为宜,增殖培养以6-BA 2.0 mg/L+KT 1.0 mg/L为宜,适宜的生根培养基为MS+NAA 1.5mg/L+30mL香蕉汁。以河沙:红壤土(2∶1)为假植基质,假植成活率达92%～96%,植株生长健壮,长势良好。     

狗尾草胚性愈伤高效农杆菌转化体系的建立

狗尾草是研究C4光合作用的优秀模型,具有热带植物的典型特征,也可作为研究热带作物的重要模型,高效的转基因技术是模式植物广泛服务于科研的基础,目前狗尾草作为模式植物的研究在国外越来越热门,但在国内还没有被关注。但作为模式植物狗尾草现有的转化技术还不完善,转化周期有待缩短,转化效率需要进一步提高。本研究以狗尾草ME34品系不同阶段胚性愈伤为外植体进行农杆菌转化体系研究,通过实验大大提高了狗尾草的转化效率,缩短了转化周期,为狗尾草转基因研究提供了新的技术方法,新方法主要包括以下技术环节:高效胚性愈伤诱导技术,受体胚性愈伤的选择,适宜转化的农杆菌株系及培养条件,浸染和共培养条件与方法,抗性愈伤筛选条件,抗性愈伤成苗条件等。     

洁净DNA转化获得2mG2-epsps基因单拷贝整合的抗草甘膦水稻

洁净DNA转化是基因枪介导外源基因表达框导入植物的转化技术,能从根本上消除载体框架序列对转基因植株的不利影响。2mG2-epsps基因是具有重要育种价值的草甘膦除草剂抗性基因。以日本晴为材料,研究了草甘膦对水稻愈伤组织生长及分化的影响,采用洁净DNA转化技术将2mG2-epsps基因表达框导入水稻。结果表明:1)草甘膦对水稻愈伤组织的生长及分化有明显的抑制作用,当草甘膦浓度为2mmol/L时,愈伤组织绿苗分化率为18.97%,较对照71.67%显著降低。2)基因枪介导2mG2-epsps基因表达框转化水稻时,经草甘膦筛选获得抗性愈伤后,在植株再生培养基中去除筛选剂利于抗性愈伤的分化,转化率为17.20%。经Southern杂交分析,2mG2-epsps基因表达框均以单拷贝整合到受体基因组。52.17%(12/23)转基因株系可耐受12~50mmol/L的草甘膦。