水稻细菌性条斑病非寄主抗性基因Rxo1的双右边界双元载体的构建

Rxo1 是从玉米中克隆的水稻细菌性条斑病非寄主抗性基因。采用ScaⅠ和NgoMⅣ酶切携带Rxo1 基因的载体pCAMBIA1305 1,HpaⅠ和XmaⅠ酶切双右边界双元载体pMNDRBBin6,通过平端和黏性末端连接目的基因和载体,得到了重组载体pMNDRBBin6 Rxo1。 PCR和限制性内切酶酶切以及序列测定证实Rxo1 整合到了双右边界载体pMNDRBBin6中。该载体为利用转基因技术获得无选择标记抗细菌性条斑病水稻育种材料提供了条件。     

细菌性条斑病非寄主抗性基因Rxo1在水稻中同源序列的表达和遗传定位分析

利用在玉米中克隆到的一个抗水稻细菌性条斑病的非寄主抗性基因Rxo1中含有NBS LRR结构的开放读码框（ORF）在水稻基因组中搜索到16个抗性基因同源序列,进一步研究发现,位于第11染色体上的同源序列基因RPR1与细菌性条斑病的抗性有一定关系。首先,以RPR1为模板设计的两对引物都只在供试的细菌性条斑病抗病品种中扩增出目标带;再者RT PCR的结果表明RPR1的表达能被细菌性条斑病菌接种所诱导,说明来自不同物种的结构相似的抗性基因可以表达相同或相似的功能。但从对RPR1定位的结果看,RPR1与之前定位的抗细菌性条斑病主效QTL之间尚有9 cM的图距,两者之间的连锁并不紧密,说明RPR1的表达并不能解释抗病品种Dular对细菌性条斑病的抗性,RPR1并不是水稻表达细菌性条斑病抗性的关键因子。     

细菌性条斑病非寄主抗性基因Rxo1在水稻中同源序列的表达和遗传定位分析

 利用在玉米中克隆到的一个抗水稻细菌性条斑病的非寄主抗性基因Rxo1中含有NBS LRR结构的开放读码框（ORF）在水稻基因组中搜索到16个抗性基因同源序列，进一步研究发现，位于第11染色体上的同源序列基因RPR1与细菌性条斑病的抗性有一定关系。首先，以RPR1为模板设计的两对引物都只在供试的细菌性条斑病抗病品种中扩增出目标带；再者RT PCR的结果表明RPR1的表达能被细菌性条斑病菌接种所诱导，说明来自不同物种的结构相似的抗性基因可以表达相同或相似的功能。但从对RPR1定位的结果看，RPR1与之前定位的抗细菌性条斑病主效QTL之间尚有9 cM的图距，两者之间的连锁并不紧密，说明RPR1的表达并不能解释抗病品种Dular对细菌性条斑病的抗性，RPR1并不是水稻表达细菌性条斑病抗性的关键因子。     

转磷酸甘露糖变位酶基因提高水稻维生素C含量

维生素C(VC)是人体健康所必需的营养元素。人类由于缺乏VC合成途径中的最后一种酶(L-古洛糖酸内酯氧化酶),自身不能合成VC。水稻是重要的粮食作物,增加水稻种子中VC含量,能够提高其营养价值。磷酸甘露糖变位酶(PMM)是VC合成通路中一种重要的酶,催化甘露糖-6-磷酸到甘露糖-1-磷酸的转变。将水稻PMM基因(OsPMM)构建在双右边界双元载体pMNDRBBin6上,并用种子特异表达的启动子BX14驱动其表达。通过农杆菌介导的转化系统,OsPMM基因被转入粳型三系恢复系C418中。通过分子检测,在T_2代筛选到了无选择标记的转基因植株。对OsPMM基因在转基因植株中的表达进行分析,发现OsPMM基因在转基因水稻种子内的表达水平明显提高,相应地,转基因系种子中的VC含量也提高了25%~50%。     

基于QTL-Seq的水稻抗细菌性条斑病QTL定位

【目的】发掘水稻抗细菌性条斑病新基因，丰富抗病基因资源，为水稻抗细菌性条斑病基因克隆及分子育种提供依据。【方法】以抗病材料广西普通野生稻WP1和感病品种9311及其衍生的F8:9代RIL群体为研究材料，利用QTL-Seq初定位与细菌性条斑病抗性相关的区间，之后利用QTLIciMapping4.1进行复合区间作图以验证结果并精细定位。【结果】分别在第4、8、10染色体上鉴定了一个与细菌性条斑病抗性相关的位点，复合区间作图验证了第4染色体抗细菌性条斑病QTL位点qBLS4.1，表型贡献率和LOD值分别为10.65%和5.03，并进一步将qBLS4.1精细定位在521kb的范围内。抗感亲本序列比对分析发现，在41个基因的编码区共有252个非同义突变，可能与细菌性条斑病抗性相关。【结论】通过QTL-seq分析结合复合区间作图法可以更快速高效地对水稻QTL进行定位，鉴定了一个抗细菌性条斑病性QTL新位点qBLS4.1，为水稻抗细菌性条斑病新基因鉴定与克隆奠定基础。     

栽培稻杂交后代保护酶活性的变化

以抗水稻细菌性条斑病（简称细条病）的普通野生稻DY3和感病轮回亲本9311组合构建了BC2F2群体．分蘖期用针刺法人工接种广西细菌性条斑病菌优势致病型菌株JZ28,选取其中的1、3、5、7、9级植株为材料,在孕穗期接种第2次,研究接种细条病后水稻叶片防御酶活性的变化动态及其与抗病性的关系。结果表明：高抗病1级与高感病9级材料的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）含量与对照亲本时间动态变化趋势相似,而过氧化物酶（POD）活性变化不一致;不同抗病等级之间,苯丙氨酸解氨酶活性和过氧化氢酶活性在极端抗感材料之间差异显著．超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性和丙二醛含量差异不显著．     

细菌性条斑病侵染后普通野生稻与栽培稻杂交后代保护酶活性的变化

以抗水稻细菌性条斑病（简称细条病）的普通野生稻 DY3 和感病轮回亲本 9311 组合构建了 BC2F2 群体, 分蘖期用针刺法人工接种广西细菌性条斑病菌优势致病型菌株 JZ28, 选取其中的 1、 3、 5、 7、 9 级植株为材料,在孕穗期接种第 2 次, 研究接种细条病后水稻叶片防御酶活性的变化动态及其与抗病性的关系。 结果表明： 高抗病 1 级与高感病 9 级材料的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、 超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）含量与对照亲本时间动态变化趋势相似, 而过氧化物酶（POD）活性变化不一致; 不同抗病等级之间,苯丙氨酸解氨酶活性和过氧化氢酶活性在极端抗感材料之间差异显著, 超氧化物歧化酶、 过氧化物酶活性和丙二醛含量差异不显著。     

水稻细菌性条斑病的综合防治

水稻细菌性条斑病的综合防治Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｔｒｅａｋｉｎｒｉｃｅ谢立平（福建省建瓯市良种场３５３１００）近年来水稻细菌性条斑病呈上升趋势。本人从多年防治实践中摸索出一套行之有效的综合防治措施，不仅有效...     

四个籼稻品种对细菌性条斑病的抗性遗传研究

 对水稻细菌性条斑病表现高抗的 Dular、IR26、IR36和IR1545-339 等4个籼稻品种与感病品种金刚30杂交并分别与双亲回交，获得F₁、F₂、BC₁和BC₂。在隔离网室用细菌性条斑病菌株RS-68接种不同世代群体，根据其抗感反应推断：IR36的抗病性是由一对隐性主效基因控制的，Dular、 IR26和IR1545-339三个品种的抗病性分别由一对显性基因控制，Dular和IR1545 339的抗病基因呈非等位关系     

南繁水稻细菌性条斑病发生特点及综合防控对策

介绍了南繁基地水稻细菌性条斑病的症状、病原和发生流行特点,提出了综合防控措施。     

Construction of Double Right-Border Binary Vector Carrying Non-Host Gene Rxol Resistant to Bacterial Leaf Streak of Rice

Rxol cloned from maize is a non-host gene resistant to bacterial leaf streak of rice. pCAMBIA1305-1 with Rxol was digested with Sca Ⅰ and NgoM Ⅳ and the double right-border binary vector pMNDRBBin6 was digested with Hpa Ⅰ and Xma Ⅰ.pMNDRBBin6 carrying the gene Rxol was acquired by ligation of blunt-end and cohesive end. The results of PCR, restriction enzyme analysis and sequencing indicated that the Rxol gene had been cloned into pMNDRBBin6. This double right-border binary vector,named as pMNDRBBin6-Rxol, will play a role in breeding marker-free plants resistant to bacterial leaf streak of rice by genetic transformation.     

Construction of Double Right-Border Binary Vector Carrying Non-Host Gene Rxo1 Resistant to Bacterial Leaf Streak of Rice

Rxo1 cloned from maize is a non-host gene resistant to bacterial leaf streak of rice. pCAMBIA1305-1 with Rxo1 was digested with Sca I and NgoM IV and the double right-border binary vector pMNDRBBin6 was digested with Hpa I and Xma I. pMNDRBBin6 carrying the gene Rxo1 was acquired by ligation of blunt-end and cohesive end. The results of PCR, restriction enzyme analysis and sequencing indicated that the Rxo1 gene had been cloned into pMNDRBBin6. This double right-border binary vector, named as pMNDRBBin6-Rxo1, will play a role in breeding marker-free plants resistant to bacterial leaf streak of rice by genetic transformation.     

OsDUF500基因沉默提高水稻对白叶枯病的抗性

 以编码HarpinXoo 的hrf1转基因水稻NJH12的cDNA为模板,克隆到了DUF500的保守功能区。序列分析表明,OsDUF500是DUF500家族成员,功能未知。构建OsDUF500的沉默载体,用土壤根癌农杆菌介导的方法转化粳稻 R109,用Hpt抗生素做抗性筛选,获得9个再生株系。经分子鉴定,8个为沉默株系（ABD 2~9）。与野生型相比, ABD株系株高变矮,叶片变短,出现白色空秕谷。白叶枯病抗性鉴定结果表明,OsDUF500沉默株系对水稻白叶枯病的抗性存在差异,病斑长度比野生型明显缩短,病斑面积均在30%以下,株系ABD 3和ABD 5病斑面积分别为12.3%和15.7%,显示出较好的抗性。推测在稻瘟病抗性中上调表达基因OsDUF500对水稻白叶枯病抗性起负调控作用。     

水稻细条病田间抗性鉴定及指标评价

以50份水稻材料为研究对象进行田间细条病抗性观察鉴定，对病斑占总叶面积率(病斑占比)、病斑长度、病叶率和病情指数等抗性指标进行相关和主成分分析，研究3个指数间及其与剑叶宽度的相关性。结果表明：病斑占比是田间评价细条病发病情况的理想指标；病斑长度是唯一与剑叶宽度存在极显著相关的指数；按照病斑占比(IRRI标准)，5份材料L424、L425、L427、L433和L443表现为中抗(10%)，15份表现为中感(30%)，20份表现为感病(40%)，10份表现为高感(20%)。     

利用共转化和花药培养技术快速获得无选择标记的三价转基因水稻

采用农杆菌介导的水稻转化体系,将包含选择标记潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）和目的基因人乳铁蛋白(hLF)、高赖氨酸(SB401)、高甲硫氨酸(RZ10)基因的双T DNA表达载体p13HSR转化水稻。筛选潮霉素磷酸转移酶基因和目的基因都是阳性的转基因植株,按单株进行花药培养,快速得到无选择标记而目的基因阳性的转基因纯合植株,得率为987％。RT PCR检测结果显示外源基因已整合到转基因水稻基因组中并转录。同时观测到三价表达载体在转化过程中部分目的基因丢失。